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1.安徽中医药大学 药学院,合肥 230012
2.安徽道地中药材品质提升协同创新中心,合肥 230012
3.安徽中医药大学 药物代谢研究所,合肥 230012
* 王红松,硕士,副教授,从事中医方剂学研究,E-mail:wanghongsong@ahtcm.edu.cn
收稿日期:2020-11-25,
网络出版日期:2021-01-25,
纸质出版日期:2021-04-05
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王红松,单晓晓,赵国栋等.半夏白术天麻汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的干预作用及其机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(07):9-15.
WANG Hong-song,SHAN Xiao-xiao,ZHAO Guo-dong,et al.Effect and Mechanism of Banxia Baizhu Tianmatang on Atherosclerosis in ApoE-/- Mice[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(07):9-15.
王红松,单晓晓,赵国栋等.半夏白术天麻汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的干预作用及其机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(07):9-15. DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20210301.
WANG Hong-song,SHAN Xiao-xiao,ZHAO Guo-dong,et al.Effect and Mechanism of Banxia Baizhu Tianmatang on Atherosclerosis in ApoE-/- Mice[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(07):9-15. DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20210301.
目的
2
研究半夏白术天麻汤对高脂饮食诱导的载脂蛋白E敲除(ApoE
-/-
)小鼠动脉粥样硬化的干预作用。
方法
2
高脂饮食建立ApoE
-/-
小鼠动脉粥样硬化模型,给予半夏白术天麻汤进行干预。通过苏木素-伊红(HE),油红O染色和马松(Masson)染色观察动脉粥样硬化病变后主动脉病理形态变化;全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-
α
(TNF-
α
),白细胞介素-6(IL-6)及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)表达水平的变化;提取组织总蛋白、用蛋白定量法(BCA)对蛋白进行定量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达水平;硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量的变化;2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。
结果
2
与正常组比较,模型组血管中有大量的脂质积累,血清中TG,TC,HDL-C和LDL-C水平均明显升高(
P<
0.05),血管中MMP-9蛋白表达显著升高(
P
<
0.01),血清中IL-6和TNF-α的表达水平有所升高(
P
<
0.05,
P
<
0.01),SOD活性显著降低(
P
<
0.01),MDA含量及ox-LDL表达水平升高(
P
<
0.01);与模型组比较,半夏白术天麻汤处理后能抑制血管中脂质的累积;半夏白术天麻汤高剂量组和中剂量组的TG水平降低(
P
<
0.05),且半夏白术天麻汤高、中、低剂量组均能明显降低血清中LDL-C的含量(
P<
0.01),降低血管中MMP-9蛋白的表达(
P
<
0.05)以及血清中IL-6的表达(
P<
0.01),高剂量组能下调血清中TNF-
α
的表达(
P<
0.01),下调ox-LDL的表达(
P<
0.01);半夏白术天麻汤高、中剂量组均能提高MDA含量(
P<
0.05
,P
<
0.01)及SOD活性(
P<
0.05);
结论
2
半夏白术天麻汤对ApoE
-/-
小鼠动脉粥样硬化主动脉斑块形成有一定的干预作用,其机制可能与降低血清TG和LDL-C水平发挥降血脂作用、下调MMP-9蛋白,TNF-
α
,IL-6等保护血管免受炎症损伤、降低ox-LDL,MDA水平及提高SOD活性发挥抗氧化有关。
Objective
2
To study the effects of Banxia Baizhu Tianmatang (BBTT) on atherosclerosis in apolipoprotein-E knockout (ApoE
-/-
) mice induced by high fat diet.
Method
2
The atherosclerosis model of ApoE
-/-
mice was established with high-fat diet, and BBTT was used for intervention. The pathological changes of aorta after atherosclerosis were observed by hematoxylin-eosin (HE), oil red O and Masson staining. The changes of serum total cholesterol (TC), triglyceride (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) were detected by automatic biochemical analyzer. The expression levels of tumor necrosis factor-
α
(TNF-
α
), interleukin-6 (IL-6) and oxidized low density lipoprotein (ox-LDL) were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Total tissue proteins were extracted, quantified by protein quantification (BCA) method, and the expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) protein was detected by Western blot. Thiobarbituric acid (TBA) method was used to detect the change of malondialdehyde (MDA) content. The change of superoxide dismutase (SOD) activity was detected by 2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfobenzene)-2H tetrazole monosodium salt (WST-8) method.
Result
2
Compared with the control group, there was a large amount of lipid accumulation in the blood vessels of the model group, the serum levels of TG, TC, HDL-C and LDL-C significantly increased (
P
<
0.05), the expression of MMP-9 protein in the blood vessels significantly increased (
P
<
0.01), the expression levels of IL-6 and TNF-
α
in the serum increased (
P
<
0.05,
P
<
0.01), the SOD activity was significantly reduced (
P
<
0.01), and the levels of MDA and ox-LDL expression increased (
P
<
0.01). Compared with the model group, the treatment with BBTT could inhibit the accumulation of lipids in blood vessels, the TG levels were reduced in the high and medium dose groups of BBTT (
P
<
0.05), high, medium and low dose groups significantly reduced the levels of LDL-C in serum (
P
<
0.01), the expression of MMP-9 protein in blood vessels (
P
<
0.05) and IL-6 in serum (
P
<
0.01), the high-dose group down-regulated the expression of TNF-
α
in serum (
P
<
0.01) and ox-LDL (
P
<
0.01), both the high and medium-dose groups increased the level of MDA (
P
<
0.05,
P
<
0.01) and the activity of SOD (
P
<
0.05).
Conclusion
2
BBTT has a certain intervention effect on the formation of atherosclerosis aortic plaque in ApoE
-/-
mice, and its mechanism may be associated with reducing the TG and LDL-C levels, lowering blood lipid, down-regulating MMP-9 protein, protecting blood vessels from inflammatory damage, reducing ox-LDL and MDA levels, and improving SOD activity to play an antioxidant role.
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