扶正祛风方通过TGF-<italic style="font-style: italic">β</italic><sub>1</sub>/Smad信号通路抑制膜性肾病大鼠足细胞转分化的机制

郭晓媛; 雷明; 宋子威; 王健; 谢璇; 蔡倩; 王暴魁

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20210403

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扶正祛风方通过TGF-β₁/Smad信号通路抑制膜性肾病大鼠足细胞转分化的机制

药理 | 更新时间：2021-03-29

- 扶正祛风方通过TGF-β₁/Smad信号通路抑制膜性肾病大鼠足细胞转分化的机制
- Mechanism of Fuzheng Qufeng Prescription in Suppressing Epithelial-mesenchymal Transition of Podocytes in Membranous Nephropathy Rats via TGF-β₁/Smad Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第8期页码：57-65
- 作者机构：
  
  1.北京中医药大学东方医院，北京 100078
  2.首都医科大学附属北京康复医院，北京 100041
  3.北京中医药大学，北京 100029
- 作者简介：
  
  郭晓媛，硕士，主治医师，从事肾脏病中医疗效及机制研究，Tel：010-67689739，E-mail：jackieg@sina.com
  王暴魁，博士，主任医师，教授，博士生导师，从事肾脏病中医诊治研究，Tel：010-67689739，E-mail：wbk03311@sina.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81904144)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210403
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289
- 收稿日期：2020-11-30，
  
  网络出版日期：2021-02-24，
  
  纸质出版日期：2021-04-20
- 稿件说明：
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郭晓媛,雷明,宋子威等.扶正祛风方通过TGF-β₁/Smad信号通路抑制膜性肾病大鼠足细胞转分化的机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(08):57-65.

GUO Xiao-yuan,LEI Ming,SONG Zi-wei,et al.Mechanism of Fuzheng Qufeng Prescription in Suppressing Epithelial-mesenchymal Transition of Podocytes in Membranous Nephropathy Rats via TGF-β₁/Smad Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(08):57-65.
郭晓媛,雷明,宋子威等.扶正祛风方通过TGF-β₁/Smad信号通路抑制膜性肾病大鼠足细胞转分化的机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(08):57-65. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210403.

GUO Xiao-yuan,LEI Ming,SONG Zi-wei,et al.Mechanism of Fuzheng Qufeng Prescription in Suppressing Epithelial-mesenchymal Transition of Podocytes in Membranous Nephropathy Rats via TGF-β₁/Smad Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(08):57-65. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210403.

摘要

目的

研究扶正祛风方对膜性肾病（MN）模型大鼠转化生长因子-

（TGF-

）/Smad信号通路及足细胞上皮间充质转化（EMT）的影响，探讨其保护足细胞的分子机制。

方法

大鼠随机分为正常组和造模组，造模组经阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）诱导构建MN模型后分为模型组、氯沙坦钾组（0.05 g·kg

-1

）及扶正祛风方高、中、低剂量（41，20.5，10.25 g·kg

-1

）组，给药4周。给药0，2，4周检测24 h尿蛋白（24 h-Upro）水平；给药4周后检测尿素氮（BUN）及血肌酐（SCr）水平，肾组织经苏木素-伊红（HE），马松（Masson），过碘酸-六胺银（PASM）染色后光镜观察病理改变，透射电镜观察肾小球基底膜（GBM），足突改变；免疫组化（IHC）观察足细胞EMT标志物结蛋白（Desmin）的分布及表达强度；蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测肾组织TGF-

，Smad2/3，磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3），Smad7，Desmin mRNA及蛋白表达水平。

结果

与正常组比较，模型组24 h-Upro，BUN，SCr水平显著升高（

0.01），免疫复合物沉积升高，GBM增厚和足突融合明显，Desmin mRNA及蛋白表达显著升高（

0.01），TGF-

，Smad2，Smad3 mRNA及蛋白表达水平明显升高（

0.05），Smad3 mRNA及蛋白表达水平明显降低（

0.05，

0.01）；与模型组比较，扶正祛风方各组及氯沙坦钾组24 h-Upro，BUN水平降低（

0.05），扶正祛风方中剂量组血SCr水平降低（

0.05），扶正祛风方各组及氯沙坦钾组肾小球上皮下免疫复合物沉积减少，GBM增厚和足突融合减轻，扶正祛风方高、中剂量组和氯沙坦钾组Desmin在基底膜的表达强度降低；扶正祛风方中剂量组肾组织TGF-

和p-Smad2/Smad2 mRNA及蛋白表达降低，Smad7 mRNA及蛋白表达升高（

0.05），扶正祛风方高剂量组p-Smad3/Smad3 mRNA及蛋白表达降低（

0.05），扶正祛风方高、中剂量组及氯沙坦钾组肾组织Desmin mRNA及蛋白表达降低（

0.05）。

结论

扶正祛风方可能通过抑制TGF-

/Smad信号通路激活介导的足细胞EMT实现MN足细胞保护的作用。

Abstract

Objective

To study the effect of Fuzheng Qufeng prescription （FZQP） on transforming growth factor-

（TGF-

）/Smad signaling pathway and epithelial-mesenchymal transition of podocyte in membranous nephropathy （MN） rats and to explore its molecular mechanism for podocyte protection.

Method

The rats were randomly divided into normal control group （NC） and modeling group. Rats in modeling group induced by bovine serum albumin （C-BSA） were randomly divided into model group （MN）， losartan potassium group （LP， 0.05g·kg

-1

）， and FZQP high dose （FZQPH， 41 g·kg

-1

）， medium dose （FZQPM， 20.5 g·kg

-1

）， and low dose （FZQPL， 10.25 g·kg

-1

） groups. The administration lasted for 4 weeks. In week 0， 2， and 4 of administration， the levels of 24 hours urine protein （24 h-Upro） were tested. At the end of 4th week， the levels of blood urea nitrogen （BUN） and serum creatinine （SCr） were detected， and the rats in each group were sacrificed and the renal pathological morphology changes were observed by light microscope with hematoxylin-eosin （HE）， Masson and periodic acid-silver metheramine （PASM） staining. The deposition of immune complex， the thickening of glomerular basement membrane （GBM） and podocyte foot process were observed by transmission electron microscope （TEM）. The distribution and expression intensity of Desmin in renal tissues were detected by immunohistochemistry （IHC）. The mRNA and protein expression levels of TGF-

， Smad2/3， phospho（p）-Smad2/3， Smad7 and Desmin in renal tissues were respectively detected by Western blot （WB） and Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Result

Compared with NC group， the levels of 24 h-Upro， BUN and SCr significantly increased in model group （

0.01）， with increased deposition of immune complex， significantly thickened GBM and fusion of foot processes， significantly increased Desmin mRNA and protein expression （

0.01） and increased TGF-

， Smad2， and Smad3 mRNA and protein expression （

0.05）， and decreased Smad7 mRNA and protein expression （

0.05，

0.01）. Compared with model group， 24 h-Upro and BUN decreased in FZQP groups and LP group （

0.05）， levels of serum SCr in FZQPM group decreased （

0.05）， deposition of immune complex， thickening of GBM and fusion of foot process were all alleviated in FZQP groups and LP group. Distribution of Desmin along GBM decreased in FZQPH group， FZQPM group and LP group （

0.05）. Both mRNA and protein expression levels of TGF-

and p-Smad2/Smad2 in FZQPM group decreased， while mRNA and protein expression levels of Smad7 increased （

0.05）. Both mRNA and protein expression levels of p-Smad3/Smad3 in FZQPH group decreased （

0.05）. Both mRNA and protein expression levels of Desmin in podocyte in FZQPH group， FZQPM group and LP group decreased （

0.05）.

Conclusion

FZQP might realize podocyte protection effect in MN via suppressing EMT mediated by overactivated TGF-

/Smad signaling pathway.

关键词

Keywords

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DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210403

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