PCR-RFLP鉴别当归药材及饮片中掺混伪品——欧当归的方法

史中飞; 滕宝霞; 赖晶; 倪琳; 宋平顺

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20210514

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PCR-RFLP鉴别当归药材及饮片中掺混伪品——欧当归的方法

药学基础 | 更新时间：2021-04-02

- PCR-RFLP鉴别当归药材及饮片中掺混伪品——欧当归的方法
- Identification of Levisticum officinale Adulterated in Angelica sinensis by PCR-RFLP
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第9期页码：168-175
- 作者机构：
  
  甘肃省药品检验研究院国家中药材及饮片质量控制重点实验室，甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室，兰州 730000
- 作者简介：
  
  史中飞，硕士，检验员，从事分子生药学鉴定工作，E-mail：zhongfeishi@126.com
  滕宝霞，主任药师，从事药品检验和相关方法研究工作，E-mail：Tengbx66@163.com
- 基金信息：
  
  甘肃省药品监督管理局药品科研项目(2020GSMPA024;2020GSMPA-KL09);国家重点研发计划“中医药现代化研究”重点专项(2019YFC1711500)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210514
  中图分类号： R284.2;R289;R22;R2-031
- 收稿日期：2020-11-23，
  
  网络出版日期：2021-02-22，
  
  纸质出版日期：2021-05-05
- 稿件说明：
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史中飞,滕宝霞,赖晶等.PCR-RFLP鉴别当归药材及饮片中掺混伪品——欧当归的方法[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(09):168-175.

SHI Zhong-fei,TENG Bao-xia,LAI Jing,et al.Identification of Levisticum officinale Adulterated in Angelica sinensis by PCR-RFLP[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(09):168-175.
史中飞,滕宝霞,赖晶等.PCR-RFLP鉴别当归药材及饮片中掺混伪品——欧当归的方法[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(09):168-175. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210514.

SHI Zhong-fei,TENG Bao-xia,LAI Jing,et al.Identification of Levisticum officinale Adulterated in Angelica sinensis by PCR-RFLP[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(09):168-175. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210514.

摘要

目的

该研究拟通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法（PCR-RFLP）建立一种能快速鉴别当归药材及饮片中掺伪欧当归的方法。

方法

通过比对当归和欧当归的核糖体DNA内转录间隔区（ITS）序列酶切位点，选择欧当归的特异性酶切位点Fnu4HⅠ，并设计PCR-RFLP反应引物，对影响PCR-RFLP反应的退火温度、引物浓度、循环数和酶切时间等条件进行优化，并对该方法的准确性进行了考察。另外，利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对掺伪不同比例和不同来源的当归掺伪样品进行了适用性考察。

结果

建立了当归药材及饮片中掺伪欧当归的PCR-RFLP鉴别方法，在退火温度63 ℃，循环数为30时，掺有欧当归的当归样品经过特异性引物扩增后，能被Fnu4HⅠ限制性内切酶酶切，在100~500 bp检出2条单一DNA条带，当归样品则无此条带。该方法对当归中掺入欧当归的检出限为3%，可用于日常当归中掺混欧当归的检测。

结论

建立的PCR-RFLP鉴别方法能够灵敏、准确地检测当归药材及饮片中是否掺有欧当归，可为当归的质量控制提供检验依据，以保障其临床用药安全。

Abstract

Objective

To establish a rapid method to identify

Levisticum officinale

adulterated in

Angelica sinensis

by polymerase chain reaction -restriction fragment length polymophism（PCR-RFLP）.

Method

By comparing sequences restriction sites in ribosomal DNA Internal Transcribed Spacer（ITS） of

A. sinensis

and

L. officinale

，the specific restriction site Fnu4HI of

L. officinale

was selected，and the primers for PCR-RFLP reaction were designed. Different

A. sinensis

and

L. officinale

were amplified by PCR. The conditions affecting the PCR-RFLP reaction，such as annealing temperature，primer concentration，cycle number and enzyme digestion reaction time，were optimized，and the accuracy of the method was investigated. The established PCR-RFLP identification method was used to investigate the applicability of

L. officinale

adulterated

in A. sinensis

with different aduleration ratios and different origins.

Result

A PCR-RFLP method for identifying

A. sinensis

mixed with

L. officinale

was established. When the annealing temperature was 62 ℃ and the number of cycles was 30，when the

L. officinale

adulterated in

A. sinensis

could be digested by Fnu4H I restriction endonuclease after amplification with specific primers，and the two single DNA bands were detected between 100-500 bp，the

A. sinensis

were all negative. The minimum detection limit of this method for adulterated

L. officinale

A. sinensis

was 3%，which could be used for the detection of adulterated

L. officinale

A. sinensis

Conclusion

The established PCR-RFLP identification method is sensitive and accurate in detecting whether there is

L. officinale

A. sinensis

，and it provides inspection reference and basis for the quality control of

A. sinensis

，with great significance to ensure the safety of its clinical medication.

关键词

Keywords

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