基于MAPK/ERK信号通路探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的机制

翟凤婷; 王东梅; 王丹丹; 曹卫平; 马青

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211109

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基于MAPK/ERK信号通路探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的机制

药理 | 更新时间：2021-07-28

- 基于MAPK/ERK信号通路探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的机制
- Mechanisms of Wenjing Huayu Zhitong Therapy for Primary Dysmenorrhea with Cold Coagulation and Blood Stasis Syndrome Based on MAPK/ERK Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第17期页码：66-74
- 作者机构：
  
  1.山东中医药大学附属医院，济南 250014
  2.山东中医药大学，济南 250355
- 作者简介：
  
  翟凤婷，博士，主治医师，从事女性生殖内分泌研究，E-mail：zft0326@163.com
  王东梅，博士，主任医师，从事女性生殖内分泌研究，Tel：0531-68616058，E-mail：912510096@qq.com
- 基金信息：
  
  山东省自然科学基金项目(ZR2019MH083)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211109
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2021-02-13，
  
  网络出版日期：2021-04-14，
  
  纸质出版日期：2021-09-05
- 稿件说明：
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翟凤婷,王东梅,王丹丹等.基于MAPK/ERK信号通路探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(17):66-74.

ZHAI Feng-ting,WANG Dong-mei,WANG Dan-dan,et al.Mechanisms of Wenjing Huayu Zhitong Therapy for Primary Dysmenorrhea with Cold Coagulation and Blood Stasis Syndrome Based on MAPK/ERK Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(17):66-74.
翟凤婷,王东梅,王丹丹等.基于MAPK/ERK信号通路探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(17):66-74. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211109.

ZHAI Feng-ting,WANG Dong-mei,WANG Dan-dan,et al.Mechanisms of Wenjing Huayu Zhitong Therapy for Primary Dysmenorrhea with Cold Coagulation and Blood Stasis Syndrome Based on MAPK/ERK Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(17):66-74. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211109.

摘要

目的

通过研究温经化瘀止痛法（香延止痛方）对原发性痛经（PD）大鼠丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响，探讨PD的发病机制及温经化瘀止痛法治疗PD的作用机制。

方法

将48只SPF级雌性Wistar大鼠随机分为正常组，模型组，阳性药组，香延止痛方低、中、高剂量组，每组各8只。除正常组外，其余各组大鼠均采用寒冷刺激联合苯甲酸雌二醇和缩宫素建立寒凝血瘀证PD模型，正常组及模型组给予蒸馏水，阳性药组给予布洛芬（0.06 g·kg

-1

），香延止痛方组分别给予低剂量香延止痛方（6.55 g·kg

-1

），中剂量香延止痛方（13.09 g·kg

-1

），高剂量香延止痛方（26.18 g·kg

-1

），连续灌胃6 d。记录寒凝血瘀证大鼠症状和体征量化评分并观察大鼠注射缩宫素后的扭体潜伏时间和30 min内扭体次数。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠子宫组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（B-Raf），细胞外调节激酶1/2（MEK1/2），ERK1/2，p-MEK1/2，磷酸化（p）-ERK1/2，c-Jun，环氧化酶-2（COX-2）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Rea-time PCR）法检测大鼠子宫组织B-Raf，MEK1，MEK2，ERK1，ERK2，c-Jun，COX-2 mRNA表达。

结果

与模型组比较，各治疗组大鼠扭体潜伏时间均有所延长，但差异无统计学意义，扭体次数显著减少（

0.01）；造模第6天，各治疗组症状和体征量化评分无明显差异，造模第12天，与模型组比较，布洛芬组及香延止痛方低剂量组差异无明显统计学意义，香延止痛方中、高剂量组显著降低（

0.01）；与正常组比较，模型组大鼠p-MEK1/2，p-ERK1/2，B-Raf，c-Jun，COX-2蛋白表达及相应mRNA转录水平均显著升高（

0.01）；与模型组比较，布洛芬组及香延止痛方中、高剂量组p-MEK1/2，p-ERK1/2，B-Raf，c-Jun，COX-2蛋白表达及相应mRNA均降低（

0.05，

0.01）。

结论

温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证PD的作用机制可能与其下调MAPK/ERK信号通路有关。

Abstract

Objective

To study the effect of Wenjing Huayu Zhitong therapy （Xiangyan Zhitong prescription， XZP） on the mitogen activated protein kinase （MAPK）/extracelluar regulated protein kinase （ERK） signaling pathway of primary dysmenorrhea （PD） rats， and explore the pathogenesis of PD and the mechanism of action of Wenjing Huayu Zhitong therapy.

Method

Forty-eight female SPF-grade Wistar rats were randomly divided into blank group，model group， western medicine group， low-dose XZP group， medium-dose XZP group， and high-dose XZP group， with 8 rats in each group. In addition to the blank group， dysmenorrhea rat model with cold coagulation and blood stasis syndrome was established by cold stimulation combined with estradiol benzoate and oxytocin. The rats in the blank group，model group，western medicine group， low-dose XZP group， medium-dose XZP group， and high-dose XZP group were given distilled water， distilled water，0.06 g·kg

-1

ibuprofen， 6.55 g·kg

-1

XZP， 13.09 g·kg

-1

XZP， and 26.18 g·kg

-1

XZP， respectively， by gavage for 6 days. The writhing latency and writhing frequency of rats were recorded within 30 min after oxytocin injection.Western blot was used to detect the protein expression of B-Raf， mitogen activates extracellular regulated kinases1/2 （MEK1/2）， extracellular regulated kinases1/2 （ERK1/2）， p-MEK1/2， p-ERK1/2， c-Jun， and cyclooxygenase-2 （COX-2） in rat uterus. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） was employed to detect the mRNA expression of B-Raf， MEK1， MEK2， ERK1， ERK2， c-Jun， and cyclooxygenase-2 （COX-2） in rat uterus.

Result

Compared with the model group，the treatment groups showed insignificantly prolonged writhing latency and significantly reduced writhing frequency （

0.01）. On the 6

day of modeling， there was no significant difference in the quantitative scores of symptoms and signs among the treatment groups. On the 12

day of modeling， the scores changed little in the western medicine group and the low-dose XZP group and decreased significantly in the medium- and high-dose XZP groups （

0.01） compared with those in the model group. Compared with those in the blank group， the protein and mRNA levels of p-MEK1/2， p-ERK， B-Raf， c-Jun， and COX-2 in the model group were significantly up-regulated （

0.01）. Compared with those in the model group， the protein and mRNA levels of p-MEK1/2， p-ERK1/2， B-Raf， c-Jun， and COX-2 in the western medicine group， medium-dose XZP group， and high-dose XZP group were significantly down-regulated （

0.05，

0.01）.

Conclusion

The mechanism of Wenjing Huayu Zhitong therapy in treating PD with cold coagulation and blood stasis syndrome may be related to the down-regulation of MAPK/ERK signaling pathway.

关键词

Keywords

references

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