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当归芍药散含药血清调控UPP途径对A
β 1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制Protective Effect of Danggui Shaoyaosan-contained Serum on A
β 1-40-injured PC12 Cells via Regulating UPP and Its Mechanism- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第24期 页码：17-25
- 作者机构：
1.成都中医药大学，成都 611137
2.四川大学，成都 610041
3.海南医学院，海口 570102
- 作者简介：
陈云慧，博士，副教授，从事经方配伍规律与作用机制研究工作、中医药数据挖掘研究工作、中医经典国际传播与传承研究工作，Tel：028-61800000，E-mail：chenyunhui@cdutcm.edu.cn
岳雯，博士，教授，从事中医药防治妇科疾病及其作用机制研究工作，Tel：0898-66890539，E-mail：yuewen18@163.com； *
彭伟，博士，副教授，从事中药物质基础及其机制研究工作，Tel：028-61800000，E-mail：pengwei@cdutcm.edu.cn
- 基金信息：国家自然科学基金项目(81603537;81473668);四川省科技厅国际合作与交流项目(2017HH0004);国家留学基金委项目(201908510279);四川省教育厅重点项目(17ZA0163);成都中医药大学青年学者人才项目(QNXZ2019043);The 2019 Internationalization Incentive Fund of University of Otago(IIFUO2019)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211207
中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33收稿日期：2021-02-04，
网络出版日期：2021-05-10，
纸质出版日期：2022-12-20
- 稿件说明：
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陈云慧,夏军,刘兴隆等.当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(24):17-25.
CHEN Yunhui,XIA Jun,LIU Xinglong,et al.Protective Effect of Danggui Shaoyaosan-contained Serum on Aβ1-40-injured PC12 Cells via Regulating UPP and Its Mechanism[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(24):17-25.
陈云慧,夏军,刘兴隆等.当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(24):17-25. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211207.
CHEN Yunhui,XIA Jun,LIU Xinglong,et al.Protective Effect of Danggui Shaoyaosan-contained Serum on Aβ1-40-injured PC12 Cells via Regulating UPP and Its Mechanism[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(24):17-25. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211207.
摘要
目的
2
探讨当归芍药散（DSS）含药血清对
β
淀粉样蛋白（A
β
）
1-40
损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的保护作用及对泛素-蛋白酶体途径（UPP）的调控作用机制。
方法
2
采用A
β
1-40
干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、DSS含药血清高、中、低剂量组（10%、5%、2.5%）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞A
β
和磷酸化（p）-Tau蛋白含量，免疫荧光细胞化学（ICC）标记UPP重要靶点泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）和UCHL3蛋白的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Ub、E3、26S、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白的表达。
结果
2
根据CCK-8实验结果，筛选5 μmol·L
-1
、48 h为PC12细胞损伤最佳造模条件。与空白组比较，模型组细胞存活率降低（
P
<
0.05）、凋亡率升高（
P
<
0.05），A
β
及p-Tau表达升高（
P
<
0.05），Ub蛋白及mRNA表达升高，26S、E3、UCHL1+3蛋白及mRNA表达降低（
P
<
0.05）。与模型组比较，DSS中剂量组细胞存活率升高（
P
<
0.05）；DSS各剂量组细胞凋亡率下降（
P
<
0.05）；DSS各剂量组A
β
含量降低（
P
<
0.05），DSS高、中剂量组p-Tau 含量降低（
P
<
0.05）；DSS各剂量组Ub mRNA表达降低（
P
<
0.05），DSS各剂量组26S mRNA表达升高（
P
<
0.05），DSS中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（
P
<
0.05），DSS高、中剂量组E3和UCHL 3mRNA表达升高（
P
<
0.05）；DSS各剂量组Ub蛋白表达降低，DSS高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高，以DSS中剂量效果最佳。
结论
2
DSS含药血清可提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、清除A
β
和p-Tau蛋白沉积，对A
β
1-40
损伤PC12细胞有保护作用，其作用可能是通过调控UPP降低Ub表达及升高26S、E3、UCHL1及UCHL3表达来发挥。
Abstract
Objective
2
To investigate the protective effect of Danggui Shaoyaosan （DSS）-contained serum on
β
-amyloid （A
β
）
1-40
-injured rat adrenal pheochromocytoma PC12 cells and its mechanism in regulating ubiquitin-proteasome pathway （UPP）.
Method
2
A
β
1-40
was used to intervene PC12 cells to prepare the cell models of Alzheimer's disease （AD）， and the experiment was divided into the blank， model， and DSS-contained serum high， medium， and low-dose groups （10%， 5%， and 2.5%）. Cell viability and apoptosis were detected using cell counting kit-8 （CCK-8） method and flow cytometry， respectively. The content of A
β
and p-Tau protein was determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The ubiquitin （Ub）， ubiquitin ligase E3 （E3）， 26S proteasome， ubiquitin carboxyl terminal hydrolase1 （UCHL1）， and UCHL3 protein expressions of UPP were displayed using immunofluorescence cytochemistry （ICC）， and the mRNA and protein expression levels of Ub， E3-parkin， 26S， UCHL1， and UCHL3 were determined by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） and Western blot， respectively.
Result
2
The data of the CCK8 experiment verified that 5 μmol·L
-1
and 48 hours were the optimal conditions for modeling A
β
1-40
-injured PC12 cells. As compared with the blank group， the cell viability rate in the model group decreased （
P
<
0.05） with an increased apoptosis rate （
P
<
0.05）， the content of A
β
and p
-
Tau contents was elevated （
P
<
0.05）， the mRNA and protein expression levels of Ub increased， and the mRNA and protein expression levels of 26S， E3， and UCHL1+3 decreased （
P
<
0.05）. As compared with the model group， the cell viability rate in the DSS-contained medium-dose group increased （
P
<
0.05）， whereas the apoptosis rate in each DSS-contained group decreased （
P
<
0.05）. The content of A
β
in each DDS-contained group decreased （
P
<
0.05）， and the content of p-Tau in the DDS-contained high and medium-dose groups decreased （
P
<
0.05）. The mRNA expression level of Ub decreased， and that of 26S increased in each DDS-contained group （
P
<
0.05）. The mRNA expression level of UCHL1 in the DDS-contained medium-dose group increased （
P
<
0.05）， and the mRNA expression levels of E3 and UCHL 3 in the DDS-contained high and medium-dose groups increased （
P
<
0.05）. The protein expression level of Ub in each DDS-contained group decreased， and the protein expression levels of 26S， E3， and UCHL1+3 in the DDS high and medium-dose groups increased. The DSS-contained serum medium-dose group exerted the optimal effect.
Conclusion
2
DSS-contained serum can increase cell viability rate， reduce cell apoptosis rate， eliminate A
β
and p-Tau protein deposits， and exert protective effects on A
β
1-40
-injured PC12 cells. Its mechanism may involve UPP via decreasing the expression of Ub and increasing that of 26S， E3， UCHL1， and UCHL3.
关键词
Keywords
references
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