哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

张怡; 郑冉; 于奇; 焦丽丽; 李波; 刘达; 李宜平

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211404

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

药理 | 更新时间：2021-07-15

- 哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用
- Effect of Ranae Oviductus Protein Hydrolysate on Ethanol-induced L-02 Cell Injury
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第15期页码：43-50
- 作者机构：
  
  长春中医药大学，长春 130117
- 作者简介：
  
  张怡，硕士，从事中药新药研究与开发研究，E-mail：280005049@qq.com
  * 李宜平，教授，从事中药资源与开发研究，E-mail：czdliyiping@163.com
- 基金信息：
  
  吉林省科技发展项目(20170309005YY)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211404
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R33
- 收稿日期：2021-03-31，
  
  网络出版日期：2021-05-26，
  
  纸质出版日期：2021-08-05
- 稿件说明：
移动端阅览
张怡,郑冉,于奇等.哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(15):43-50.

ZHANG Yi,ZHENG Ran,YU Qi,et al.Effect of Ranae Oviductus Protein Hydrolysate on Ethanol-induced L-02 Cell Injury[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(15):43-50.
张怡,郑冉,于奇等.哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(15):43-50. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211404.

ZHANG Yi,ZHENG Ran,YU Qi,et al.Effect of Ranae Oviductus Protein Hydrolysate on Ethanol-induced L-02 Cell Injury[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(15):43-50. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211404.

摘要

目的

研究哈蟆油蛋白酶解物（ORPH）对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。

方法

复合酶解法制备ORPH，以400 mmol·L

-1

乙醇建立L-02肝细胞损伤模型，细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化，JC-1/Hochest染色观察形态学变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化，研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。

结果

CCK-8法结果表明400 mmol·L

-1

乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤；与空白组比较，模型组L-02细胞活力显著下降（

0.01），细胞处于G

期的细胞占比显著升高（

0.01），细胞总凋亡率显著升高（

0.01），线粒体膜电位下降；B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），细胞色素C（Cyt C），半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）凋亡相关蛋白的表达明显升高（

0.05，

0.01），MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK），p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）明显上调（

0.05，

0.01），且焦亡蛋白Caspase-1，白细胞介素-1

（IL-1

）表达明显增强（

0.05），Bcl-2显著下降（

0.01）；与模型组比较，ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善（

0.05，

0.01），细胞总凋亡率显著下降（

0.01），线粒体膜电位升高，呈剂量相关性；Bax，Cyt C，Caspase-3蛋白表达明显降低（

0.05，

0.01），Bcl-2蛋白表达升高（

0.05，

0.01），MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（

0.05，

0.01）。

结论

ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤，改善恢复线粒体膜电位，降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达，并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达，从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激，对酒精性肝损伤起到治疗作用。

Abstract

Objective

To study the protective effect and mechanism of Ranae Oviductus protein hydrolysate （ROPH） on the expression of pathway-related proteins in ethanol-induced L-02 cell injury.

Method

The ROPH was prepared by compound enzymatic hydrolysis. L-02 cell injury model was induced with 400 mmol·L

-1

ethanol. Cell viability was detected by cell counting kit-8 （CCK-8） assay. Cell cycle and apoptosis were examined by flow cytometry. JC-1/Hochest staining was employed for qualitative investigation. The expression of related proteins in apoptosis， mitogen-activated protein kinase （MAPK） signaling pathway， and pyroptosis in L-02 cells was detected by Western blot.

Result

The results of the CCK-8 assay showed that 400 mmol·L

-1

ethanol could induce L-02 cell injury within 12 hours. Compared with the blank group， the model group showed decreased viability of L-02 cells （

0.01）， elevated percentage of the cell cycle in the G

phase （

0.01）， increased total cell apoptosis rate （

0.01）， reduced mitochondrial membrane potential （

0.01）， up-regulated expression of apoptosis-related proteins ［B-cell lymphoma-2 （Bcl-2）-associated X protein （Bax）， Cytochrome C （Cyt C）， and cysteine-dependent aspartate specific protease-3 （Caspase-3）］（

0.05，

0.01） and MAPK signaling pathway-related proteins ［C-Jun amino-terminal kinase （JNK） and p38 MAPK］（

0.05，

0.01）， and potentiated expression of pyrolysis-related proteins Caspase-1 and interleukin-1

（IL-1

）（

0.05）. Compared with the model group， the ROPH treatment group exhibited improved cell cycle arrest （

0.05，

0.01）， diminished total cell apoptosis rate （

0.01）， elevated mitochondrial membrane potential in a dose-dependent manner， down-regulated expression of Bax， Cyt C， and Caspase-3 proteins （

0.05，

0.01）， up-regulated expression of Bcl-2 protein （

0.05，

0.01）， and a downward trend in expression of proteins related to MAPK signaling pathway and pyrolysis （

0.05，

0.01）.

Conclusion

ROPH could inhibit oxidative stress-triggered liver injury in ethanol-induced cells by improving mitochondrial membrane potential， reducing the expression of proteins in the mitochondria-mediated apoptosis pathway， and inhibiting the expression of proteins related to the MAPK signaling pathway and pyrolysis pathway to reduce the mitochondrial dysfunction and inflammatory response in ethanol-induced L-02 liver cells and inhibit oxidative stress， thereby exerting a therapeutic role in alcoholic liver injury.

关键词

Keywords

references

SABERI B ， DADABHAI A S ， JANG Y Y ， et al . Current management of alcoholic hepatitis and future therapies ［J］. J Clin Transl Hepatol ， 2016 ， 4 （ 2 ）： 113 - 122 .

MICHALAK A ， CICHOŻ-LACH H ， GUZ M ， et al . Plateletcrit and mean platelet volume in the evaluation of alcoholic liver cirrhosis and nonalcoholic fatty liver disease patients ［J］. Biomed Res Int ， 2021 ， doi： 10.1155/2021/8867985 http://dx.doi.org/10.1155/2021/8867985 .

DHANDA A D ， LEE R W ， COLLINS P L ， et al . Molecular targets in the treatment of alcoholic hepatitis ［J］. World J Gastroenterol ， 2012 ， 18 （ 39 ）： 5504 - 5513 .

王烁，卿笃信 . 炎性小体激活与细胞焦亡及其在酒精性肝病中的研究进展［J］. 中南大学学报：医学版， 2020 ， 45 （ 8 ）： 999 - 1004 .

ABDELLAH M ， CHARLES-HENRY G ， TARIK A . Mitochondrial dysfunction and signaling in chronic liver diseases ［J］. Gastroenterology ， 2018 ， 155 （ 3 ）： 629 - 647 .

孙艳辉，张宏波 . 灵芝多糖对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏脂肪沉积及NLRP3炎性小体表达的影响［J］. 世界中医药， 2020 ， 15 （ 6 ）： 842 - 845 .

YONG H ， DECHUN F ， MAN L ， et al . Hepatic mitochondrial DNA/Toll‐like receptor 9/MicroRNA‐223 forms a negative feedback loop to limit neutrophil overactivation and acetaminophen hepatotoxicity in mice ［J］. Hepatology ， 2017 ， 66 （ 1 ）： 220 - 234 .

赵兴杰，李晓红，常青，等 . 酒精性肝病的中医药治疗研究进展［J］. 河北中医， 2016 ， 38 （ 10 ）： 1591 - 1596 .

舒承倩，吴晶魁，周滢 . 赶黄草配伍葛花对乙醇诱导下L-02肝细胞的影响［J］. 中国病理生理杂志， 2018 ， 34 （ 6 ）： 1095 - 1100 .

付裕，郎涵，陈柚伶，等 . 葛黄颗粒含药血清对乙醇诱导L-02肝细胞损伤的保护作用及其机制研究［J］. 重庆医学， 2018 ， 47 （ 20 ）： 2654 - 2658 .

费梁，胡淑琴，叶昌媛，等 . 中国动物志：下卷［M］. 北京：科学出版社， 2009 ： 1010 - 1018 .

王红燕，徐绥绪 . 蛤士蟆油化学及药理学研究概况［J］. 中成药， 1998 ， 20 （ 9 ）： 39 - 40 .

肖井雷，刘玉翠，常红，等 . 名贵动物药哈蟆油的药理作用研究进展［J］. 吉林中医药， 2012 ， 32 （ 7 ）： 751 - 753 .

游杰舒，石晋丽，张硕峰，等 . 哈蟆油石油醚提取物的抗抑郁作用［J］. 中国实验方剂学杂志， 2013 ， 19 （ 17 ）： 271 - 274 .

零小妹 . 哈蟆油含药血清对氧化应激诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用及机制研究［D］. 广州：广东药科大学， 2017 .

袁慧琦 . 基于Sirt1/p53介导的凋亡通路探讨牡荆苷拮抗酒精性肝损伤的保护作用［D］. 广州：广州中医药大学， 2017 .

宋培放，潘秋莎，杨凌 . 药物性肝损伤生物标志物［J］. 世界中医药， 2020 ， 15 （ 23 ）： 3553 - 3560 .

GAUL S ， LESZCZYNSKA A ， ALEGRE F ， et al . Hepatocyte pyroptosis and release of inflammasome particles induce stellate cell activation and liver fibrosis ［J］. J Hepatol ， 2021 ， doi： 10.1016/j.jhep.2020.07.041 http://dx.doi.org/10.1016/j.jhep.2020.07.041 .

BARAM N ， COHEN H ， EDRY-BOTZER L ， et al . Vibrio pore-forming leukocidin activates pyroptotic cell death via the NLRP3 inflammasome ［J］. Emerg Microbes Infect ， 2020 ， doi： 10.1101/816553 http://dx.doi.org/10.1101/816553 .

冯会婷，戴卫波，白莎莎，等 . 基于细胞焦亡探讨琴叶榕提取物对急性酒精性肝损伤的保护机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2020 ， 26 （ 13 ）： 125 - 131 .

DALE S ， WANG X H ， KOMIRENKO A ， et al . Activation of the Keap1/Nrf2 stress response pathway in autophagic vacuolar myopathies ［J］. Acta Neuropathol Commun ， 2016 ， 4 （ 1 ）： 115 .

朱吉，王磊，陈戈，等 . 健脾调肝方联合激素治疗自身免疫性肝炎的疗效及对肝功能的影响［J］. 世界中医药， 2019 ， 14 （ 5 ）： 1282 - 1285 .

张伟贤，兰天，董嘉乐，等 . 山柰酚抵抗对乙酰氨基酚引起的肝细胞损伤研究［J］. 世界中医药， 2019 ， 14 （ 1 ）： 39 - 43 .

GAIDT M M ， HORNUNG V . Pore formation by GSDMD is the effector mechanism of pyroptosis ［J］. EMBO J ， 2016 ， 35 （ 20 ）： 2167 - 2169 .

席兴字，王红亮 . Caspase-1介导的细胞焦亡［J］. 生物学通报， 2017 ， 52 （ 6 ）： 4 - 6 .

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

基于蛋白质组学的生脉注射液抗脑缺血作用机制

药食同源保肝中药的抗炎抗氧化作用

慢性阻塞性肺疾病发病机制及中药调节作用研究进展

中药防治糖尿病胃轻瘫作用机制研究进展

中医药介导相关信号通路治疗肝衰竭的研究进展