浏览全部资源
扫码关注微信
基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用
Protective Effect of Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma Medicated Serum Against H2O2-induced Oxidative Damage of PC12 Cells Based on Nrf2/ARE Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第16期 页码：67-74
- 作者机构：
1.广州中医药大学 中药学院，广州 510006
2.广州中医药大学 第二临床医学院，广州 510006
3.广东省中医院大学城医院，广州 510006
- 作者简介：
尹曼雪，在读硕士，从事临床中药学研究，E-mail：ymanxuelois@163.com
* 吴庆光，教授，主任医师，硕士生导师，从事临床中药学研究，Tel：020-39358795，E-mail：zyx321@gzucm.edu.cn
- 基金信息：国家自然科学基金项目(81673619)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211506
中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R33收稿日期：2021-04-14，
网络出版日期：2021-06-23，
纸质出版日期：2021-08-20
- 稿件说明：
移动端阅览
尹曼雪,林玉婕,黄文治等.基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(16):67-74.
YIN Man-xue,LIN Yu-jie,HUANG Wen-zhi,et al.Protective Effect of Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma Medicated Serum Against H2O2-induced Oxidative Damage of PC12 Cells Based on Nrf2/ARE Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(16):67-74.
尹曼雪,林玉婕,黄文治等.基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(16):67-74. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211506.
YIN Man-xue,LIN Yu-jie,HUANG Wen-zhi,et al.Protective Effect of Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma Medicated Serum Against H2O2-induced Oxidative Damage of PC12 Cells Based on Nrf2/ARE Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(16):67-74. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211506.
摘要
目的
2
研究当归-川芎含药血清（Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum，ASRCRS）对过氧化氢（H
2
O
2
）诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12细胞）氧化损伤的保护作用及其分子机制。
方法
2
采用H
2
O
2
体外诱导PC12细胞氧化损伤，并以终体积分数为15%的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率；荧光倒置显微镜观察细胞形态；试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH），丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子E
2
相关因子2（Nrf2），Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1），血红素加氧酶-1（HO-1），SOD1蛋白的表达水平。
结果
2
选择300 μmol·L
-1
H
2
O
2
刺激24 h作为氧化损伤造模的条件。与正常组比较，H
2
O
2
模型组细胞形态异常，细胞存活率显著降低（
P
<
0.01）；LDH，MDA含量升高（
P
<
0.01），SOD活力降低，ROS在细胞内分布增加；Nrf2，HO-1，SOD1蛋白表达水平均明显下调（
P
<
0.05，
P
<
0.01），Keap1蛋白表达水平明显上调（
P
<
0.01）。与模型组比较，ASRCRS不同剂量组均能改善细胞形态，提高细胞存活率，抑制细胞凋亡；显著提高SOD酶活力（
P
<
0.01），抑制LDH的释放（
P
<
0.01）和ROS的生成，降低MDA含量（
P
<
0.01）；明显上调Nrf2，HO-1，SOD1蛋白表达水平（
P
<
0.05，
P
<
0.01），显著下调Keap1蛋白表达水平（
P
<
0.01）。
结论
2
当归-川芎含药血清可能是通过上调Nrf2的蛋白表达，激活Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路，增强细胞抗氧化损伤能力，抑制细胞凋亡，从而发挥保护H
2
O
2
损伤的PC12细胞的作用。
Abstract
Objective
2
To investigate the protective effect and molecular mechanism of Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum （ASRCRS） against oxidative damage of PC12 cells induced by H
2
O
2
.
Method
2
Oxidative damage of PC12 cells was induced by H
2
O
2
in vitro
， and intervention was performed in the low-， medium-， and high-dose ASRCRS groups with a final volume fraction of 15%. The cell viability was determined by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay. Cell morphology was observed by an inverted fluorescence microscope. The content of lactate dehydrogenase （LDH） and malondialdehyde （MDA）， the activity of superoxide dismutase （SOD）， and the distribution of reactive oxygen species （ROS） in the cell supernatant were detected by the kits. Cell apoptosis was detected by Annexin V-FITC/PI double staining. The protein expression levels of nuclear factor E
2
-related factor 2 （Nrf2）， Kelch-like epichlorohydrin associated protein-1 （Keap1）， heme oxygenase-1 （HO-1）， and SOD1 were detected by Western blot.
Result
2
Oxidative damage was induced by 300 μmol·L
-1
H
2
O
2
for 24 hours. Compared with the normal group， the model group showed abnormal cell morphology， reduced cell viability （
P
<
0.01）， increased LDH and MDA （
P
<
0.01）， blunted SOD activity， elevated intracellular distribution of ROS， down-regulated protein expression of Nrf2， HO-1， and SOD1 （
P
<
0.05，
P
<
0.05）， and up-regulated protein expression of Keap1 （
P
<
0.01）. Compared with the model group， ASRCRS groups displayed improved cell morphology， increased cell viability， inhibited cell apoptosis， potentiated SOD activity （
P
<
0.01）， suppressed release of LDH （
P
<
0.01） and generation of ROS， decreased content of MDA （
P
<
0.01）， up-regulated protein expression of Nrf2， HO-1 and SOD1 （
P
<
0.05，
P
<
0.01）， and down-regulated protein expression of Keap1 （
P
<
0.01）.
Conclusion
2
ASRCRS could protect PC12 cells from oxidative damage induced by H
2
O
2
by up-regulating the expression of Nrf2 to activate the Nrf2/antioxidant response element （ARE） signaling pathway， enhancing the ability to resist oxidative damage， and inhibiting cell apoptosis.
关键词
Keywords
references
唐德才 ， 吴庆光 . 中药学 ［M］. 3版 . 北京 ： 人民卫生出版社 ， 2016 .
程谦谦 ， 郑晓霞 ， 李妍怡 . 佛手通痹汤治疗多发性神经病临床治验 ［J］. 西部中医药 ， 2017 ， 30 （ 12 ）： 25 - 27 .
陈云慧 ， 张天娥 ， 龚圆渊 ， 等 . 基于泛素—蛋白酶体途径探讨当归芍药散“肝脾同调-血水同治”治疗阿尔茨海默病的作用机制 ［J］. 世界科学技术―中医药现代化 ， 2020 ， 22 （ 1 ）： 93 - 100 .
刘孟渊 ， 王达平 ， 刘玉平 ， 等 . 加味当归芍药散治疗老年性痴呆的疗效观察 ［J］. 广州中医药大学学报 ， 2001 ， 18 （ 1 ）： 30 - 33 .
PARK S J ， JUNG J M ， LEE H E ， et al . The memory ameliorating effects of INM-176，an ethanolic extract of Angelica gigas，against scopolamine-or A β 1-42 -induced cognitive dysfunction in mice ［J］. J Ethnopharmacol ， 2012 ， 143 （ 2 ）： 611 - 620 .
王虎平 ， 吴红彦 ， 李海龙 ， 等 . 当归有效组分防治阿尔茨海默病模型大鼠组方配伍优化的实验研究 ［J］. 甘肃中医药大学学报 ， 2019 ， 36 （ 3 ）： 12 - 19 .
QIAN D ， ZHOU X Y ， SI J R ， et al . Angelica polysaccharide ameliorates memory impairment in Alzheimer's disease rat through activating BDNF/TrkB/CREB pathway ［J］. Exp Biol Med ， 2019 ， 245 （ 1 ）： 1 - 10 .
WANG N B ， ZHOU Y T ， ZHAO L H ， et al . Ferulic acid delayed amyloid β -induced pathological symptoms by autophagy pathway via a fasting-like effect in Caenorhabditis elegans ［J］. Food Chem Toxicol ， 2020 ， doi： 10.1016/j.fct.2020.111808 http://dx.doi.org/10.1016/j.fct.2020.111808 .
李伟霞 ， 唐于平 ， 郭建明 ， 等 . 比较评价当归川芎配伍对急性血瘀大鼠血液流变学及凝血功能的影响 ［J］. 中国中西医结合杂志 ， 2012 ， 32 （ 6 ）： 806 - 811 .
林秋珊 ， 杨佩芬 ， 尹曼雪 ， 等 . 阿魏酸对H 2 O 2 致PC12细胞氧化损伤的保护作用 ［J］. 中国实验方剂学杂志 ， 2019 ， 25 （ 13 ）： 66 - 72 .
WU C ， ZHAO W ， YU J ， et al . Induction of ferroptosis and mitochondrial dysfunction by oxidative stress in PC12 cells ［J］. Sci Rep ， 2018 ， 8 （ 1 ）： 574 .
ZHANG G ， BUCHLER I P ， DEPASQUALE M ， et al . Development of a PC12 cell based assay for screening catechol- O -methyltransferase inhibitors ［J］. ACS Chem Neurosci ， 2019 ， 10 （ 10 ）： 4221 - 4226 .
YUAN J ， LU Y ， WANG H ， et al . Paeoniflorin resists H 2 O 2 -induced oxidative stress in melanocytes by JNK/Nrf2/HO-1 pathway ［J］. Front Pharmacol ， 2020 ， 11 （ 536 ）： 1 - 11 .
廖劭伟 ， 胡雅纯 ， 李怡 ， 等 . 尤瑞克林对H 2 O 2 诱导的海马神经元损伤的保护作用研究 ［J］. 国际医药卫生导报 ， 2019 ， 25 （ 8 ）： 1182 - 1185 .
许彤 ， 付丽娜 ， 隗永健 . 人参皂苷Rg 1 对H 2 O 2 诱导的大鼠海马神经元损伤的影响及其机制 ［J］. 海峡药学 ， 2019 ， 31 （ 1 ）： 19 - 22 .
LIU L ， ZENG Z ， GAUR U ， et al . The p38-MAPK pathway is involved in neuroprotection of artemisinin against H 2 O 2 -induced apoptosis in PC12 cells ［J］. J Pharm Pharmacol ， 2017 ， 5 （ 7 ）： 416 - 423 .
YAO H ， ZHANG X ， WEI G ， et al . Protective effects of thevetiaflavone on H 2 O 2 -induced PC12 cells injury via improving oxidative stress and mitochondrial dysfunction ［J］. Lat Am J Pharm ， 2017 ， 36 （ 9 ）： 1821 - 1826 .
高健美 ， 徐凡 ， 雷鸣 ， 等 . 延龄草苷对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤和炎症因子表达的影响 ［J］. 天然产物研究与开发 ， 2017 ， 29 （ 3 ）： 449 - 453 .
李萌 ， 马致洁 ， 章从恩 ， 等 . 西红花对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究 ［J］. 世界中医药 ， 2019 ， 14 （ 4 ）： 833 - 838 .
GASCHLER M M ， STOCKWELL B R . Lipid peroxidation in cell death ［J］. Biochem Biophys Res Commun ， 2017 ， 482 （ 3 ）： 1 - 17 .
ANGELOVA P R ， ESTERAS N ， ABRAMOV A Y . Mitochondria and lipid peroxidation in the mechanism of neurodegeneration：finding ways for prevention ［J］. Med Res Rev ， 2020 ， 41 （ 6 ）： 1 - 15 .
李锦吉 ， 狄留庆 ， 李俊松 ， 等 . 通塞脉制剂对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用 ［J］. 南京中医药大学学报 ， 2014 ， 30 （ 2 ）： 146 - 149 .
KULASEKARAN G ， DHARMALINGAM P ， GANAPASAM S ， et al . Neuroprotective effect of naringin，a dietary flavonoid against 3-nitropropionic acid-inducedneuronal apoptosis ［J］. Neurochem Int ， 2011 ， 59 （ 7 ）： 1066 - 1073 .
LAN X ， HAN X N ， LI Q ， et al . Epicatechin，a natural flavonoid compound，protects astrocytes against hemoglobin toxicity via Nrf2 and AP-1 signaling pathways ［J］. Mol Neurobiol ， 2016 ， 54 （ 10 ）： 1 - 10 .
ROBERT N ， MARCO P ， SONIA P ， et al . Targeting synaptic dysfunction in Alzheimer's disease therapy ［J］. Mol Neurobiol ， 2012 ， 46 （ 3 ）： 572 - 587 .
0
浏览量
21
下载量
3
CSCD
- 印刷PDF下载
- 网络PDF下载
- BibTeX下载
- Endnote下载
- RefMan 下载
- NoteExpress下载
- NoteFirst下载
关联资源
相关文章
相关作者
相关机构
AI问答- 地址：北京市东城区东直门内南小街16号 邮编：100700
- 联系电话：010-84076882 Email：syfjx_2010@188.com
- 技术支持由北京北大方正电子有限公司提供 京ICP备11006657号-10
京公网安备11010802024621 - 本系统建议在Chrome、 IE9+ 以上版本浏览器阅读本站内容，360浏览器请切换至极速模式
- Cookies帮助我们提供服务并提供个性化体验。使用本网站，即表示您同意我们使用Cookies
