断藤益母汤对人脐静脉内皮细胞模型的作用机制

钱凯; 郑雪霞; 许舒迪; 詹静怡; 叶棠明; 廖发杰; 刘敏莹; 林昌松

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211706

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断藤益母汤对人脐静脉内皮细胞模型的作用机制

药理 | 更新时间：2021-09-07

- 断藤益母汤对人脐静脉内皮细胞模型的作用机制
- Mechanism of Duanteng Yimu Decoction on Human Umbilical Vein Endothelial Cell Model
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第19期页码：36-45
- 作者机构：
  
  1.广州中医药大学，广州 510405
  2.广州中医药大学第一附属医院，广州 510405
- 作者简介：
  
  钱凯，博士，从事中医临床基础及风湿病研究，E-mail：13724051203@163.com
  林昌松，硕士，主任医师，博士生导师，从事风湿病中医药研究，E-mail：13802772276@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81774262);广东省自然科学基金项目(2017A030311009)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211706
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2021-04-11，
  
  网络出版日期：2021-08-06，
  
  纸质出版日期：2021-10-05
- 稿件说明：
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钱凯,郑雪霞,许舒迪等.断藤益母汤对人脐静脉内皮细胞模型的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(19):36-45.

QIAN Kai,ZHENG Xue-xia,XU Shu-di,et al.Mechanism of Duanteng Yimu Decoction on Human Umbilical Vein Endothelial Cell Model[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(19):36-45.
钱凯,郑雪霞,许舒迪等.断藤益母汤对人脐静脉内皮细胞模型的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(19):36-45. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211706.

QIAN Kai,ZHENG Xue-xia,XU Shu-di,et al.Mechanism of Duanteng Yimu Decoction on Human Umbilical Vein Endothelial Cell Model[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(19):36-45. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211706.

摘要

目的

探讨断藤益母汤（DTYM）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）模型细胞活化的作用，以及对相关活化蛋白与血管内皮生长因子（VEGF）信号通路的作用。

方法

VEGF和肿瘤坏死因子-

（TNF-

）诱导HUVEC，DTYM （200，400 mg·L

-1

）作用后，采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8），5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）法，transwell鬼笔环肽荧光染色法及基质胶法检测细胞增殖活力、迁移和管形成能力，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测黏附因子E选择素（E-selectin），细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和脉管细胞黏附分子-1（VCAM-1） mRNA的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测血管性血友病因子（VWF），血小板-内皮细胞黏附分子31（CD31），血管诱导生成因子61（CYR61），血管生成素-1（ANG-1），VEGF和VEGF受体2（VEGFR2）的表达，免疫荧光检测CD31的表达。

结果

与正常组比较，模型组HUVEC的增殖活力、迁移和管形成能力明显升高（

0.05，

0.01）；E-selectin，ICAM-1，VCAM-1 mRNA表达升高（

0.01）；VWF，CD31，ANG-1，CYR61，VEGF-

，磷酸化（p）-VEGFR2蛋白表达升高（

0.05，

0.01），CD31免疫荧光强度升高（

0.01）；与模型组比较，DTYM两剂量组HUVEC的增殖活力、迁移和管形成能力明显降低（

0.05，

0.01）；E-selectin，ICAM-1，VCAM-1 mRNA表达降低（

0.05，

0.01），VWF，CD31，ANG-1，CYR61，VEGF-

，p-VEGFR2蛋白表达降低（

0.05，

0.01），CD31免疫荧光强度降低（

0.01）。

结论

DTYM抑制HUVEC的增殖、迁移、黏附和管形成，与其调控HUVEC中CD31，VWF，CYR61，ANG-1的表达及VEGF信号通路有关。

Abstract

Objective

To explore the effect of Duanteng Yimu decoction （DTYM） on the activation of the human umbilical vein endothelial cell （HUVEC） model and the effect on related activated proteins and vascular endothelial growth factor （VEGF） signaling pathway.

Method

After DTYM （200， 400 g·mL

-1

） treatment of HUVEC induced by VEGF and tumor necrosis factor-

（TNF-

）， cell proliferation， migration， and tubulogenesis were detected by cell counting kit-8 （CCK-8） assay， 5-ethynyl-2'-deoxyuridine （EdU） assay， transwell migration assay， phalloidin staining， and matrix gel card method. The mRNA expression of adhesion factors， including E-selectin， intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1）， and vascular cell adhesion molecule-1 （VCAM-1） was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. The expression of von Willebrand factor （VWF）， platelet-endothelial cell adhesion molecule-31 （CD31）， angiogenic factor cysteine-rich-61 （CYR61）， angiopoietin-1 （ANG-1）， VEGF， and VEGF receptor-2 （VEGFR2） was detected by Western blot. Immunofluorescence was used to determine CD31 expression.

Result

Compared with the normal group， the model group showed potentiated proliferation， migration， and tubulogenesis of HUVEC （

0.05，

0.01）， elevated mRNA expression of E-selectin， ICAM-1， and VCAM-1 （

0.01）， up-regulated protein expression of VWF， CD31， ANG-1， CYR61， VEGF-

， and phospho （p）-VEGFR2 （

0.05，

0.01）， and increased CD31 immunofluorescence intensity （

0.01）. Compared with the model group， the DTYM groups displayed blunted proliferation， migration， and tubulogenesis of HUVEC （

0.05，

0.01）， decreased mRNA expression of E-selectin， ICAM-1， and VCAM-1 （

0.05，

0.01）， down-regulated protein expression of VWF， CD31， ANG-1， CYR61， VEGF-

， and p-VEGFR2 （

0.05，

0.01）， and weakened CD31 immunofluorescence intensity （

0.01）.

Conclusion

DTYM inhibits HUVEC proliferation， migration， adhesion， and tubulogenesis， which is associated with the regulation of CD31， VWF， CYR61， and ANG-1 expression in HUVEC and the VEGF signaling pathway.

关键词

Keywords

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