三焦祛湿方对C-BSA诱导膜性肾病小鼠肾脏保护作用及其对Nrf2/HO-1信号通路的影响

赵亚云; 方敬; 陈静洁; 刘海平; 陈志强

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211839

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三焦祛湿方对C-BSA诱导膜性肾病小鼠肾脏保护作用及其对Nrf2/HO-1信号通路的影响

药理 | 更新时间：2021-08-18

- 三焦祛湿方对C-BSA诱导膜性肾病小鼠肾脏保护作用及其对Nrf2/HO-1信号通路的影响
- Renoprotective Effect of Sanjiao Qushi Prescription Against Cationic Bovine Serum Albumin Induced Membranous Nephropathy Mice Model and Its Influence on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第18期页码：58-65
- 作者机构：
  
  1.河北中医学院，石家庄 050091
  2.河北省中医院，石家庄 050011
- 作者简介：
  
  赵亚云，在读博士，主治医师，从事慢性肾脏病的中医药治疗及机制研究，E-mail：DoctorCindy2020@126.com
  * 陈志强，博士，教授，博士生导师，从事慢性肾脏病的中医药治疗及机制研究，E-mail：chenzhqiang2011@163.com
- 基金信息：
  
  河北省政府资助省级临床医学优秀人才项目(2016034829);河北省中医药管理局科研计划项目(2021039)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211839
  中图分类号： R2-0;R334+.1;R33
- 收稿日期：2021-06-28，
  
  网络出版日期：2021-07-28，
  
  纸质出版日期：2021-09-20
- 稿件说明：
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赵亚云,方敬,陈静洁等.三焦祛湿方对C-BSA诱导膜性肾病小鼠肾脏保护作用及其对Nrf2/HO-1信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(18):58-65.

ZHAO Ya-yun,FANG Jing,CHEN Jing-jie,et al.Renoprotective Effect of Sanjiao Qushi Prescription Against Cationic Bovine Serum Albumin Induced Membranous Nephropathy Mice Model and Its Influence on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(18):58-65.
赵亚云,方敬,陈静洁等.三焦祛湿方对C-BSA诱导膜性肾病小鼠肾脏保护作用及其对Nrf2/HO-1信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(18):58-65. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211839.

ZHAO Ya-yun,FANG Jing,CHEN Jing-jie,et al.Renoprotective Effect of Sanjiao Qushi Prescription Against Cationic Bovine Serum Albumin Induced Membranous Nephropathy Mice Model and Its Influence on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(18):58-65. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211839.

摘要

目的

探索三焦祛湿方对阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）诱导膜性肾病（MN）小鼠肾脏保护作用及其对核因子E

相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路影响。

方法

雌性BALB/c小鼠60只，随机分为正常组10只，模型组50只。模型组小鼠尾静脉注射C-BSA（6.5 mg·kg

-1

），造模成功小鼠按体质量随机分为模型组、三焦祛湿方低剂量（3.71 g·kg

-1

）组，三焦祛湿方高剂量（7.42 g·kg

-1

）组及盐酸贝那普利（1.3 mg·kg

-1

）组，分别给予各组相应剂量的药物灌胃，1次/d，连续4周。分别于造模前、造模后及治疗后检测24 h尿蛋白定量。给药后，腹主动脉取血检测血尿素氮（BUN），血清肌酐（SCr），甘油三酯（TG），总胆固醇（TC），总蛋白（TP），白蛋白（Alb）水平，肾组织行苏木素-伊红（HE），马松（Masson），过碘酸-六胺银（PASM）染色，光镜下观察小鼠肾组织病理形态变化，免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G（IgG）沉积情况，采用免疫荧光法检测肾组织中活性氧（ROS）表达情况。蛋白免疫印迹法（Western blot）观察肾组织Nrf2蛋白在细胞质和细胞核的表达情况，以及其下游因子血红素氧合酶-1（HO-1），醌还原型辅酶Ⅰ（NADH）脱氢酶1（NQO1）蛋白表达水平。

结果

模型组小鼠24 h尿蛋白水平显著升高（

0.01），血清TG，TC水平显著升高（

0.01），TP，Alb水平显著降低（

0.01）；光镜下观察肾脏病理改变，可见肾小球体积增大，基底膜增厚，嗜复红蛋白沉积，“钉突”形成；荧光显微镜下可见IgG沿毛细血管襻弥漫性沉积；肾组织ROS表达水平显著升高（

0.01）；肾组织细胞核内Nrf2蛋白表达显著升高（

0.01），细胞质Nrf2蛋白表达显著降低（

0.01），HO-1和NQO1蛋白表达显著升高（

0.01）；给药后，各治疗组小鼠24 h尿蛋白水平显著降低（

0.01），血清TG，TC水平显著降低（

0.01），TP，Alb水平明显升高（

0.05，

0.01）；各治疗组肾组织病理损害明显改善；肾组织ROS表达水平显著降低（

0.01）；肾组织细胞核内Nrf2蛋白表达显著降低（

0.01），细胞质Nrf2蛋白表达不同程度升高（

0.05，

0.01），HO-1和NQO1蛋白表达显著升高（

0.01）。

结论

三焦祛湿方可能通过调控膜性肾病肾组织Nrf2/HO-1信号表达，缓解肾组织氧化应激，进而降低24 h尿蛋白定量，降低血脂水平，提高血清蛋白含量，减轻肾脏病理损害，起到明显的肾脏保护及延缓病程进展的作用。

Abstract

Objective

To investigate the renoprotective effects that Sanjiao Qushi prescription ameliorates cationic bovine serum albumin （C-BSA） induced membranous nephropathy（MN） in mice model and its influence on nuclear factor erythroid-2-related factor-2（Nrf2）/heme oxygenase-1（HO-1） signaling pathway.

Method

Sixty female BALB/c mice were randomly divided into the normal group（

=10） and the model group（

=50）. The mice in the model group received C-BSA injection via tail vein （6.5 mg·kg

-1

）. The mice that were successfully modeled were randomized into the model group， the low dose Sanjiao Qushi prescription group（3.71 g·kg

-1

）， the high dose Sanjiao Qushi prescription group（7.42 g·kg

-1

） and benazepril hydrochloride group（1.3 mg·kg

-1

）. And they were administered with the corresponding medicine by gavage once a day for four consecutive weeks. 24 hour-urine protein quantitation were performed before C-BSA injection and after C-BSA injection as well as the medicine gavage. When the treatment was finished， all of the mice were sacrificed and the biochemical indicators such as serum creatinine（SCr）， blood urea nitrogen（BUN）， triglyceride（TG）， total cholesterol（TC）， total protein（TP） and albumin（Alb） were measured. And the renal pathological morphology changes were observed by light microscope with hematoxylineosin（HE）， Masson and periodic acid-silver metheramine（PASM） staining. The deposition of immunoglobulin G（IgG） in the glomerulus was detected by fluorescence microscope. The expression of reactive oxygen species （ROS） of kidney was detected by fluorescence immunoassay. The protein expression levels of Nrf2 in cell nucleus and cytoplasm and the downstream protein factors HO-1 and NADH quinone acceptor oxidoreductase 1（NQO1） were detected by Western blot.

Result

Compare to normal group， the levels of 24 hour-urine protein quantitation， TG and TC significantly increased in model group（

0.01）， while TP and Alb levels significantly decreased（

0.01）. The model group exhibited enlarged volume of glomerular， significantly thickened glomerular basement membrane（GBM）， fuchsinophilic protein deposition and spike formation through light microscope. Immunofluorescence staining for the model group exhibited granular deposition of IgG along the capillary wall. The expression of ROS in kidney significantly increased（

0.01）. The protein expression levels of Nrf2 in cell nucleus significantly increased（

0.01）， while Nrf2 in cytoplasm significantly decreased（

0.01）.The protein expression levels of HO-1 and NQO1 significantly increased（

0.01）. Compared to model group， the levels of 24 hour-urine protein quantitation， TG and TC significantly decreased in each treated group（

0.01）， TP and Alb levels significantly increased（

0.05，

0.01）. The pathological damages alleviated obviously. The expression of ROS in kidney significantly decreased（

0.01）. The protein expression levels of Nrf2 in cell nucleus significantly decreased（

0.01）， while Nrf2 in cytoplasm significantly increased（

0.05，

0.01）. The protein expression levels of HO-1 and NQO1 significantly increased（

0.01）.

Conclusion

Sanjiao Qushi prescription worked on MN mice possibly by regulating related proteins in the Nrf2/HO-1 signaling pathway and relieving oxidative stress， thus decreasing 24 hour-urine protein and blood lipid， increasing serum protein， and alleviating the pathological damages to protect renal function and delay progress of the disease.

关键词

Keywords

references

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