多伞阿魏的冰冻切片方法建立及挥发油、香豆素类成分组织化学定位分析

赵媛媛; 马颖; 刘双双; 刘朦朦; 卢昕; 姚佳琦; 张思维; 朱芸

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211860

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多伞阿魏的冰冻切片方法建立及挥发油、香豆素类成分组织化学定位分析

药学基础 | 更新时间：2022-06-09

- 多伞阿魏的冰冻切片方法建立及挥发油、香豆素类成分组织化学定位分析
  增强出版
- Establishment of Cryosectioning Method and Histochemical Localization Analysis of Volatile Oil and Coumarin Components of Ferula ferulaeoides
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第13期页码：161-166
- 作者机构：
  
  石河子大学药学院，新疆植物药资源利用教育部重点实验室，新疆石河子 832000
- 作者简介：
  
  赵媛媛，在读硕士，从事生药鉴定与质量控制的研究，E-mail：2953914647@qq.com
  朱芸，教授，从事新疆特色植物药的鉴定和品质评价方面的研究，Tel：0993-2055002，E-mail：20945549@qq.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(31860041)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211860
  中图分类号： R22;R28;R931;O766
- 收稿日期：2021-06-15，
  
  网络出版日期：2021-08-24，
  
  纸质出版日期：2022-07-05
- 稿件说明：
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赵媛媛,马颖,刘双双等.多伞阿魏的冰冻切片方法建立及挥发油、香豆素类成分组织化学定位分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):161-166.

ZHAO Yuanyuan,MA Ying,LIU Shuangshuang,et al.Establishment of Cryosectioning Method and Histochemical Localization Analysis of Volatile Oil and Coumarin Components of Ferula ferulaeoides[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):161-166.
赵媛媛,马颖,刘双双等.多伞阿魏的冰冻切片方法建立及挥发油、香豆素类成分组织化学定位分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):161-166. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211860.

ZHAO Yuanyuan,MA Ying,LIU Shuangshuang,et al.Establishment of Cryosectioning Method and Histochemical Localization Analysis of Volatile Oil and Coumarin Components of Ferula ferulaeoides[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):161-166. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211860.

摘要

目的

建立多伞阿魏的冰冻切片方法，并对其不同器官中挥发油和香豆素类成分进行组织化学定位研究。

方法

以多伞阿魏根、茎、叶柄、叶为材料，考察蔗糖保护剂质量分数、液氮速冻时间、包埋条件、切片厚度、冷冻温度和时间、后处理方式等影响因素，对比冰冻切片的完整度、显微效果、伸卷度和清晰度，进而筛选最佳切片条件。分别利用苏丹Ⅳ染色法和荧光显微镜技术定位多伞阿魏的挥发油和香豆素类成分。

结果

多伞阿魏根、茎、叶柄、叶冰冻切片的最佳条件为根以质量分数10%、15%、20%梯度蔗糖作为保护剂；茎和叶柄以质量分数10%、20%、30%梯度蔗糖作为保护剂；叶以质量分数20%、25%、30%梯度蔗糖作为保护剂；以胶水-水（2∶1）作为包埋剂；液氮速冻20 s，-25 ℃回温30 min；-20 ℃下切片，切片厚度25 μm；贴片后用相同质量分数的蔗糖溶液冲洗，将切片在冰袋上静置一段时间，于常温条件下保存，其中蔗糖保护剂质量分数是最主要的影响因素。组织化学定位结果显示，多伞阿魏4种器官中挥发油和香豆素类成分均主要分布于树脂道。

结论

该研究首次建立了多伞阿魏冰冻切片方法，该方法成片率高、步骤相对简化；多伞阿魏的挥发油和香豆素类成分主要积累在树脂道中。

Abstract

Objective

To establish the frozen section method of

Ferula ferulaeoides

， and to study the histochemical localization of volatile oil and coumarins in different organs of

F. ferulaeoides

Method

The roots， stems， petioles and leaves of

F. ferulaeoides

were used as materials to investigate the concentration of sucrose protectant， liquid nitrogen flash-freezing time， embedding conditions， section thickness， freezing temperature and time and post-treatment methods， the most suitable section conditions were screened by comparing the integrity， microscopic effect， elongation and clarity of frozen sections. Sudan Ⅳ staining method and fluorescence microscopy were used to locate the volatile oil and coumarins of

F. ferulaeoides

Result

The optimal conditions for frozen sections of the roots， stems， petioles and leaves of

F. ferulaeoides

were as follows：10%， 15% and 20% gradient sucrose as the protectant for roots， 10%， 20% and 30% gradient sucrose as the protectant for stems and petioles， 20%， 25% and 30% gradient sucrose as the protectant for leaves， glue-water （2∶1） as the embedding agent， quick-freeze in liquid nitrogen for 20 s， warmed up at -25 ℃ for 30 min， sliced at -20 ℃ with the thickness of 25 μm， rinsed with the same concentration of sucrose solution （gradient sucrose solution selected the last concentration）， and the slices placed on the ice pack for a period of time and stored at room temperature. Among them， the concentration of sucrose protectant was the most important factor. The results of histochemical localization showed that volatile oil and coumarins in four organs of

F. ferulaeoides

were mainly distributed in resin canal.

Conclusion

Frozen section of

F. ferulaeoides

is established for the first time with high rate of slicing and simplified steps， its volatile oil and coumarins are mainly accumulated in resin canal.

关键词

Keywords

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