基于NLRP3炎症小体探讨地奥心血康抗动脉粥样硬化作用机制

何祥; 李国莺; 汪丹丹; 陈光亮

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211904

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基于NLRP3炎症小体探讨地奥心血康抗动脉粥样硬化作用机制

药理 | 更新时间：2021-09-24

- 基于NLRP3炎症小体探讨地奥心血康抗动脉粥样硬化作用机制
- Investigation on Anti-atherosclerosis Mechanism of Di'ao Xinxuekang Based on NLRP3 Inflammasome
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第20期页码：55-62
- 作者机构：
  
  安徽中医药大学中西医结合学院，中药复方安徽省重点实验室，合肥 230012
- 作者简介：
  
  何祥，在读硕士，从事药物防治代谢性疾病研究，E-mail：1430682903@qq.com
  * 陈光亮，博士，教授，从事药物防治代谢性疾病研究，E-mail：chguangl@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81573670);地奥集团创新课题(XXK-E190105A)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211904
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2021-06-15，
  
  网络出版日期：2021-08-13，
  
  纸质出版日期：2021-10-20
- 稿件说明：
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何祥,李国莺,汪丹丹等.基于NLRP3炎症小体探讨地奥心血康抗动脉粥样硬化作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(20):55-62.

HE Xiang,LI Guo-ying,WANG Dan-dan,et al.Investigation on Anti-atherosclerosis Mechanism of Di'ao Xinxuekang Based on NLRP3 Inflammasome[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(20):55-62.
何祥,李国莺,汪丹丹等.基于NLRP3炎症小体探讨地奥心血康抗动脉粥样硬化作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(20):55-62. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211904.

HE Xiang,LI Guo-ying,WANG Dan-dan,et al.Investigation on Anti-atherosclerosis Mechanism of Di'ao Xinxuekang Based on NLRP3 Inflammasome[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(20):55-62. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211904.

摘要

目的

研究地奥心血康（Di'ao Xinxuekang，DXXK）对小鼠RAW264.7巨噬细胞和动脉粥样硬化（Atherosclerosis， AS）大鼠胸主动脉NOD样受体3（NLRP3）炎症小体的影响，探讨其抗AS的作用机制。

方法

氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激RAW264.7细胞建立体外模型，MCC950和DXXK干预，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-

（TNF-

），白细胞介素-1

（IL-1

）含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NLRP3，衔接蛋白凋亡相关斑点样蛋白（ASC）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1） mRNA和蛋白的表达。60只雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，阿托伐他汀组（2 mg·kg

-1

），DXXK高、中、低剂量组（100，30，10 mg·kg

-1

），每组10只。采用高脂饲料+维生素D

建立AS模型，全自动生化分析仪检测血脂水平，计算AS指数（AI）；ELISA检测血清TNF-

，IL-1

含量；Real-time PCR和Western blot检测胸主动脉NLRP3，ASC，Caspase-1 mRNA和蛋白的表达；苏木素-伊红（HE）染色和天狼星红染色观察腹主动脉及主动脉窦病理形态学变化。

结果

与正常组比较，模型组RAW264.7细胞TNF-

，IL-1

与NLRP3，ASC，Caspase-1 mRNA和蛋白表达显著升高（

0.01）；与模型组比较，各药物组上述指标明显降低（

0.05，

0.01）。与模型组比较，DXXK组大鼠胆固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），AI显著降低，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）明显升高（

0.05，

0.01），血清TNF-

，IL-1

与胸主动脉NLRP3，ASC，Caspase-1 mRNA和蛋白表达明显降低（

0.05，

0.01），腹主动脉病变及主动脉窦纤维增生明显改善。

结论

DXXK具有显著的抗AS作用，抑制NLRP3炎症小体可能是其作用机制之一。

Abstract

Objective

To investigate the effects of Di'ao Xinxuekang （DXXK） on NLRP3 inflammasome in mouse RAW264.7 macrophages and thoracic aorta of rats with atherosclerosis （AS）， so as to explore its anti-AS mechanism.

Method

RAW264.7 cells were stimulated with oxidized low density lipoprotein （ox-LDL） and then intervened with MCC950 and DXXK. The contents of tumor necrosis factor-

（TNF-

） and interleukin-1

（IL-1

） were determined by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. The mRNA and protein expression levels of Nod-like receptor protein 3 （NLRP3）， inflammasome adaptor protein apoptosis-associated speck-like protein containing CARD （ASC）， and cysteine-dependent aspartate-directed protease-1 （Caspase-1） were detected by real-time polymerase chain reaction （Real-time PCR） and Western blotting. Sixty male SD rats were randomly divided into the normal group， model group， atorvastatin group （2.0 mg·kg

-1

）， as well as high-， medium-， and low-dose （100， 30， and 10 mg·kg

-1

） DXKK groups， with 10 rats in each group. The rats were exposed to the high-fat diet and vitamin D

for inducing AS. The blood lipid level was measured using an automatic biochemical analyzer， followed by the calculation of AS index （AI）. The contents of serum TNF-

and IL-1

were determined by ELISA， and the mRNA and protein expression levels of NLRP3， ASC， and Caspase-1 in thoracic aorta were assayed by Real-time PCR and Western blotting. HE staining and Sirius red staining were conducted to observe the pathomorphological changes in the abdominal aorta and aortic sinus.

Result

Compared with the normal group， the model group exhibited significantly increased TNF-

and IL-1

contents and up-regulated NLRP3， ASC， and Caspase-1 mRNA and protein expression in RAW264.7 cells （

0.01）. The above indexes in each drug administration group were significantly reduced in contrast to those in the model group （

0.05，

0.01）. The comparison with the model group showed that cholesterol （TC）， triglyceride （TG）， low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， and AI in each DXXK group significantly declined， while the high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） was significantly elevated （

0.05，

0.01）. The levels of serum TNF-

and IL-1

and the mRNA and protein expression levels of NLRP3， ASC， and Caspase-1 in the thoracic aorta were decreased （

0.05，

0.01）. Abdominal aortic lesions and fibrous hyperplasia of aortic sinus were significantly improved.

Conclusion

DXXK has a significant anti-AS effect， which is possibly related to the inhibition of NLRP3 inflammasome.

关键词

Keywords

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