基于Wnt/<italic style="font-style: italic">β</italic>-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

张贝贝; 张艳; 王风仙; 杨婷; 徐晶; 解伟; 王进

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20212423

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基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

药理 | 更新时间：2021-11-12

- 基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制
- Anti-breast Cancer Activities in Vitro of Oxymatrine Combined with Bevacizumab： An Exploration Focusing on EMT Regulation Through Wnt/β-catenin
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第24期页码：109-117
- 作者机构：
  
  上海健康医学院药学院，上海 201318
- 作者简介：
  
  张贝贝，从事抗肿瘤药物活性研究，E-mail：okbei2021@163.com
  解伟，博士，副教授，从事基因工程抗体与肿瘤免疫治疗研究，Tel：021-65887579，E-mail：xiew@sumhs.edu.cn
  * 王进，博士，副教授，从事抗肿瘤药物筛选及作用机制研究，Tel：021-65887579，E-mail：wangj@sumhs.edu.cn； *
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(NSFC81703401);2021年国家级大学生创新创业训练项目(202110262055)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20212423
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2021-08-27，
  
  网络出版日期：2021-10-26，
  
  纸质出版日期：2021-12-20
- 稿件说明：
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张贝贝,张艳,王风仙等.基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(24):109-117.

ZHANG Bei-bei,ZAHNG Yan,WANG Feng-xian,et al.Anti-breast Cancer Activities in Vitro of Oxymatrine Combined with Bevacizumab： An Exploration Focusing on EMT Regulation Through Wnt/β-catenin[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(24):109-117.
张贝贝,张艳,王风仙等.基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(24):109-117. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20212423.

ZHANG Bei-bei,ZAHNG Yan,WANG Feng-xian,et al.Anti-breast Cancer Activities in Vitro of Oxymatrine Combined with Bevacizumab： An Exploration Focusing on EMT Regulation Through Wnt/β-catenin[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(24):109-117. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20212423.

摘要

目的

观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用，并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/

-连环蛋白（

-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。

方法

采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，16.0 mmol·L

-1

）及BV（0，0.25×10

-4

，0.50×10

-4

，1.00×10

-4

，2.00×10

-4

，4.00×10

-4

，8.00×10

-4

mmol·L

-1

）联合后对MCF-7细胞增殖的影响；通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L

-1

）与BV（2.00×10

-4

mmol·L

-1

）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L

-1

）与BV（2.00×10

-4

mmol·L

-1

）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响，并对Wnt/

-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。

结果

与空白组比较，OM（2.0，4.0，8.0，16.0 mmol·L

-1

）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（

0.05，

0.01），而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用，两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较，OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（

0.01），BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（

0.05，

0.01）。与BV比较，联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（

0.01）。与空白组比较，OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（

0.01）；OM及两药联用后显著降低Wnt/

-catenin信号通路中

-catenin，原癌基因（c-Myc），CD44，G

/S-特异性周期蛋白-D

（cyclin D

）蛋白表达（

0.05，

0.01）；OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞

-钙黏蛋白（

-cadherin），波形蛋白（Vimentin）蛋白表达，增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（

0.01），BV组上述相关蛋白的表达相反（

0.05，

0.01）。

结论

OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/

-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。

Abstract

Objective

To observe the effect of oxymatrine （OM） combined with bevacizumab （ BV ） on the proliferation， invasion， and migration of breast cancer MCF-7 cells and explore the mechanism of OM in regulating BV-induced epithelial-mesenchymal transition （EMT） based on the Wnt/

-catenin signaling pathway.

Method

The effect of different concentrations of OM（0， 0.5， 1.0， 2.0， 4.0， 8.0， 16.0 mmol·L

-1

）and BV（0， 0.25×10

-4

， 0.50×10

-4

， 1.00×10

-4

， 2.00×10

-4

， 4.00×10

-4

， and 8.00×10

-4

mmol·L

-1

）on the proliferation of MCF-7 cells were detected by cell counting kit-8（CCK-8）assay. The effect of OM（4.0 mmol·L

-1

） combined with BV（2.00×10

-4

mmol·L

-1

）on the invasion and migration of MCF-7 cells were observed in transwell and scratch repair tests. Western blot was conducted to investigate the effect of OM（4.0 mmol·L

-1

）combined with BV （2.00×10

-4

mmol·L

-1

） on proliferation-related proteins in MCF-7 cells， followed by the detection of the expression levels of Wnt/

-catenin signaling pathway- and EMT-related proteins.

Result

Compared with the blank group， OM （2.0，4.0，8.0，16.0 mmol·L

-1

） inhibited the proliferation of MCF-7 cells in a concentration-dependent manner （

0.01）， while BV did not show the inhibitory effect against the proliferation of MCF-7 cells. The inhibitory effect of the combination of the two drugs on the proliferation of MCF-7 cells was not significantly different from that of OM. Compared with the blank group， OM significantly reduced the migration distance of MCF-7 cells and the number of invaded cells（

0.01）， while BV increased the migration distance of MCF-7 cells and the number of invaded cells （

0.05，

0.01）. Compared with BV， its combination with OM significantly inhibited the invasion and migration of MCF-7 cells induced by BV （

0.01）. Compared with the blank group， both OM and the combined medication obviously inhibited the phosphorylation of proliferation-related protein kinase B（Akt） and extracellular-signal-regulated protein kinase 1/2 （ERK1/2）in MCF-7 cells （

0.01） and down-regulated the protein expression levels of

-catenin， proto-oncogene （c-Myc）， CD44， and G

/S-specific cyclin D

in Wnt/

-catenin signaling pathway （

0.05，

0.01）. Besides， OM and the combination of two drugs both significantly reduced the protein expression levels of calcium-dependent cell adhesion protein

-cadherin and Vimentin in EMT， whereas increased the expression of calcium-dependent cell adhesion protein E-cadherin（

0.01）. However， the expression of the above-mentioned proteins in the BV group was reversed （

0.05，

0.01）.

Conclusion

After the combination with BV， OM plays an anti-breast cancer role by effectively inhibiting the activation of Wnt/

-catenin pathway induced by BV and reversing EMT.

关键词

Keywords

references

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