基于RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响

靳贺超; 张冠文; 梁胜然; 强家维; 郭登洲

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20212440

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基于RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响

当归补血汤干预糖尿病肾病大鼠足细胞损伤研究专题 | 更新时间：2021-12-31

- 基于RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响
- Effect of Danggui Buxuetang on Podocyte Injury in Diabetic Kidney Disease Rats： An Exploration Based on RIPK1/RIPK3/MLKL Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第3期页码：41-48
- 作者机构：
  
  1.河北中医学院，石家庄 050200
  2.河北省中医院，石家庄 050011
- 作者简介：
  
  靳贺超，在读博士，从事中医药治疗肾病的研究，E-mail：jinxiaochi1987@163.com
  郭登洲，教授，博士生导师，从事中医药治疗肾病的研究，E-mail：guodengzhou@sohu.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81373804);河北省博士研究生创新项目(CXZZBS2021087)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20212440
  中图分类号： R2-0;R289;R33;R587.1
- 收稿日期：2021-06-30，
  
  网络出版日期：2021-11-03，
  
  纸质出版日期：2022-02-05
- 稿件说明：
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靳贺超,张冠文,梁胜然等.基于RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(03):41-48.

JIN He-chao,ZHANG Guan-wen,LIANG Sheng-ran,et al.Effect of Danggui Buxuetang on Podocyte Injury in Diabetic Kidney Disease Rats： An Exploration Based on RIPK1/RIPK3/MLKL Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(03):41-48.
靳贺超,张冠文,梁胜然等.基于RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(03):41-48. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20212440.

JIN He-chao,ZHANG Guan-wen,LIANG Sheng-ran,et al.Effect of Danggui Buxuetang on Podocyte Injury in Diabetic Kidney Disease Rats： An Exploration Based on RIPK1/RIPK3/MLKL Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(03):41-48. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20212440.

摘要

目的

观察当归补血汤对糖尿病肾病（DKD）大鼠足细胞损伤及受体相互作用蛋白激酶1/受体相互作用蛋白激酶3/混合系激酶区域样蛋白（RIPK1/RIPK3/MLKL）信号通路的影响，探讨其治疗DKD的可能作用机制。

方法

50只SD大鼠随机选取8只设为正常组，其余大鼠6周高糖高脂饮食结合一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）0.035 g·kg

-1

制备2型糖尿病大鼠模型。模型制备成功后随机分为模型组，当归补血汤高、低剂量（1.44，0.72 g·kg

-1

）组，厄贝沙坦（0.017 g·kg

-1

）组。药物干预20周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG），肾重指数（KI），尿微量白蛋白与尿肌酐比值（UACR）；苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态学变化；透射电镜观察足细胞超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾组织肿瘤坏死因子-

（TNF-

），白细胞介素-6（IL-6）水平；免疫组化法检测大鼠肾组织RIPK1，RIPK3，MLKL蛋白表达；原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠肾脏足细胞凋亡率；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织RIPK1，RIPK3，MLKL mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织RIPK1，RIPK3，MLKL蛋白及足细胞标志蛋白肿瘤蛋白-1（WT-1）表达水平。

结果

与正常组比较，模型组大鼠FBG，UACR，KI显著升高（

0.01），肾小球肥大，基底膜增厚，系膜外基质增多，系膜增生，足突融合或丢失，肾组织凋亡细胞明显增多，TNF-

及IL-6水平显著升高（

0.01），WT-1蛋白表达水平显著降低，RIPK1/RIPK3/MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高（

0.01）；与模型组比较，当归补血汤高剂量组明显降低FBG，UACR，KI水平，明显改善肾组织病理学，减少足细胞的丢失，减少肾组织细胞凋亡，降低TNF-

及IL-6水平，升高WT-1蛋白表达水平，降低RIPK1/RIPK3/MLKL mRNA及蛋白表达水平（

0.05，

0.01）。

结论

当归补血汤可能通过调控RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路，改善足细胞损伤，从而延缓DKD的发展进程。

Abstract

Objective

To observe the effect of Danggui Buxuetang on the podocyte injury and receptor-interacting protein kinase 1/receptor-interacting protein kinase3/mixed lineage kinase domain-like protein （RIPK1/RIPK3/MLKL） signaling pathway in diabetic kidney disease （DKD） ratsand to explore its possible mechanism against DKD.

Method

Eight of the 50 SD rats were randomly classified intoa normal group， and the remaining were fed a high-glucose and high-fat diet for six weeks and then intraperitoneally injected with 0.035 g·kg

-1

streptozotocin （STZ） for inducing type 2 diabetes. After successful modeling，they were randomized into the model group，high- and low-dose （1.44，0.72 g·kg

-1

） Danggui Buxuetang groups， and irbesartan （0.017 g·kg

-1

）group. After 20 weeks of drug intervention， the fasting blood glucose （FBG）， kidney index （KI），and urinary microalbumin-to-urine creatinine ratio （UACR）were detected in each group. The pathological changes in renal tissue were observed by hematoxylin-eosin （HE） staining， followed by the observation of ultrastructural changes in podocytes under the transmission electron microscope. The levels of tumor necrosis factor-

（TNF-

） and interleukin-6 （IL-6） in renal tissue of rats were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， and the protein expression levels of RIPK1， RIPK3， and MLKL in rat kidney tissue by immunohistochemistry. The apoptosis rate of podocytes was detected by in situ

nick end-labeling （TUNEL） assay. The mRNA expression levels of RIPK1， RIPK3， and MLKL in kidney tissue of rats were measured by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）， and the protein expression levels of RIPK， RIPK3， and MLKL and podocyte marker Wilms tumor protein-1 （WT-1） in rat kidney tissue were assayed by Western blot.

Result

Compared with the normal group， the model group exhibited elevated FBG， UACR， and KI （

0.01）， glomerular hypertrophy， thickened basement membrane， increased extracellular matrix， mesangial hyperplasia， foot process fusion or loss， enhanced apoptosis in renal tissue， up-regulated TNF-

and IL-6 levels （

0.01） and RIPK1/RIPK3/MLKL mRNA and protein expression （

0.01）， and down-regulated WT-1 protein expression. Compared with the model group， Danggui Buxuetang high-dose group significantly reduced the levels of FBG， UACR， and KI， improved renal histopathology， podocyte loss， and apoptosis in renal tissue， down-regulated TNF-

and IL-6 levels and RIPK1/RIPK3/MLKL mRNA and protein expression （

0.05，

0.01）， and up-regulated WT-1 protein expression.

Conclusion

Danggui Buxuetang alleviates podocyte injury and delays the development of DKD possibly by regulating the RIPK1/RIPK3/MLKL signaling pathway.

关键词

Keywords

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