肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药

夏尽力; 蔡玥娇; 吴新鸿; 王中奇; 邓海滨

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.2022002024

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肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药

药理 | 更新时间：2023-01-17

- 肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药
- Chinese Herbal Medicine Feiyanning Prescription Regulates EMT to Reverse Cisplatin Resistance in Non-small Cell Lung Cancer
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第4期页码：43-51
- 作者机构：
  
  上海中医药大学附属龙华医院，上海 200032
- 作者简介：
  
  夏尽力，硕士，从事中医及中西医结合治疗恶性肿瘤的临床及实验研究，E-mail：xiajinli@163.com
  邓海滨，博士，主任医师，从事中医及中西医结合治疗恶性肿瘤的临床及实验研究，E-mail：13661578200@139.com
- 基金信息：
  
  上海市教育委员会科研创新计划重大项目(2017-01-07-00-10-E00064);上海市中医药领军人才培养计划项目（ZY（2018-2020）-RCPY-10010）
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.2022002024
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2022-03-01，
  
  网络出版日期：2022-08-17，
  
  纸质出版日期：2023-02-20
- 稿件说明：
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夏尽力,蔡玥娇,吴新鸿等.肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(04):43-51.

XIA Jinli,CAI Yuejiao,WU Xinhong,et al.Chinese Herbal Medicine Feiyanning Prescription Regulates EMT to Reverse Cisplatin Resistance in Non-small Cell Lung Cancer[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(04):43-51.
夏尽力,蔡玥娇,吴新鸿等.肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(04):43-51. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.2022002024.

XIA Jinli,CAI Yuejiao,WU Xinhong,et al.Chinese Herbal Medicine Feiyanning Prescription Regulates EMT to Reverse Cisplatin Resistance in Non-small Cell Lung Cancer[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(04):43-51. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.2022002024.

摘要

目的

观察肺岩宁方（肺岩宁）对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响，并探究其可能存在的机制。

方法

细胞增殖与活性检测（CCK-8）法观察顺铂（0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mg⋅L

-1

）对A549和A549/DDP（顺铂耐药）细胞细胞增殖能力的影响，肺岩宁（0、100、200、300、400、500、600 mg⋅L

-1

）对A549/DDP细胞增殖能力影响；免疫荧光染色、蛋白免疫印迹法（WB）观察A549和A549/DDP组上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达；将A549/DDP细胞分为空白组、肺岩宁组（200 mg⋅L

-1

）、顺铂组（6.0 mg⋅L

-1

）和联合用药组［肺岩宁（200 mg⋅L

-1

）+顺铂（6.0 mg⋅L

-1

）］，并进行相应处理，侵袭小室（transwell）实验比较各组侵袭能力；WB检测各组EMT相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和免疫荧光染色分别检测各组耐药因子mRNA和蛋白表达。

结果

与A549组比较，A549/DDP组对顺铂耐药性显著增高（

0.01）；E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达降低，波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Snail）蛋白表达升高（

0.05，

0.01）。经肺岩宁、顺铂处理后，与空白组比较，肺岩宁可浓度依赖性抑制A549/DDP细胞增殖（

0.01）；肺岩宁组、顺铂组、联合用药组侵袭能力降低（

0.01）；与顺铂组比较，联合用药组侵袭能力显著降低（

0.01）。与空白组比较，肺岩宁组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（

0.01），顺铂组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低，Snail蛋白表达升高（

0.05，

0.01）；联合用药组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（

0.01）；与顺铂组比较，联合用药组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（

0.01）。与空白组比较，肺岩宁组肺耐药相关蛋白（LRP）、多药耐药因子1（MDR1）蛋白和mRNA表达降低，拓扑异构酶Ⅱ

（TOPO Ⅱ

）蛋白和mRNA表达升高（

0.01）；顺铂组LRP、MDR1、TOPO Ⅱ

蛋白和mRNA表达升高（

0.01）；联合用药组LRP蛋白和mRNA表达无明显改变，MDR1、TOPO Ⅱ

蛋白和mRNA表达升高（

0.01）；与顺铂组比较，肺岩宁组、联合用药组LRP、MDR1蛋白和mRNA表达降低，TOPO Ⅱ

蛋白和mRNA表达升高（

0.01）；与肺岩宁组比较，联合用药组LRP、MDR1、TOPO Ⅱ

蛋白和mRNA表达升高（

0.01）。

结论

肺岩宁方能够逆转非小细胞肺癌顺铂耐药，其机制可能与调控EMT进程相关。

Abstract

Objective

To observe the effect of Feiyanning prescription （FYN） on cisplatin （DDP） resistance in non-small cell lung cancer （NSCLC） and explore the underlying mechanism.

Method

Cell counting kit-8 （CCK-8） assay was used to detect the proliferation of A549 and A549/DDP （DDP-resistant） cells treated by DDP （0， 2.0， 4.0， 6.0， 8.0， 10.0 mg⋅L

-1

） and the proliferation of A549/DDP cells treated by FYN （0， 100， 200， 300， 400， 500， 600 mg⋅L

-1

）. Based on immunofluorescence staining and Western blot （WB）， the expression of epithelial mesenchymal transition （EMT）-related proteins in A549 and A549/DDP groups was observed. A549/DDP cells were classified into control group， FYN group （200 mg⋅L

-1

）， DDP group （6.0 mg⋅L

-1

）， and combination group ［FYN （200 mg⋅L

-1

） + DDP （6.0 mg⋅L

-1

）］ and respectively treated with corresponding drugs. Then， invasion ability of each group was examined by transwell assay， and the expression of EMT-related proteins in each group by WB. Moreover， real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR） and immunofluorescence staining were separately applied to detect the mRNA and protein expression of drug resistance-related factors in each group， respectively.

Result

Compared with A549 group， A549/DDP group showed high resistance to DDP （

0.01）， low expression of E-cadherin， and high protein expression of Vimentin， N-cadherin， and Snail （

0.05，

0.01）. As compared with the control group， FYN inhibited the proliferation of A549/DDP cells in a concentration-dependent manner （

0.01）， and the FYN group， DDP group， and combination group demonstrated low invasion ability （

0.01）. In addition， the invasion ability in the combination group was particularly lower than that in the DDP group （

0.01）. The expression of E-cadherin protein was higher and the protein expression of N-cadherin， Vimentin， and Snail was lower in the in FYN group than in the control group （

0.01）. The protein expression of E-cadherin， N-cadherin， and Vimentin was lower and the expression of Snail was higher in the DDP group than in the control group （

0.05，

0.01）. The protein expression of E-cadherin， N-cadherin， Vimentin， and Snail in the combination group decreased as compared with that in the control group （

0.01）. Compared with the DDP alone， the combination raised the expression of E-cadherin and lowered the protein expression of N-cadherin， Vimentin， and Snail （

0.01）. The protein and mRNA expression of lung resistance-related protein （LRP） and multidrug resistance 1 （MDR1） was lower and the protein and mRNA expression of topoisomerase Ⅱ

（TOPO Ⅱ

） was higher in the FYN group than in the control group （

0.01）. The protein and mRNA expression of LRP， MDR1， and TOPO Ⅱ

was higher in the DDP group than in the control group （

0.01）. The expression of LRP protein and mRNA showed no significant variation， but the protein and mRNA expression of MDR1 and TOPO Ⅱ

increased in the combination group compared with those in the control group （

0.01）. Compared with the DDP group， FYN group and combination group showed low protein and mRNA expression of LRP and MDR1 and high protein and mRNA expression of TOPO Ⅱ

（

0.01）. Compared with FYN， the combination elevated the protein and mRNA expression of LRP， MDR1， and TOPO Ⅱ

（

0.01）.

Conclusion

FYN prescription can reverse the DDP resistance of NSCLC by modulating EMT.

关键词

Keywords

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