基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制

李巧稚; 刘嫄淑; 王振涛; 吴鸿; 刘舜禹

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220206

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制

药理 | 更新时间：2022-01-13

- 基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制
- Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第4期页码：26-33
- 作者机构：
  
  1.河南中医药大学，郑州 450046
  2.新密市中医院，河南新密 452370
  3.河南省中医院，郑州 450002
- 作者简介：
  
  李巧稚，在读博士，从事中医药防治心血管疾病研究，E-mail：15136413038@139.com
  王振涛，博士，主任医师，从事中医药防治心血管疾病研究，Tel：0371-60908742，E-mail：13803817796@139.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金会面上项目(81573920);河南省中医药科学研究重大专项(2018ZYZD11)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220206
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2021-09-25，
  
  网络出版日期：2021-11-25，
  
  纸质出版日期：2022-02-20
- 稿件说明：
移动端阅览
李巧稚,刘嫄淑,王振涛等.基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):26-33.

LI Qiao-zhi,LIU Yuan-shu,WANG Zhen-tao,et al.Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):26-33.
李巧稚,刘嫄淑,王振涛等.基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):26-33. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220206.

LI Qiao-zhi,LIU Yuan-shu,WANG Zhen-tao,et al.Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):26-33. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220206.

摘要

目的

探讨抗纤益心方干预自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制，及其与辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）细胞平衡的关系。

方法

将60只SPF级BALB/c健康8周龄雄性小鼠按1∶5的比例随机分为正常组和造模组，在第0，7，28天于造模组小鼠腹股沟、腋下、背部多处皮下注射猪心肌肌球蛋白乳化液0.2 mL（含猪心肌肌球蛋白0.1 mg）以制备心肌免疫损伤小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组，抗纤益心方组（KYP），缬沙坦组（Valsartan），抗纤益心方组给予抗纤益心方20.4 g·kg

-1

·d

-1

灌胃，缬沙坦组给予缬沙坦12 mg·kg

-1

·d

-1

灌胃，正常组和模型组给予同计算量的生理盐水灌胃，连续灌胃4周后取材，苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色检测心肌组织中病理损伤情况，酶联免疫吸附法检测小鼠血清中B型钠尿肽（BNP），抗心肌抗体，白细胞介素-17（IL-17）和白细胞介素-10（IL-10）的表达，流式细胞术检测脾脏Th17，Treg细胞的表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），Bcl-2蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠脾脏转录因子维A酸相关孤独受体

t（ROR

t），叉头框蛋白P3（FoxP3） mRNA表达。

结果

与正常组比较，模型组小鼠心肌病理损伤增加，血清BNP，抗心肌抗体，IL-17升高，IL-10降低（

0.05），脾脏Th17细胞表达水平升高，Treg细胞的表达水平降低（

0.05），心肌组织Bax蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低（

0.05），Bax/Bcl-2值升高，脾脏ROR

t mRNA表达升高，FoxP3 mRNA表达降低，ROR

t/FoxP3升高（

0.05）；与模型组比较，抗纤益心方组及缬沙坦组心肌病理损伤减轻，血清BNP，抗心肌抗体，IL-17降低，IL-10升高（

0.05），脾脏Th17细胞表达水平降低，Treg细胞的表达水平升高（

0.05），心肌组织Bax蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高（

0.05），Bax/Bcl-2降低，脾脏ROR

t mRNA表达降低，FoxP3 mRNA表达升高，ROR

t/FoxP3值降低（

0.05）。

结论

抗纤益心方可能通过调节Th17/Treg细胞平衡改善心肌免疫损伤。

Abstract

Objective

To investigate the immunomodulatory mechanism of Kangxian Yixin prescription （KYP） on autoimmune injury mice and its relationship with the T helper 17 （Th17）/regulatory T cell （Treg） balance.

Method

Sixty healthy 8-week-old male BALBc mice were randomly divided into a normal group and an experimental group at a ratio of 1∶5. On the 0

， 7

， and 28

days， 0.2 mL of porcine cardiac myosin emulsion （containing 0.1 mg of porcine cardiac myosin） was subcutaneously injected into the groin， armpit， and back of the mice in the experimental group to induce an animal model of myocardial immune injury. Mice with myocardial immune injury were randomly divided into a model group （Model）， a KYP group （20.4 g·kg

-1

·d

-1

，

）， and a valsartan group （12 mg·kg

-1

·d

-1

，

）. Mice in the control group and the model group received the same amount of normal saline by gavage. After four weeks of intervention， the heart tissues were collected. Hematoxylin-eosin （HE） staining and Masson staining were used to detect pathological damage in heart tissues. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the expression of type B-type natriuretic peptide （BNP）， anti-cardiac antibody， interleukin-17 （IL-17）， and interleukin-10 （IL-10） in the serum of mice， and the expression levels of Th17 cells and Tregs in the spleen were detected by flow cytometry. The protein expression of B-cell lymphoma-2 （Bcl-2） and Bcl-2-associated X （Bax） in heart tissues was detected by Western blot， and the mRNA expression of retinoid-related orphan receptor gamma t （ROR

t） and forkhead box P3 （FoxP3） in the spleen was detected by quantitative real-time polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Result

Compared with the control group， the model group showed worsened pathological damage in heart tissues， elevated serum levels of BNP， anti-myocardial antibody， and IL-17， decreased serum expression of IL-10 （

0.05）， increased expression of Th17 cells and reduced expression of Tregs in spleen tissues （

0.05）， increased protein expression of Bax， diminished Bcl-2 protein expression， elevated Bax/Bcl-2 ratio， up-regulated mRNA expression of ROR

t， dwindled mRNA expression of FoxP3， and elevated ratio of ROR

t/FoxP3 （

0.05）. Compared with the model group， the KYP group and the valsartan group displayed relieved pathological damage in heart tissues， decreased serum expression of BNP， anti-myocardial antibody， and IL-17， increased serum expression of IL-10 （

0.05）， reduced expression of Th17 cells and increased Tregs in spleen tissues （

0.05）， dwindled protein expression of Bax and elevated protein expression of Bcl-2

in heart tissues （

0.05）， diminished Bax/Bcl-2 ratio， reduced mRNA expression of ROR

t， up-regulated FoxP3， and down-regulated ratio of ROR

t/FoxP3 （

0.05）.

Conclusion

KYP may improve myocardial immune damage by regulating the Th17/Treg cell balance.

关键词

Keywords

references

CARRILLO-SALINAS F J ， NGWENYAMA N ， ANASTASIOU M ， et al . Heart inflammation：immune cell roles and roads to the heart ［J］. Am J Pathol ， 2019 ， 189 （ 8 ）： 1482 - 1494 .

VERDONSCHOT J A J ， MERLO M ， DOMINGUEZ F ， et al . Phenotypic clustering of dilated cardiomyopathy patients highlights important pathophysiological differences ［J］. Eur Heart J ， 2021 ， 42 （ 2 ）： 162 - 174 .

LEE G R . The Balance of Th17 versus Treg cells in autoimmunity ［J］. Int J Mol Sci ， 2018 ， 19 （ 3 ）： 730 .

ZHANG W ， LIU X ， ZHU Y ， et al . Transcriptional and posttranslational regulation of Th17/Treg balance in health and disease ［J］. Eur J Immunol ， 2021 ， 51 （ 9 ）： 2137 - 2150 .

PARK Y J ， CHO M ， CHOI G ， et al . A critical regulation of Th17 cell responses and autoimmune neuro-inflammation by ginsenoside Rg 3 ［J］. Biomolecules ， 2020 ， 10 （ 1 ）： 122 .

YANG L ， HAN X ， YUAN J ， et al . Early astragaloside Ⅳ administration attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice by suppressing the maturation and function of dendritic cells ［J］. Life Sci ， 2020 ， 249 ： 117448 .

黎胜，施梅姐，萧焕明，等 . 自身免疫性肝炎中医医案诊治规律数据挖掘［J］. 中医杂志， 2017 ， 58 （ 14 ）： 1237 - 1240 .

柴松波，王振涛，张淑娟，等 . 抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠内质网应激CHOP通路的影响［J］. 中药药理与临床， 2019 ， 35 （ 2 ）： 128 - 134 .

王振涛，董丽莎，边汝涛，等 . 抗纤益心方通过调控SERCA2a蛋白抑制扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡的机制研究［J］. 中药药理与临床， 2020 ， 36 （ 1 ）： 173 - 177 .

郭宗耀，王振涛 . 基于蛋白质组学探讨抗纤益心方治疗扩张型心肌病的作用机制［J］. 中华中医药杂志， 2020 ， 35 （ 11 ）： 5734 - 5738 .

郭宗耀，王振涛 . 基于网络药理学探讨黄芪治疗扩张型心肌病的机制研究［J］. 中国中西医结合杂志， 2020 ， 40 （ 12 ）： 1464 - 1470 .

邢清敏，陆曙，周永华，等 . 生脉散对DCM大鼠的干预作用及对TLR-4/NF- κ B炎症信号通路的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2018 ， 24 （ 2 ）： 128 - 134 .

刘舜禹，李巧稚，芮浩淼，等 . 抗纤益心方对扩张型心肌病模型大鼠心肌纤维化相关因子及心肌组织 β -catenin/PPAR γ 信号通路的影响［J］. 中医杂志， 2021 ， 62 （ 3 ）： 259 - 265 .

KADHI A ， MOHAMMED F ， NEMER G . The genetic pathways underlying immunotherapy in dilated cardiomyopathy ［J］. Front Cardiovasc Med ， 2021 ， 8 ： 613295 .

VDOVENKO D ， ERIKSSON U . Regulatory role of CD4 + T cells in myocarditis ［J］. J Immunol Res ， 2018 ， doi： 10.1155/2018/4396351 http://dx.doi.org/10.1155/2018/4396351 .

YAN L ， HU F ， YAN X ， et al . Inhibition of microRNA-155 ameliorates experimental autoimmune myocarditis by modulating Th17/Treg immune response ［J］. J Mol Med （Berl）， 2016 ， 94 （ 9 ）： 1063 - 1079 .

LI B ， ZHOU W ， TANG X ， et al . Response gene to complement-32 promotes the imbalance of Treg/Th17 in patients with dilated cardiomyopathy ［J］. Cell Physiol Biochem ， 2017 ， 43 （ 4 ）： 1515 - 1525 .

YASUDA K ， TAKEUCHI Y ， HIROTA K . The pathogenicity of Th17 cells in autoimmune diseases ［J］. Semin Immunopathol ， 2019 ， 41 （ 3 ）： 283 - 297 .

WU B ， WAN Y . Molecular control of pathogenic Th17 cells in autoimmune diseases ［J］. Int Immunopharmacol ， 2020 ， 80 ： 106187 .

CAPONE A ， VOLPE E . Transcriptional regulators of T helper 17 cell differentiation in health and autoimmune diseases ［J］. Front Immunol ， 2020 ， 11 ： 348 .

OHKURA N ， SAKAGUCHI S . Transcriptional and epigenetic basis of Treg cell development and function：its genetic anomalies or variations in autoimmune diseases ［J］. Cell Res ， 2020 ， 30 （ 6 ）： 465 - 474 .

HAN Y ， LAI J ， TAO J ， et al . Sustaining circulating regulatory T cell subset contributes to the therapeutic effect of paroxetine on mice with diabetic cardiomyopathy ［J］. Circ J ， 2020 ， 84 （ 9 ）： 1587 - 1598 .

SHI H ， CHI H . Metabolic control of Treg cell stability，plasticity，and tissue-specific heterogeneity ［J］. Front Immunol ， 2019 ， 10 ： 2716 .

ILATOVSKAYA D V ， HALADE G V ， DELEON-PENNELL K Y . Adaptive immunity-driven inflammation and cardiovascular disease ［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol ， 2019 ， 317 （ 6 ）： H1254 - H1257 .

LEE J ， BAEK S ， LEE J ， et al . Digoxin ameliorates autoimmune arthritis via suppression of Th17 differentiation ［J］. Int Immunopharmacol ， 2015 ， 26 （ 1 ）： 103 - 111 .

曾垂义，王振涛，陈磊 . 抗纤益心方治疗扩张型心肌病患者疗效观察［J］. 中国实验方剂学杂志， 2013 ， 19 （ 23 ）： 321 - 323 .

曾垂义，王振涛，陈磊 . 抗纤益心方对扩张型心肌病患者心脏超声指标的影响［J］. 世界科学技术—中医药现代化， 2014 ， 16 （ 1 ）： 109 - 111 .

王振涛，刘舜禹，柴松波，等 . 抗纤益心方治疗扩张型心肌病的队列研究［J］. 时珍国医国药， 2020 ， 31 （ 2 ）： 378 - 380 .

王振涛，任雪萍，吴鸿，等 . 抗纤益心方干预线粒体通透性转换孔抑制心肌细胞凋亡的机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 18 ）： 42 - 48 .

王振涛，闫京京，吴鸿，等 . 抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响［J］. 中医杂志， 2019 ， 60 （ 21 ）： 1866 - 1869 .

常红波，王振涛，黑炫鼎，等 . 抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌能量代谢和解偶联蛋白2的影响［J］. 中药药理与临床， 2021 ， 37 （ 3 ）： 166 - 170 .

常红波，王振涛，刘舜禹，等 . 抗纤益心方通过AMPK/mTOR通路改善扩张型心肌病大鼠心功能的作用机制［J］. 北京中医药大学学报， 2021 ， 44 （ 1 ）： 54 - 59 .

王振涛，常红波，郭宗耀，等 . 基于扩张型心肌病大鼠模型研究内质网应激介导细胞凋亡和相关信号转导通路的时相性变化［J］. 中华中医药杂志， 2020 ， 35 （ 4 ）： 1705 - 1708 .

岳超颖，吴羴，周君，等 . 红参多糖体外抗氧化的研究［J］. 实验室科学， 2019 ， 22 （ 1 ）： 49 - 52，6 .

ZHANG W ， ZHANG M ， CHENG A ， et al . Immunomodulatory and antioxidant effects of Astragalus polysaccharide liposome in large yellow croaker （ Larimichthys crocea ）［J］. Fish Shellfish Immunol ， 2020 ， 100 ： 126 - 136 .

杨向竹，赵俊云，薛慧清，等 . 黄芪糖蛋白对小鼠脾淋巴细胞的体外作用［J］. 中国药学杂志， 2011 ， 46 （ 23 ）： 1811 - 1813 .

WANG Y ， REN T ， ZHENG L ， et al . Astragalus saponins inhibits lipopolysaccharide-induced inflammation in mouse macrophages ［J］. Am J Chin Med ， 2016 ， 44 （ 3 ）： 579 - 593 .

吕仕超，吴美芳，李萌，等 . 芪参益气滴丸对自身免疫性心肌炎大鼠心肌胶原代谢的影响［C］//第九届全国免疫学学术大会论文集.［出版者不详］， 2014 ： 722 - 723 .

KIM J ， BYEON H ， IM K ， et al . Effects of ginsenosides on regulatory T cell differentiation ［J］. Food Sci Biotechnol ， 2018 ， 27 （ 1 ）： 227 - 232 .

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

基于“转录组-成分靶标-表型基因”多维网络全局式探索化湿败毒方抗心肌损伤潜在作用机制

心肌细胞铁死亡的机制及中药的保护作用

抗纤益心方干预线粒体通透性转换孔抑制心肌细胞凋亡的机制

清开灵注射液辅助治疗小儿脓毒症毒热证的临床疗效

中医药治疗新型冠状病毒肺炎心肌损伤