茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制

罗园园; 冯心怡; 褚泽文; 朱虹; 刘延庆; 王海波

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.202202127

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茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制

药理 | 更新时间：2023-05-17

- 茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制
- Mechanism of Pachymic Acid in Inhibiting Invasion and Metastasis of Renal Carcinoma Cells via Regulating MMP/TIMP Balance by Smads
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第7期页码：76-83
- 作者机构：
  
  扬州大学医学院，国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室，扬州大学-扬州市肿瘤研究所，江苏扬州 225001
- 作者简介：
  
  罗园园，在读硕士，从事中西医结合抗肿瘤的临床与基础研究，E-mail：lyy528539840@163.com
  王海波，博士，讲师，从事中西医结合抗肿瘤的临床与基础研究，E-mail：whbosy@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(82104946;81773944);江苏省自然科学基金项目(BK20210817);江苏省中医药科技发展计划项目(QN202008)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.202202127
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2022-06-04，
  
  网络出版日期：2022-09-13，
  
  纸质出版日期：2023-04-05
- 稿件说明：
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罗园园,冯心怡,褚泽文等.茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(07):76-83.

LUO Yuanyuan,FENG Xinyi,CHU Zewen,et al.Mechanism of Pachymic Acid in Inhibiting Invasion and Metastasis of Renal Carcinoma Cells via Regulating MMP/TIMP Balance by Smads[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(07):76-83.
罗园园,冯心怡,褚泽文等.茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(07):76-83. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202202127.

LUO Yuanyuan,FENG Xinyi,CHU Zewen,et al.Mechanism of Pachymic Acid in Inhibiting Invasion and Metastasis of Renal Carcinoma Cells via Regulating MMP/TIMP Balance by Smads[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(07):76-83. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202202127.

摘要

目的

探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸（PA），对肾癌侵袭转移的作用及机制。

方法

采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）试剂盒检测PA（0、20、40、80、160 μmol·L

-1

）对细胞存活率的影响，并筛选PA浓度用于后续实验。采用克隆形成实验评估PA（0、20、40、80 μmol·L

-1

）对细胞增殖的作用。细胞黏附实验用来观察PA（0、20、40、80 μmol·L

-1

）对细胞黏附能力的效果。划痕实验和Transwell侵袭实验用来检测PA（0、20、40、80 μmol·L

-1

）对细胞侵袭转移的影响。高内涵成像技术进一步动态观察和验证PA（0、20、40、80 μmol·L

-1

）对细胞运动的抑制作用。PA（0、20、40、80 μmol·L

-1

）对细胞中侵袭转移相关蛋白基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子（MMP/TIMP）和相关通路关键蛋白Smads表达的影响通过蛋白免疫印迹法（Western blot）来检测。

结果

CCK-8结果显示，与空白组比较，PA组细胞存活率显著降低（

0.01），24 h时PA对ACHN细胞的半数抑制浓度（IC

）为70.42 μmol·L

-1

。克隆形成实验显示，与空白组比较，PA组细胞克隆群数目显著减少（

0.01）。细胞黏附实验显示，与空白组比较，PA组细胞的黏附数量显著减少（

0.01）。划痕实验表明，与空白组比较，PA组细胞的划痕愈合率降低（

0.05，

0.01）。Transwell侵袭实验显示，与空白组比较，PA组细胞的穿膜数量减少（

0.01）。高内涵成像技术表明，与空白组比较，PA组细胞累计迁移距离更短（

0.01）。Western blot结果表明，与空白组比较，PA组MMP-2、MMP-9蛋白的表达降低（

0.01），TIMP-1蛋白的表达升高（

0.01）。此外，与空白组比较，PA组Smad2、Smad3蛋白的表达降低（

0.01）。

结论

PA可抑制肾癌细胞的增殖、侵袭转移，其机制可能是通过Smad2/3调控MMP/TIMP的稳态平衡。

Abstract

Objective

To investigate the effect and mechanism of pachymic acid （PA） in Poria on the invasion and metastasis of renal carcinoma cells.

Method

The effect of PA （0， 20， 40， 80， 160 μmol·L

-1

） on cell viability was detected by cell counting kit-8（CCK-8）， and the dose of PA was selected for subsequent experiments. The effect of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L

-1

） on cell proliferation was evaluated by colony formation assay. The effect of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L

-1

） on cell adhesion ability was observed by cell adhesion assay. The effect of PA （0， 20， 40， and 80 μmol·L

-1

） on cell invasion and metastasis was investigated by Wound healing assay and Transwell invasion assay. The inhibitory effect of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L

-1

） on cell motility was further observed and verified by high-content imaging technology. The effects of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L

-1

） on the expression of matrix metalloproteinase （MMP）/tissue inhibitor of metalloproteinasas （TIMP） related to invasion and metastasis and Smads were detected by Western blot.

Result

CCK-8 results showed that compared with the blank group， the PA groups showed decreased cell viability（

0.01）， with the half-maximal inhibitory concentration （IC

） of ACHN cells of 70.42 μmol·L

-1

at 24 h. Colony formation assay showed that the number of cell clonal groups in the PA groups was reduced compared with that in the blank group（

0.01）. Cell adhesion assay showed that compared with the blank group， the PA groups displayed reduced cell adhesion（

0.01）. Wound healing assay showed that the wound healing rate of cells in the PA groups was lower than that in the blank group （

0.05，

0.01）. Transwell invasion assay showed that compared with the blank group， the number of transmembrane cells in PA groups was reduced（

0.01）. High-content imaging showed that the cumulative migration distance of cells in the PA groups was shorter than that in the blank group（

0.01）. The results of Western blot showed that the protein expression of MMP-2 and MMP-9 in the PA groups decreased （

0.01）， and TIMP-1 protein expression increased （

0.01） compared with those in the blank group. In addition， compared with the blank group， the PA groups showed decreased protein expression of Smad2 and Smad3 （

0.01）.

Conclusion

PA can inhibit the invasion and metastasis of renal carcinoma cells presumably through regulating the homeostasis of MMP/TIMP by Smad2/3.

关键词

Keywords

references

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