三种斑马鱼血瘀模型在三七抗血栓及抗心肌缺氧能力评价中的应用

李明利; 高波; 郭胜亚; 罗川; 戴明珠; 高文雅; 边宝林; 王宏洁; 周严严; 张勇; 赵海誉

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220301

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三种斑马鱼血瘀模型在三七抗血栓及抗心肌缺氧能力评价中的应用

药理 | 更新时间：2021-12-31

- 三种斑马鱼血瘀模型在三七抗血栓及抗心肌缺氧能力评价中的应用
- Application of Three Blood Stasis Models in Zebrafish in Evaluation of Anti-thrombosis and Anti-myocardial Hypoxia Activities of Notoginseng Radix et Rhizoma
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第3期页码：98-108
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院中药研究所，北京 100700
  2.安徽华润金蟾药业股份有限公司，安徽淮北 235000
  3.杭州环特生物科技有限公司，杭州 310051
- 作者简介：
  
  李明利，在读硕士，从事中药饮片质量评价研究，E-mail：limingliggs@163.com
  张勇，硕士，从事斑马鱼生物功效及安全性评价技术研究，Tel：0571-83782130，E-mail：zy@zhunter.com； *
  赵海誉，研究员，从事中药活性成分及生物学表征研究，Tel：010-84041249，E-mail：hyzhao@icmm.ac.cn
- 基金信息：
  
  中国中医科学院科技创新工程项目(CI2021A04510);国家“重大新药创制”科技重大专项(2019ZX09201-005-006-002);杭州市钱江特聘专家项目(2020)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220301
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R33
- 收稿日期：2021-08-17，
  
  网络出版日期：2021-11-26，
  
  纸质出版日期：2022-02-05
- 稿件说明：
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李明利,高波,郭胜亚等.三种斑马鱼血瘀模型在三七抗血栓及抗心肌缺氧能力评价中的应用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(03):98-108.

LI Ming-li,GAO Bo,GUO Sheng-ya,et al.Application of Three Blood Stasis Models in Zebrafish in Evaluation of Anti-thrombosis and Anti-myocardial Hypoxia Activities of Notoginseng Radix et Rhizoma[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(03):98-108.
李明利,高波,郭胜亚等.三种斑马鱼血瘀模型在三七抗血栓及抗心肌缺氧能力评价中的应用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(03):98-108. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220301.

LI Ming-li,GAO Bo,GUO Sheng-ya,et al.Application of Three Blood Stasis Models in Zebrafish in Evaluation of Anti-thrombosis and Anti-myocardial Hypoxia Activities of Notoginseng Radix et Rhizoma[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(03):98-108. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220301.

摘要

目的

采用不同诱导剂建立3种斑马鱼血瘀模型，优选最适宜评价三七活血能力的模型。

方法

花生四烯酸（AA），普纳替尼（Ponatinib），异丙肾上腺素（ISO）分别建立斑马鱼血瘀模型，设置正常组、模型组、阳性药组、不同浓度三七水提物冻干粉组，计算心脏红细胞染色强度、心脏凋亡细胞荧光强度，评价三七的抗血栓作用和抗心肌缺氧能力。基于优选的评价三七活血化瘀活性的血瘀模型—AA，ISO诱导的斑马鱼血瘀模型，比对三七水提取物及70%甲醇提取物之间的活性，并采用UHPLC LTQ-Orbitrap MS/MS技术比对其化学成分差异。

结果

AA，Ponatinib诱导后斑马鱼心脏红细胞染色强度显著降低（

0.01），ISO诱导后心脏凋亡细胞荧光强度显著升高（

0.01），三七水提物冻干粉可以拮抗AA模型的血栓形成（

0.01）和ISO模型的心肌凋亡（

0.05），对Ponatinib模型血栓形成无显著改善作用。三七70%甲醇提取物冻干粉可以抑制ISO血瘀模型的心肌凋亡（

0.01），作用强于三七水提物冻干粉，其成分差别主要在于人参皂苷Re等部分皂苷类以及氨基酸类、炔醇等成分。

结论

AA，Ponatinib，ISO均可建立斑马鱼血瘀模型，其中AA和ISO模型可以用于评价三七水提物冻干粉的活血能力。水提和70%甲醇提取三七冻干粉化学成分差异较大，对ISO血瘀模型，70%甲醇提取三七冻干粉抗心肌缺氧能力更强，皂苷、炔醇类成分可能与其活血化瘀功效密切相关。

Abstract

Objective

To establish blood stasis models in zebrafish using three inducers and select the optimal model for evaluating the activity of Notoginseng Radix et Rhizoma in promoting blood circulation.

Method

Arachidonic acid （AA）， ponatinib， and isoprenaline （ISO） were used to induce blood stasis models in zebrafish. A normal group， a model group， a positive drug group， and Notoginseng Radix et Rhizoma water extract freeze-dried powder groups at different concentrations were set up. The staining intensity of cardiac erythrocytes and the fluorescence intensity of cardiac apoptotic cells were calculated， the anti-thrombotic effect and anti-myocardial hypoxia activity of Notoginseng Radix et Rhizoma were evaluated. The activities of water extract and 70% methanol extract of Notoginseng Radix et Rhizoma were compared based on the preferred AA- and ISO-induced blood stasis models in zebrafish and the difference in the chemical composition was analyzed by UHPLC LTQ-Orbitrap MS/MS.

Result

After induction by AA and ponatinib， the staining intensity of cardiac erythrocytes was reduced （

0.01）， and the fluorescence intensity of cardiac apoptotic cells increased after the induction by ISO （

0.01）. The freeze-dried powder of the water extract of Notoginseng Radix et Rhizoma could antagonize the thrombosis in the AA-induced model （

0.01） and the myocardial apoptosis in the ISO-induced model （

0.05）， while no significant improvement in the thrombosis was observed in the ponatinib-induced model. The freeze-dried powder of 70% methanol extract of Notoginseng Radix et Rhizoma

could inhibit myocardial apoptosis in the ISO-induced blood stasis model （

0.01）， and the effect was stronger than that of the freeze-dried powder of

Notoginseng Radix et Rhizoma

water extract. The difference in chemical composition lay in some saponins （such as ginsenoside Re）， amino acids， and acetylenic alcohols.

Conclusion

AA， ponatinib， and ISO all can serve as inducers for the blood stasis model in zebrafish. AA- and ISO-induced models can be used to evaluate the activity of freeze-dried powder of Notoginseng Radix et Rhizoma water extract in promoting blood circulation. The chemical compositions of the freeze-dried powders of Notoginseng Radix et Rhizoma extracted with water and 70% methanol are quite different. For the ISO-induced blood stasis model， the freeze-dried powder of Notoginseng Radix et Rhizoma extracted with 70% methanol has a stronger ability against myocardial hypoxia. Saponins and acetylenic alcohols may be closely related to the effects of promoting blood circulation and resolving blood stasis.

关键词

Keywords

references

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