基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析

邹钊; 李佳珊; 徐颖; 杨一博; 徐盼瑜; 杜寒倩; 朱卫丰; 林娜

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220353

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基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析

药学基础 | 更新时间：2022-10-18

- 基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析
  增强出版
- Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第22期页码：159-166
- 作者机构：
  
  1.江西中医药大学，南昌 330004
  2.中国中医科学院中药研究所，北京 100700
- 作者简介：
  
  邹钊，在读硕士，从事中药药理学研究，E-mail：1374735576@qq.com
  徐颖，博士，研究员，硕士生导师，从事中药药性和中药药理研究，E-mail：yxu@icmm.ac.cn； *
  林娜，博士，研究员，博士生导师，从事中药药理和中药药性研究，Tel：010-64014411-2869，E-mail：linna888@163.com
- 基金信息：
  
  中国中医科学院科技创新工程项目(CI2021A03802);国家自然科学基金项目(81774203;82004248)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220353
  中图分类号： R22;R28;R969.1;O657
- 收稿日期：2021-12-13，
  
  网络出版日期：2022-02-26，
  
  纸质出版日期：2022-11-20
- 稿件说明：
移动端阅览
邹钊,李佳珊,徐颖等.基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):159-166.

ZOU Zhao,LI Jiashan,XU Ying,et al.Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):159-166.
邹钊,李佳珊,徐颖等.基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):159-166. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220353.

ZOU Zhao,LI Jiashan,XU Ying,et al.Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):159-166. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220353.

摘要

目的

采用血清药物化学方法研究青盐方的入血成分，并考察入血成分与雌激素受体（ER）的结合能，确认青盐方在大鼠体内的药效物质基础。

方法

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS）比较青盐方70%乙醇提取物、各单味药70%乙醇提取物、空白血清、青盐方70%乙醇提取物给药后血清的指纹图谱差异，根据质谱的保留时间、相对分子质量，以及一级、二级离子碎片，判定青盐方在大鼠体内的入血成分，流动相选择0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~5 min，2%~20%B；5~10 min，20%~50%B；10~15 min，50%~80%B；15~25 min，80%~95%B；25~26 min，95%~2%B；26~30 min，2%B），流速0.3 mL·min

-1

，进样量5 μL，电喷雾离子源，检测范围

150~2 000，正、负离子扫描模式。采用分子对接技术表征入血成分与ER

、ER

的结合能，进一步确认青盐方药效物质基础。

结果

口服青盐方后，从血清中检测出30种入血成分，其中9种为原型成分，21种为代谢产物。经鉴定9种原型成分分别为水晶兰苷、车叶草苷、麦角甾苷、松果菊苷、

-蜕皮甾酮、尿囊素、去乙酰基车叶草苷酸、甜菜碱、咖啡酸，21种代谢产物包括有机酸、氨基酸、胆碱类等。上述9种原型成分与ER

的结合能分别为-6.7、-8.9、-6.0、-5.7、-5.3、-4.9、-7.3、-3.3、-6.3 kcal·mol

-1

（1 kcal≈4 184 J），与ER

的结合能分别为-6.6、-7.2、-7.7、8.0、-7.4、-5.5、-6.9、-3.6、-6.4 kcal·mol

-1

。

结论

水晶兰苷等9种入血的原型成分是青盐方在体内发挥雌激素样作用的活性成分，可为该方质量标准的制定及后续研发提供实验依据。

Abstract

Objective

To study the constituents migrating to blood of Qingyan formula by serum pharmacochemistry， and investigate the binding energy between these constituents and estrogen receptor （ER）， so as to confirm the pharmacodynamic material basis of Qingyan formula in rats.

Method

Ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole electrostatic field-orbital trap high resolution mass spectrometry （UPLC-Q-Orbitrap-MS） was used to determine the constituents migrating to blood of Qingyan formula in rats by comparing the fingerprint differences of 70% ethanol extract of Qingyan formula， 70% ethanol extract of each single drug in this formula， blank serum and serum after administration of 70% ethanol extract of Qingyan formula， according to the retention time， relative molecular weight and the primary and secondary ion fragments provided by MS. Mobile phase was 0.1% formic acid aqueous solution （A）-acetonitrile（B） for gradient elution （0-5 min， 2%-20%B； 5-10 min； 20%-50%B； 10-15 min， 50%-80%B； 15-25 min， 80%-95%B； 25-26 min， 95%-2%B； 26-30 min， 2%B）， the flow rate was 0.3 mL·min

-1

and the injection volume was 5 μL， electrospray ionization was used with detection range of

150-2 000， positive and negative ion scanning modes. Molecular docking technology was used to characterize the binding energy of constituents migrating to blood with ER

and ER

， and to confirm the material basis of this formula.

Result

After oral administration of Qingyan formula， 30 components were detected in serum， of which 9 were prototype components and 21 were metabolites. Nine prototype components were identified as monotropein， asperuloside， verbascoside，

-ecdysone， allantoin， deacetyl asperuloside acid， echinacoside， betaine and caffeic acid， 21 metabolites mainly included organic acids， amino acids， cholines and so on. The binding energies of the above 9 prototype components with ER

were -6.7， -8.9， -6.0， -5.7， -5.3， -4.9， -7.3， -3.3， -6.3 kcal·mol

-1

（1 kcal≈4 184 J）， and the binding energies of them with ER

were -6.6， -7.2， -7.7， 8.0， -7.4， -5.5， -6.9， -3.6， -6.4 kcal·mol

-1

， respectively.

Conclusion

These nine prototype components into blood are the active ingredients of Qingyan formula that play estrogen-like role in the body， which can provide experimental basis for the formulation of quality standards and subsequent research and development of Qingyan formula.

关键词

Keywords

references

孔令娜，左萍萍 . 植物雌激素研究进展［J］. 生殖医学杂志， 2003 ， 12 （ 1 ）： 46 - 53 .

赵元，郑红霞，徐颖，等 . 中药植物雌激素的研究进展［J］. 中国中药杂志， 2017 ， 42 （ 18 ）： 3474 - 3487 .

ZHAO Y ， ZHENG H X ， XU Y ， et al . Estrogenic effect of the extract of Qingyan formula on reproductive tissues in immature mice ［J］. Evid Based Complement Alternat Med ， 2019 ， 2019 ： 5493714 .

ZHENG H X ， ZHAO Y ， XU Y ， et al . Long-time qingyan formula extract treatment exerts estrogenic activities on reproductive tissues without side effects in ovariectomized rats and via active ER to ERE-independent gene regulation ［J］. Aging ， 2019 ， 11 （ 12 ）： 4032 - 4049 .

ZHAO Y ， XU Y ， ZHENG H X ， et al . Qingyan formula extracts protect against postmenopausal osteoporosis in ovariectomized rat model via active ER-dependent MEK/ERK and PI3K/Akt signal pathways ［J］. J Ethnopharmacol ， 2021 ， 268 ： 113644 .

赵元，郑红霞，徐颖，等 . 青盐方治疗围绝经期焦虑症的网络分析及实验验证［J］. 中国中药杂志， 2020 ， 45 （ 17 ）： 4129 - 4139 .

张敏，吴青青，李晨辉，等 . 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析不同配伍比例雄黄对青黛入血成分的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2020 ， 26 （ 13 ）： 79 - 86 .

张亚锋，舒蕊华，王苑桃，等 . HPLC-MS/MS法测定山药中尿囊素的量［J］. 中草药， 2014 ， 45 （ 24 ）： 3627 - 3629 .

冯梓誉，杨晗，李义凯，等 . 应用UPLC-MS/MS观测6种中药对尿酸盐体外溶解度的影响［J］. 世界科学技术—中医药现代化， 2021 ， 23 （ 5 ）： 1705 - 1711 .

刘佳星，魏洁，武锦春，等 . 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的酸枣仁汤颗粒化学成分分析［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 12 ）： 1 - 12 .

赵晓梅，程宇欣，梁彩霞，等 . 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的吴茱萸化学成分分析［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 6 ）： 113 - 126 .

张金磊，邢丽杰，王远，等 . 超高效液相色谱-串联质谱法快速测定红枣中甜菜碱［J］. 安徽农业科学， 2020 ， 48 （ 17 ）： 213 - 215 .

汤丽昌 . 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定劲酒中8种活性成分含量［J］. 食品安全质量检测学报， 2020 ， 11 （ 18 ）： 6724 - 6728 .

赖丽嫦，陈丰连，王术玲，等 . 基于UPLC-Q/TOF-MS的广金钱草水提物抗肾草酸钙结石大鼠的血清代谢组学研究［J］. 中药新药与临床药理， 2020 ， 31 （ 8 ）： 950 - 959 .

高天元，雷雨恬，唐国琳，等 . 药用鸡矢藤药材化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析［J］. 中国实验方剂学杂志， 2020 ， 26 （ 17 ）： 134 - 141 .

赵祥升，弓宝，周亚奎，等 . UPLC-MS/MS同时测定巴戟天中4个环烯醚萜苷的含量［J］. 药物分析杂志， 2018 ， 38 （ 9 ）： 1490 - 1495 .

ZHANG Z G ， ZHANG Q Y ， YANG H ， et al . Monotropein isolated from the roots of Morinda officinalis increases osteoblastic bone formation and prevents bone loss in ovariectomized mice ［J］. Fitoterapia ， 2016 ， 110 ： 166 - 172 .

ZHOU Q ， YAN H ， LI R ， et al . Quantitative determination of monotropein in rat plasma and tissue by LC-MS/MS and its application to pharmacokinetic and tissue distribution studies ［J］. Rev Bras Farmacogn ， 2018 ， 28 （ 4 ）： 451 - 456 .

倪建成，卢柱华，莫舒云，等 . 巴戟天化学成分的研究［J］. 中成药， 2021 ， 43 （ 5 ）： 1212 - 1216 .

彭朵花，周芳，欧阳文，等 . 巴戟天中水晶兰苷的提取分离及其含量测定［J］. 中南药学， 2008 ， 16 （ 6 ）： 705 - 707 .

李建朋，王彦志，李曼倩，等 . 基于UHPLC-Q-Trap-MS/MS对牛膝8种成分的定量研究［J］. 中药材， 2021 （ 6 ）： 1433 - 1438 .

CHAKRABORTY S ， BASU S . Dual inhibition of BACE1 and A β aggregation by β -ecdysone：Application of a phytoecdysteroid scaffold in Alzheimer's disease therapeutics ［J］. Int J Biol Macromol ， 2017 ， 95 ： 281 - 287 .

王力伟，曹瑞，房永雨，等 . UPLC-QQQ-MS法测定肉苁蓉中有效成分的含量［J］. 中药材， 2017 ， 40 （ 2 ）： 295 - 300 .

曾永长，梁少瑜，吴俊洪，等 . 基于UHPLC-ESI-QqQ-MS/MS技术的中药复方新天泰1号多类别多成分质量控制方法研究［J］. 中草药， 2018 ， 49 （ 16 ）： 3835 - 3841 .

谭乐俊，王萌，任晓亮，等 . 基于UPLC-Q/TOF-MS的中药水蜜丸制剂二至丸多成分稳定性研究［J］. 中草药， 2016 ， 47 （ 13 ）： 2260 - 2268 .

KOBAYASHI H ， OGUCHI H ， TAKIZAWA N ， et al . New phenylethanoid glycosides from Cistanche tubulosa （SCHRENK） HOOK. f. I. ［J］. Chem Pharm Bull ， 1987 ， 35 （ 8 ）： 3309 - 3314 .

李文兰，白晶，臧宝珊，等 . HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分［J］. 质谱学报， 2015 ， 36 （ 3 ）： 223 - 228 .

任晓航，石梦鸽，刘博男，等 . UPLC-QQQ-MS法测定巴戟天炮制前后10种成分的含量［J］. 中药材， 2019 ， 42 （ 3 ）： 588 - 593 .

郭锦晨，王茎，孙宇洁，等 . 基于网络药理学及分子对接探讨桑叶-菊花治疗高血压的作用机制［J］. 天然产物研究与开发， 2021 ， 33 （ 5 ）： 847 - 858 .

王琳琳，李薇，宋新波，等 . 肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的植物雌激素活性研究［J］. 天然产物研究与开发， 2015 ， 27 （ 3 ）： 377 - 380 .

郑晓珂，张贝贝，曾梦楠，等 . 尿囊素雌激素样作用［J］. 药学学报， 2018 ， 53 （ 1 ）： 68 - 73 .

于连云 . 肉苁蓉的药理作用及临床应用［J］. 内蒙古中医药， 2016 ， 35 （ 4 ）： 87 - 88 .

赵丕文，牛建昭，王继峰，等 . 异补骨脂素和蜕皮甾酮对人乳腺癌T47D细胞增殖及ER亚型表达的影响［J］. 北京中医药大学学报， 2007 ， 30 （ 4 ）： 242 - 245 .

AN B H ， JEONG H ， KIM J H ， et al . Estrogen receptor-mediated transcriptional activities of spent coffee grounds and spent coffee grounds compost，and their phenolic acid constituents ［J］. J Agric Food Chem ， 2019 ， 67 （ 31 ）： 8649 - 8659 .

王晓莉，曾静，王珏，等 . 雌激素代谢酶CYP1A1及COMT基因多态性与子宫肌瘤相关性研究［J］. 实用妇产科杂志， 2015 ， 31 （ 2 ）： 120 - 123 .

朱壮彦，糜若然，刘静 . CYP1B1基因多态性与卵巢癌易感性的研究［J］. 现代妇产科进展， 2006 ， 15 （ 3 ）： 184 - 187 .

XU Y ， ZHANG Z J ， GENG F ， et al . Treatment with Qing'E，a kidney-invigorating Chinese herbal formula， antagonizes the estrogen decline in ovariectomized mice ［J］. Rejuvenation Res ， 2010 ， 13 （ 4 ）： 479 - 488 .

XU Y ， MA X P ， DING J ， et al . Treatment with qibaomeiran，a kidney-invigorating Chinese herbal formula， antagonizes estrogen decline in ovariectomized rats ［J］. Rejuvenation Res ， 2014 ， 17 （ 4 ）： 372 - 381 .

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