黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

杨李旺; 杨蓉; 赵焕新; 翟晓艳; 王惠洁; 周儒奎; 季新燕

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220424

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黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

药理 | 更新时间：2022-02-07

- 黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤
- Huanglian Jiedutang Alleviates Liver Injury in Septic Mice by Inducing Autophagy
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第5期页码：71-76
- 作者机构：
  
  山西中医药大学基础医学院，山西省现代中药工程实验室，山西晋中 030619
- 作者简介：
  
  杨李旺，博士，讲师，从事中西医结合防治脓毒症机制研究，E-mail：yanglw0107@126.com
  季新燕，博士，副教授，从事中药制剂及中药药理，E-mail：jixinyan77@126.com
- 基金信息：
  
  山西省自然科学基金项目(201901D111340);山西中医药大学科技创新能力培育计划项目(2019PY-123)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220424
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2021-09-17，
  
  网络出版日期：2021-12-13，
  
  纸质出版日期：2022-03-05
- 稿件说明：
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杨李旺,杨蓉,赵焕新等.黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(05):71-76.

YANG Li-wang,YANG Rong,ZHAO Huan-xin,et al.Huanglian Jiedutang Alleviates Liver Injury in Septic Mice by Inducing Autophagy[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(05):71-76.
杨李旺,杨蓉,赵焕新等.黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(05):71-76. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220424.

YANG Li-wang,YANG Rong,ZHAO Huan-xin,et al.Huanglian Jiedutang Alleviates Liver Injury in Septic Mice by Inducing Autophagy[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(05):71-76. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220424.

摘要

目的

探讨黄连解毒汤对盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导的脓毒症小鼠肝损伤保护作用中自噬相关蛋白的表达。

方法

将60只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄连解毒汤低、高剂量组（1.44，2.88 g∙kg

-1

）共4组（

=15）。连续给药3 d，末次给药1 h，盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。观察小鼠24 h生存率；另取5只，术后12 h处死小鼠，收集血清和肝组织。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中炎症因子白细胞介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子-

（TNF-

），白细胞介素-1

（IL-1

）的水平；生化法检测血中丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸氨基转移酶（AST）的水平；苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织的病理变化；TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）染色观察肝细胞凋亡指数（AI）；蛋白免疫印迹法检测肝组织中高迁移率族蛋白1（HMGB1），自噬效应蛋白1（Beclin1），自噬标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ（LC3-Ⅱ/Ⅰ）的表达。

结果

与假手术组比较，模型组小鼠12，24 h生存率明显降低，血清中炎症因子IL-6，TNF-

，IL-1

水平明显升高（

0.05），AST，ALT活性明显增加（

0.05），肝细胞肿胀、炎症细胞浸润，肝细胞凋亡，HMGB1表达明显增加（

0.05），自噬相关蛋白Beclin1的表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ增加（

0.05）；与模型组比较，各给药组脓毒症小鼠12，24 h生存率明显提高，炎症因子IL-6，TNF-

水平及AST，ALT活性明显降低（

0.05），肝组织损伤明显减轻，肝细胞凋亡减少（

0.05），HMGB1的表达明显减少（

0.05），Beclin1的表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ明显增加（

0.05）。

结论

黄连解毒汤可能通过诱导自噬、抑制凋亡等机制，减轻CLP所致脓毒症小鼠肝损伤。

Abstract

Objective

To explore effect of Huanglian Jiedutang （HLJDT） on autophagy-related protein expression in septic mice with liver injury induced by cecal ligation and puncture （CLP）.

Method

Sixty eight-week-old C57BL/6 mice were randomly divided into four groups， namely， the sham operation group， model group， and low- （1.44 g∙kg

-1

） and high-dose （2.88 g∙kg

-1

） HLJDT groups， with 15 in each group. The septic model was established by CLP after the last administration of HLJDT for three successive days. The survival rate of mice with 24 h was observed. The mice were sacrificed 12 h after operation for collecting the serum and liver tissue. The levels of serum interleukin-6 （IL-6）， tumor necrosis factor-

（TNF-

）， and interleukin-1

（IL-1

） were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， and the levels of alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST） in serum by biochemical method. The pathological changes in liver tissue were observed by hematoxylin-eosin （HE） staining， and the apoptosis index （AI） of hepatocytes by TdT-mediated dUTP-biotin nick end-labeling （TUNEL）. The expression levels of protein high-mobility group box 1 protein （HMGB1）， Beclin1， and microtubule-associated protein 1 light chain 3 （LC3）-Ⅱ/Ⅰ in the liver tissue were assayed by Western blot.

Result

Compared with the sham operation group， the model group showed reduced survival rate at 12 and 24 h， elevated IL-6， TNF-

， and IL-1

levels， enhanced AST and ALT activities （

0.05）， hepatocyte swelling， inflammatory cell infiltration， and apoptosis， and up-regulated HMGB1 （

0.05）， Beclin1， and LC3-Ⅱ/Ⅰ （

0.05）. Compared with the model group， each medication group exhibited increased survival rate at 12 and 24 h， lowered IL-6 and TNF-

levels， weakened AST and ALT activities （

0.05）， alleviated liver injury and apoptosis （

0.05）， down-regulated HMGB1 expression （

0.05）， and up-regulated Beclin1 and LC3-Ⅱ/Ⅰ （

0.05）.

Conclusion

HLJDT alleviates the liver injury of septic mice possibly by inducing autophagy and inhibiting apoptosis.

关键词

Keywords

references

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