积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞表达的影响

栾慧杰; 何莲花; 何娟; 单宏颖; 虎义平; 王庆文

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220437

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞表达的影响

药理 | 更新时间：2022-01-13

- 积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞表达的影响
- Effect of Asiaticoside on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-Induced Arthritis
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第4期页码：76-83
- 作者机构：
  
  1.北京大学深圳医院，广东深圳 518036
  2.深圳市炎症与免疫性疾病重点实验室，广东深圳 518036
- 作者简介：
  
  栾慧杰，在读硕士，从事风湿免疫疾病临床与基础研究，E-mail：649695479@qq.com
  王庆文，教授，主任医师，博士生导师，从事风湿免疫病临床工作，E-mail：wqw_sw@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81974253;81901641);深圳市科创委面上项目(JCYJ20210324110011031);广东省自然科学基金项目(2019A1515011112);广东省中医药局科研项目(20211333)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220437
  中图分类号： R2-0;R285;R33;R593.22
- 收稿日期：2021-10-18，
  
  网络出版日期：2021-12-16，
  
  纸质出版日期：2022-02-20
- 稿件说明：
移动端阅览
栾慧杰,何莲花,何娟等.积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):76-83.

LUAN Hui-jie,HE Lian-hua,HE Juan,et al.Effect of Asiaticoside on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-Induced Arthritis[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):76-83.
栾慧杰,何莲花,何娟等.积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):76-83. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220437.

LUAN Hui-jie,HE Lian-hua,HE Juan,et al.Effect of Asiaticoside on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-Induced Arthritis[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):76-83. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220437.

摘要

目的

观察积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎（CIA）中辅助性T细胞17（Th17）和调节性T细胞（Treg）表达的影响。

方法

将SPF级DBA/1雄性小鼠按体质量随机分为6组：正常组，CIA组，甲氨蝶呤组（MTX组，0.5 mg·kg

-1

），积雪草苷低、中、高剂量（5，15，45 mg·kg

-1

）组。除正常组外，其余组小鼠均构建CIA模型，分别于第1天给予牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂进行一次免疫，第21天给予牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂进行二次免疫，并在二次免疫当天开始给药，MTX腹腔注射方式给药，积雪草苷灌胃方式给药，每天1次，共给药28 d。第49天小鼠取材后，小鼠关节组织进行苏木素-伊红（HE）染色观察病理改变；免疫组化检测Th17细胞标志物IL-17和Treg细胞标志物叉头样转录因子3（FoxP3）的表达情况；免疫荧光双染法检测小鼠关节组织CD4

T细胞中IL-17和FoxP3的表达情况；流式细胞术检测小鼠淋巴结中Th17和Treg细胞比例。

结果

与正常组比较，CIA组小鼠关节结构严重紊乱，关节软骨及骨破坏明显，骨侵蚀严重（

0.01）；小鼠关节组织CD4及IL-17阳性染色明显增多，且积分吸光度

值显著升高（

0.01），FoxP3阳性染色减少且

值显著降低（

0.01），Th17/Treg值显著升高（

0.01）；小鼠淋巴结中Th17细胞表达比例明显增高（

0.01），Treg细胞的表达比例显著减少（

0.01）；与CIA组比较，MTX组和积雪草苷各剂量组小鼠关节结构均相对正常，骨侵蚀、骨破坏较轻，关节面相对完整光滑；MTX组和积雪草苷中、高剂量组小鼠关节组织中CD4阳性染色减少且

值明显降低（

0.05）；MTX组和积雪草苷各剂量组IL-17阳性染色明显减少且

值明显降低（

0.05，

0.01）；积雪草苷中、高剂量组FoxP3阳性表达明显增加且

值明显升高（

0.05，

0.01）；MTX组和积雪草苷中、高剂量组Th17/Treg值明显降低（

0.05，

0.01）；小鼠淋巴结组织中，积雪草苷各剂量组Th17细胞表达比例明显降低（

0.05，

0.01），Treg细胞的表达比例明显增加（

0.05，

0.01）。

结论

积雪草苷可抑制CIA小鼠Th17细胞的表达，促进Treg细胞的表达，从而调节Th17/Treg平衡。

Abstract

Objective

To observe the effect of asiaticoside （AC） on the expression of T helper 17 （Th17） cells and regulatory T （Treg） cells in DBA/1 mice with collagen-induced arthritis （CIA）.

Method

Male SPF DBA/1 mice were randomized into six groups according to body weight： control group， CIA group， methotrexate group （MTX group，

， 0.5 mg·kg

-1

）， and AC low-， medium-， and high-dose groups （

， 5， 15， 45 mg·kg

-1

， respectively）. Modeling was performed in rats other than the control group. To be specific， they were immunized with bovine type Ⅱ collagen and complete Freund's adjuvant on the first day and with bovine type Ⅱ collagen and incomplete Freund's adjuvant on the 21

day. Administration began on the day of the second immunization， once a day for 28 days. On the 49

day， related tissues were collected. Then， hematoxylin-eosin （HE） staining was performed to observe the pathological changes of the joints. Immunohistochemical method was used to detect the expression of interleukin-17 （IL-17） and forkhead box protein-3 （FoxP3）， the markers of Th17 and Treg cells， respectively， immunofluorescence double staining the expression of IL-17 and FoxP3 in CD4

T cells of mouse joint tissue， and flow cytometry the proportions of Th17 and Treg cells in mouse lymph nodes.

Result

Compared with the control group， CIA group demonstrated joint disorder， damage of articular cartilage and bone， severe bone erosion （

0.01）， increase in stained CD4 and IL-17 and the integral absorbance （

）（

0.01）， decrease in stained FoxP3 and the

（

0.01）， rise of Th17/Treg ratio （

0.01）， elevation of Th17 expression in mouse lymph nodes （

0.01）， and reduction in Treg expression （

0.01）. Compared with CIA group， MTX group and three AC groups showed normal joints， alleviated bone erosion and damage， intact and smooth joint surface， and decrease in stained IL-17 and

（

0.05，

0.01）， and MTX group and AC medium-dose and high-dose groups registered decrease in stained CD4 and

（

0.01） and reduction in Th17/Treg ratio （

0.05，

0.01）. Moreover， AC medium-dose and high-dose groups showed rise in stained FoxP3 and

（

0.05，

0.01）. In the lymph nodes of mice， decrease in expression of Th17 cells （

0.05，

0.01） and the increase in expression of Treg cells （

0.05，

0.01） were observed in all the three AC group.

Conclusion

AC can regulate Th17/Treg balance by inhibiting the expression of Th17 cells and promoting the expression of Treg cells in CIA mice.

关键词

Keywords

references

SMOLEN J S ， ALETAHA D ， BARTON A ， et al . Rheumatoid arthritis ［J］. Nat Rev Dis Primers ， 2018 ， 4 ： 18001 .

VAN DER WOUDE D ， VAN DER HELM-VAN MIL A . Update on the epidemiology，risk factors，and disease outcomes of rheumatoid arthritis ［J］. Best Pract Res Clin Rheumatol ， 2018 ， 32 （ 2 ）： 174 - 187 .

中华医学会风湿病学分会 . 2018中国类风湿关节炎诊疗指南［J］. 中华内科杂志， 2018 ， 57 （ 4 ）： 242 - 251 .

LI Z G . A new look at rheumatology in China-opportunities and challenges ［J］. Nat Rev Rheumatol ， 2015 ， 11 （ 5 ）： 313 - 317 .

GIZINSKI A M ， FOX D A . T cell subsets and their role in the pathogenesis of rheumatic disease ［J］. Curr Opin Rheumatol ， 2014 ， 26 （ 2 ）： 204 - 210 .

TESMER L A ， LUNDY S K ， SARKAR S ， et al . Th17 cells in human disease ［J］. Immunol Rev ， 2008 ， 223 ： 87 - 113 .

WU S ， ZHOU Y ， LIU S ， et al . Regulatory effect of nicotine on the differentiation of Th1，Th2 and Th17 lymphocyte subsets in patients with rheumatoid arthritis ［J］. Eur J Pharmacol ， 2018 ， 831 ： 38 - 45 .

BOISSIER M C ， ASSIER E ， FALGARONE G ， et al . Shifting the imbalance from Th1/Th2 to Th17/Treg：the changing rheumatoid arthritis paradigm ［J］. Joint Bone Spine ， 2008 ， 75 （ 4 ）： 373 - 375 .

LINA C ， CONGHUA W ， NAN L ， et al . Combined treatment of etanercept and MTX reverses Th1/Th2，Th17/Treg imbalance in patients with rheumatoid arthritis ［J］. J Clin Immunol ， 2011 ， 31 （ 4 ）： 596 - 605 .

牛倩，黄卓春，蔡蓓，等 . 类风湿性关节炎患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究［J］. 细胞与分子免疫学杂志， 2010 ， 26 （ 3 ）： 267 - 269，272 .

LI N ， WANG J C ， LIANG T H ， et al . Pathologic finding of increased expression of interleukin-17 in the synovial tissue of rheumatoid arthritis patients ［J］. Int J Clin Exp Pathol ， 2013 ， 6 （ 7 ）： 1375 - 1379 .

LAVOCAT F ， OSTA B ， MIOSSEC P . Increased sensitivity of rheumatoid synoviocytes to Schnurri-3 expression in TNF- α and IL-17A induced osteoblastic differentiation ［J］. Bone ， 2016 ， 87 ： 89 - 96 .

项佳媚，肖伟，许利嘉，等 . 积雪草的研究进展［J］. 中国现代中药， 2016 ， 18 （ 2 ）： 233 - 238，258 .

YANG C L ， OR T C ， HO M H ， et al . Scientific basis of botanical medicine as alternative remedies for rheumatoid arthritis ［J］. Clin Rev Allergy Immunol ， 2013 ， 44 （ 3 ）： 284 - 300 .

SHARMA S ， GUPTA R ， THAKUR S C . Attenuation of collagen induced arthritis by Centella asiatica methanol fraction via modulation of cytokines and oxidative stress ［J］. Biomed Environ Sci ， 2014 ， 27 （ 12 ）： 926 - 938 .

丁元，张翥，王锁刚 . 积雪草苷的研究进展［J］. 时珍国医国药， 2016 ， 27 （ 3 ）： 697 - 699 .

李洪忠，万敬员，张力，等 . 积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用［J］. 药学学报， 2007 ， 42 （ 7 ）： 698 - 703 .

何莲花，栾慧杰，单宏颖，等 . 防己黄芪汤对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎及血管新生的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 17 ）： 16 - 23 .

WANG X ， CAI X ， WANG W ， et al . Effect of asiaticoside on endothelial cells in hypoxia‑induced pulmonary hypertension ［J］. Mol Med Rep ， 2018 ， 17 （ 2 ）： 2893 - 2900 .

ZHANG Z ， LI X ， LI D ， et al . Asiaticoside ameliorates β -amyloid-induced learning and memory deficits in rats by inhibiting mitochondrial apoptosis and reducing inflammatory factors ［J］. Exp Ther Med ， 2017 ， 13 （ 2 ）： 413 - 420 .

王靖霞，刘春芳，何莲花，等 . 风湿祛痛胶囊对大鼠胶原诱导性关节炎的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2019 ， 25 （ 2 ）： 89 - 95 .

卢月，曹雅晶，钱瑞琴 . IL-17在类风湿性关节炎发病机制中的作用［J］. 中国免疫学杂志， 2011 ， 27 （ 9 ）： 855 - 859 .

ZAISS M M ， AXMANN R ， ZWERINA J ， et al . Treg cells suppress osteoclast formation：a new link between the immune system and bone ［J］. Arthritis Rheum ， 2007 ， 56 （ 12 ）： 4104 - 4112 .

SCHINNERLING K ， AGUILLÓN J C ， CATALÁN D ， et al . The role of interleukin-6 signalling and its therapeutic blockage in skewing the T cell balance in rheumatoid arthritis ［J］. Clin Exp Immunol ， 2017 ， 189 （ 1 ）： 12 - 20 .

BETTELLI E ， CARRIER Y ， GAO W ， et al . Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells ［J］. Nature ， 2006 ， 441 （ 7090 ）： 235 - 238 .

ZHOU G ， SUN X ， QIN Q ， et al . Loss of Smad7 promotes inflammation in rheumatoid arthritis ［J］. Front Immunol ， 2018 ， 9 ： 2537 .

潘姝，利天增，李叶扬，等 . 积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与Smad7蛋白的影响［J］. 第三军医大学学报， 2005 ， 27 （ 1 ）： 49 - 52 .

马继伟，王宏天，刘浩飞，等 . 积雪草对转染TGF- β 1 基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad2/3、Smad7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响［J］. 中国应用生理学杂志， 2018 ， 34 （ 2 ）： 122 - 125，149 .

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

紫草素通过MAPK1/MAPK通路对小鼠胶原诱导型关节炎中滑膜炎症的影响

二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响

甘草附子汤调控NF-κB信号通路抑制胶原诱导型关节炎小鼠骨质破坏的作用

基于VEGF通路探讨断藤益母汤抑制胶原诱导型关节炎小鼠血管翳形成的作用

防己黄芪汤对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎及血管新生的影响