芦竹碱对2，4-二硝基氯苯诱导的特应性皮炎小鼠模型的机制

蒋淼; 王家葵; 吴纯洁

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220439

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芦竹碱对2，4-二硝基氯苯诱导的特应性皮炎小鼠模型的机制

药理 | 更新时间：2022-01-13

- 芦竹碱对2，4-二硝基氯苯诱导的特应性皮炎小鼠模型的机制
- Ameliorative Effect of Gramine on 2，4-Dinitrochlorobenzene-Induced Atopic Dermatitis in Mice
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第4期页码：19-25
- 作者机构：
  
  成都中医药大学药学院，中药材标准化教育部重点实验室，四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室，省部共建国家重点实验室培育基地，成都 611137
- 作者简介：
  
  蒋淼，在读博士，讲师，从事中药基础理论及应用研究，E-mail：jiangmiaocc@163.com
  王家葵，博士，教授，从事本草文献考证及药理学方面的研究，E-mail：wjkms@163.com； *
  吴纯洁，教授，博士生导师，从事中药炮制与制剂方面的研究，E-mail：wucjcdtcm@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金青年基金项目(81903812)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220439
  中图分类号： R2-0;R285;R33;R246.7
- 收稿日期：2021-08-12，
  
  网络出版日期：2021-12-16，
  
  纸质出版日期：2022-02-20
- 稿件说明：
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蒋淼,王家葵,吴纯洁.芦竹碱对2，4-二硝基氯苯诱导的特应性皮炎小鼠模型的机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):19-25.

JIANG Miao,WANG Jia-kui,WU Chun-jie.Ameliorative Effect of Gramine on 2，4-Dinitrochlorobenzene-Induced Atopic Dermatitis in Mice[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):19-25.
蒋淼,王家葵,吴纯洁.芦竹碱对2，4-二硝基氯苯诱导的特应性皮炎小鼠模型的机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):19-25. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220439.

JIANG Miao,WANG Jia-kui,WU Chun-jie.Ameliorative Effect of Gramine on 2，4-Dinitrochlorobenzene-Induced Atopic Dermatitis in Mice[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):19-25. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220439.

摘要

目的

探讨芦竹碱对2，4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的特应性皮炎（AD）小鼠模型的药效及其潜在作用机制。

方法

分别设立正常组，模型组，地塞米松组（0.05 g·kg

-1

），芦竹碱高、低剂量（0.12，0.06 g·kg

-1

）组，除正常组外，其余各组均用DNCB刺激。在DNCB刺激后的13 d各组给予相应药物，治疗后观察皮损变化，测量各组皮肤厚度、水分含量，皮肤经皮水分丢失（TWEL）；苏木素-伊红（HE）染色观察皮损组织病理形态学改变，流式细胞术分析药物对脾脏CD4

/CD8

比值的影响，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中免疫球蛋白E（IgE），白细胞介素（IL）-4，IL-6水平的变化；微板法检测血清中肝肾功能相关指标丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸氨基转移酶（AST），血尿素氮（BUN），血清肌酐（CRE）的变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测皮损中炎症因子

-干扰素（IFN-

），IL-13，IL-17，IL-1

，IL-6和肿瘤坏死因子-

（TNF-

）的mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测皮损中核转录因子-

B（NF-

B）和NF-

B抑制蛋白

（I

）的表达。

结果

与正常组比较，模型组皮损出现水肿、红斑、结痂伴有搔抓，皮损组织可见淋巴细胞、中性粒细胞浸润，皮损厚度增加，皮肤水分含量降低，经皮水分丢失显著升高（

0.01），脾脏指数和脾脏CD4

/CD8

T淋巴细胞的比值明显升高（

0.05），皮损组织中IFN-

，IL-13，IL-17，IL-1

，IL-6和TNF-

的mRNA表达明显升高（

0.05），血清中IgE，IL-4，IL-6含量明显升高（

0.05），皮损组织中I

和NF-

B蛋白表达明显升高（

0.05）；与模型组比较，地塞米松组和芦竹碱各剂量组皮损红斑、鳞屑及痂均有不同程度的减轻，炎症细胞浸润明显减少，抑制皮肤增厚，升高皮肤水分含量，降低经皮水分丢失，降低脾脏指数和脾脏CD4

/CD8

T淋巴细胞的比值，降低皮损中炎症因子的mRNA表达，降低血清中IgE及炎症因子含量，降低皮损中I

和NF-

B蛋白表达，尤其以地塞米松组和芦竹碱高剂量组最为明显（

0.05，

0.01）。

结论

芦竹碱能够通过I

α/

NF-

B信号通路抑制相关炎症因子的表达以及调节AD小鼠免疫功能发挥治疗作用，是治疗AD的潜在药物。

Abstract

Objective

To explore the pharmacodynamic effect of gramine on 2，4-dinitrochlorobenzene （DNCB）-induced atopic dermatitis （AD） in mice and its potential mechanism.

Method

The mice were divided into the normal control group， model group， dexamethasone （0.05 g·kg

-1

） group， and high- and low-dose （0.12，0.06 g·kg

-1

） gramine groups. Mice in all groups except for the normal control group were stimulated with DNCB， followed by medication 13 d later. The changes in skin lesions were then observed， and the skin thickness， moisture content， and transepidermal water loss （TWEL） in each group were measured. The pathological changes in skin lesions were observed by hematoxylin-eosin （HE） staining， and the effects of drugs on CD4

/CD8

T-cell ratio in the spleen were detected by flow cytometry. The levels of immunoglobulin E （IgE）， interleukin （IL）-4， and IL-6 in serum were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， and the changes in serum alanine aminotransferase （ALT）， aspartate aminotransferase （AST）， blood urea nitrogen （BUN）， and creatinine （CRE） by microplate method. The mRNA expression levels of inflammatory cytokines

γ-

interferon（IFN-

）， IL-13， IL-17， IL-1

， IL-6， and tumor necrosis factor-

（TNF-

） in skin lesions were assayed by real-time polymerase chain reaction （Real-time PCR）， and the protein expression levels of nuclear transcription factor -

B (NF-

B) and NF-

B inhibitory protein

) in skin lesions by Western blot.

Result

Compared with the normal control group， the model group showed skin edema， erythema， scab， scratch， and lymphocyte and neutrophil infiltration， decreased skin moisture content， as well as increased skin thickness， TWEL （

0.01）， spleen index， CD4

/CD8

T-cell ratio in the spleen （

0.05）， mRNA expression of IFN-

， IL-13， IL-17， IL-1

， IL-6， and TNF-

in the skin lesions （

0.05）， serum contents of IgE， IL-4， and IL-6 （

0.05）， and protein expression of I

and NF-

B in skin lesions （

0.05）. Compared with the model group， dexamethasone and gramine at different doses alleviated skin erythema， scale， scab， and inflammatory cell infiltration， elevated skin moisture content， inhibited skin thickening and TWEL， and decreased spleen index， CD4

/CD8

T-cell ratio in the spleen， mRNA expression of inflammatory factors in the skin lesions， serum contents of IgE and inflammatory factors， and protein expression of I

and NF-

B in skin lesions， especially in the dexamethasone group and the high- dose gramine group（

0.05，

0.01）.

Conclusion

Gramine can inhibit the expression of related inflammatory factors and regulate the immune function of AD mice via the I

α/

NF-

B pathway， enabling it become a potential drug for treating AD.

关键词

Keywords

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