二四汤对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠类风湿关节炎的干预机制

马天越; 方宜梅; 郭甘霖; 杨家熙; 杨斌; 杨怡坤; 寇秋爱

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220538

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二四汤对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠类风湿关节炎的干预机制

药理 | 更新时间：2022-02-07

- 二四汤对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠类风湿关节炎的干预机制
- Mechanisms of Ersi Decoction on Rheumatoid Arthritis Rats Induced by Bovine Type Ⅱ Collagen-solution
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第5期页码：38-45
- 作者机构：
  
  1.北京中医药大学研究生院,北京 100029
  2.北京中医药大学东方医院,北京 100078
  3.中国中医科学院西苑医院,北京 100091
- 作者简介：
  
  马天越，在读硕士，从事中医药防治风湿免疫疾病研究，E-mail：707739313@qq.com
  寇秋爱，硕士，主任医师，从事风湿病的临床与基础研究工作，E-mail：kouqiuai@163.com
- 基金信息：
  
  国家重点研发计划项目(2018YFC1706805);中国中医科学院优势病种医院制剂新药研发专项(ZZ15-XY-PT-07)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220538
  中图分类号： R2-0;R285;R33;R684.3
- 收稿日期：2021-10-22，
  
  网络出版日期：2022-01-05，
  
  纸质出版日期：2022-03-05
- 稿件说明：
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马天越,方宜梅,郭甘霖等.二四汤对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠类风湿关节炎的干预机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(05):38-45.

MA Tian-yue,FANG Yi-mei,GUO Gan-lin,et al.Mechanisms of Ersi Decoction on Rheumatoid Arthritis Rats Induced by Bovine Type Ⅱ Collagen-solution[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(05):38-45.
马天越,方宜梅,郭甘霖等.二四汤对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠类风湿关节炎的干预机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(05):38-45. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220538.

MA Tian-yue,FANG Yi-mei,GUO Gan-lin,et al.Mechanisms of Ersi Decoction on Rheumatoid Arthritis Rats Induced by Bovine Type Ⅱ Collagen-solution[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(05):38-45. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220538.

摘要

目的

采用含牛Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂乳化液免疫诱导方法建立大鼠类风湿关节炎（RA）模型，观察二四汤的干预作用，并从抑制炎症反应及关节滑膜血管新生的病理方面探讨其作用机制。

方法

采用含牛Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂乳化液免疫诱导方法建立大鼠RA模型。雄性SD大鼠随机分为空白组，RA模型组，甲氨蝶呤（1.0 mg·kg

-1

）组及二四汤高、中、低剂量（30，15，7.0 g·kg

-1

）组，每组8只。除空白组外，各组大鼠在强化免疫诱导RA后开始每天灌胃1次，共28 d。模型组、空白组均给予同体积生理盐水干预。给药结束后，通过关节肿胀体积变化率和指数分析各组大鼠关节肿胀程度。采用小动物超声影像系统检测各组大鼠右侧下肢膝关节滑膜增生程度评分与增生面积；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-

和白细胞介素（IL）-1

水平；苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠关节滑膜病理改变；免疫组化法检测大鼠关节滑膜组织CD31与血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）表达变化。

结果

与空白组比较，模型组大鼠关节肿胀体积的变化率和指数显著增加，血清TNF-

和IL-1

水平显著升高（

0.01），超声显示右侧下肢关节滑膜区域面积及滑膜增生评分显著增加（

0.01），大鼠关节滑膜组织也出现显著病理性改变，而CD31与VEGFR2表达显著升高（

0.01）；与模型组比较，二四汤中、高剂量组大鼠关节滑膜组织病理变化明显改善，关节肿胀体积的变化率和指数明显降低（

0.05），关节滑膜组织CD31与VEGFR2表达也出现一定程度下降（

0.05，

0.01），二四汤高剂量组大鼠血清TNF-

和IL-1

水平明显降低（

0.05），右侧下肢膝关节滑膜增生程度评分与增生面积明显下降（

0.05），二四汤中剂量组大鼠仅表现为血清TNF-

水平及关节滑膜增生面积明显下降（

0.05）。

结论

二四汤能够通过抑制牛Ⅱ型胶原诱导RA大鼠关节血管新生而减少RA滑膜炎症与增生，达到减轻RA关节损伤的作用，这为其临床应用提供重要参考。

Abstract

Objective

To observe that effect of Ersi decoction on rats with rheumatoid arthritis （RA） induced by using the complete Freund's adjuvant emulsion containing bovine type Ⅱ collagenand and elucidate underlying menchanisms involving to inhibit inflammation and joint synovial angiogenesis.

Method

The rat model of RA was established by immune induction with complete Freund's adjuvant emulsion containing bovine type Ⅱ collagen. All male SD rats were randomly divided into blank group， RA model group， methotrexate group（1.0 mg·kg

-1

）， and low-， medium- and high-dose group（30，15，7.0 g·kg

-1

·d

-1

）of Ersi decoction， with 8 rats in each group. Except the blank group， rats in the methotrexate group and Ersi decoction groups were given corresponding doses of methotrexate and Ersi decoction after establishment of RA induced by strengthen immunity，respectively，and those in the model group and blank group received normal saline of equivalent volume，once a day for 28 days. After the administration， the degree of joint swelling of rats in each group was analyzed by joint swelling volume and index. The small animal ultrasound imaging system was used to detect the score and area of synovial hyperplasia of knee joint in right lower limb of rats and hematoxylin-eosin（HE）staining to observe the histomorphological changes in joint synovium of rats. The levels of tumor necrosis factor-

（TNF-

） and interleukin-1

（IL-1

） were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Immunohistochemistry was employed to analyze the expression of CD31 and vascular endothelial growth factor receptor 2（VEGFR2） in in joint synovium.

Result

Compared with the blank group， the model group demonstrated significant increase in joint swelling volume and index， inflammatory cytokines including TNF-

and IL-1

in serum， the score and area of synovial hyperplasia of knee joint in right lower limb， obvious pathological changes in the synovium and the expression of CD31 and VEGFR2 in joint synovium. Medium and high-dose Ersi decoction significantly alleviated the pathological changes of synovium tissue， attenuated joint swelling volume and index and decreased the expression of CD31 and VEGFR2 in joint synovium as compared with the model group. Moreover， high-dose Ersi decoction showed significantly lower levels of TNF-

and IL-1

in serum， and the score and area of synovial hyperplasia of knee joint in right lower limb. But medium-dose Ersi decoction only showed lower levels of TNF-

and area of synovial hyperplasia of knee joint.

Conclusion

Ersi decoction could reduce synovial inflammation and hyperplasia through inhibiting synovial angiogenesis in rats with RA induced by bovine type Ⅱ collagen for achieving the effect of reducing RA joint damage， which provides an important reference for anti-RA of Ersi decoction in clinical application.

关键词

Keywords

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