葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤

林川; 王菲; 王鸿卿; 王新宏; 安叡

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220602

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葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤

经典名方 | 更新时间：2022-06-09

- 葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤
- Gegen Qinliantang and Its Combinations Inhibit Oxidative Stress Injury in Ulcerative Colitis Rats by Regulating Nrf2/NQO1 Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第13期页码：19-27
- 作者机构：
  
  上海中医药大学中药学院，上海 201203
- 作者简介：
  
  林川，在读硕士，从事药物分析与体内过程研究，E-mail：3325892608@qq.com
  安叡，博士，教授，从事药物分析与体内过程研究，Tel：021-51322183，E-mail：anruimw@126.com
- 基金信息：
  
  上海市“科技创新行动计划”自然科学基金项目(19ZR1451900)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220602
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R284;R33
- 收稿日期：2021-10-31，
  
  网络出版日期：2022-01-11，
  
  纸质出版日期：2022-07-05
- 稿件说明：
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林川,王菲,王鸿卿等.葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):19-27.

LIN Chuan,WANG Fei,WANG Hongqing,et al.Gegen Qinliantang and Its Combinations Inhibit Oxidative Stress Injury in Ulcerative Colitis Rats by Regulating Nrf2/NQO1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):19-27.
林川,王菲,王鸿卿等.葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):19-27. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220602.

LIN Chuan,WANG Fei,WANG Hongqing,et al.Gegen Qinliantang and Its Combinations Inhibit Oxidative Stress Injury in Ulcerative Colitis Rats by Regulating Nrf2/NQO1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):19-27. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220602.

摘要

目的

探讨葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎（UC）大鼠的可能机制，同时讨论缺少药味对葛根芩连汤疗效的影响。

方法

采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠盐水溶液诱导UC大鼠模型，雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组（柳氮磺吡啶肠溶片，350 mg·kg

-1

）、葛根芩连汤全方组（17 g·kg

-1

）、全方去甘草组（17 g·kg

-1

）、全方去葛根组（17 g·kg

-1

）、葛根甘草组（17 g·kg

-1

）和黄芩黄连组（17 g·kg

-1

）。用1，1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）、2，2-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）和荧光漂白后恢复技术（FRAP）法评估葛根芩连汤及其不同配伍组体外抗氧化活性；通过比较大鼠体质量变化和记录结肠长度、观察结肠剖面和苏木素-伊红（HE）染色病理组织切片评估给药治疗后各组大鼠结肠组织损伤程度；比色法测定大鼠血清中髓过氧化物酶（MPO）、脂质过氧化物（LPO）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测结肠组织中核因子E

相关因子2（Nrf2）、醌氧化还原酶1（NQO1）和血红素氧合酶-1（HO-1） mRNA和蛋白表达的变化。

结果

与正常组比较，模型组大鼠结肠黏膜组织坏死，炎症浸润，血清中过氧化物MPO、LPO和MDA含量显著上升（

0.01），抗氧化酶T-SOD、CAT和GSH活性显著下降（

0.01），Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达均呈下降趋势，Nrf2蛋白表达显著下降（

0.01），NQO1和HO-1蛋白表达呈下降趋势；与模型组比较，葛根芩连汤及配伍组能改善UC大鼠结肠组织病理损伤和形态结构，显著降低大鼠血清中过氧化物MPO、LPO和MDA水平（

0.05），提高无葛根组抗氧化酶T-SOD，无甘草组、黄芩黄连组CAT和GSH（

0.01）活性，增加结肠组织中Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA和蛋白的相对表达，全方组差异明显（

0.05）。

结论

葛根芩连汤对UC大鼠病理损伤具有恢复作用，其机制可能与激活Nrf2信号通路、抑制氧化应激反应有关。葛根芩连汤组方中缺少君药葛根或仅有臣药黄芩和黄连对其治疗UC有较大影响。研究结果可为中药复方临床合理应用及复方配伍机制研究做出有益探索。

Abstract

Objective

To explore the underlying mechanism of Gegen Qinliantang （GGQL） in the treatment of ulcerative colitis （UC） in rats and discuss the effects of modification of GGQL on its efficacy.

Method

The UC model was induced in rats by free access to 5% dextran sulfate sodium in saline solution. Male SD rats were randomly divided into a normal group， a model group， a positive control group （sulfasalazine enteric-coated tablets， 350 mg·kg

-1

）， a GGQL group （17 g·kg

-1

）， a Glycyrrhizae Radix et Rhizoma （GR）-absent GGQL group （17 g·kg

-1

）， a Puerariae Lobatae Radix （PLR）-absent GGQL group （17 g·kg

-1

）， a GR-PLR group （17 g·kg

-1

）， and a Scutellariae Radix （SR）-Coptidis Rhizoma （CR） group （17 g·kg

-1

）. The

in vitro

antioxidant activities of GGQL and its combinations were evaluated by 2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl （DPPH）， 2，2′-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid）（ABTS）， and fluorescence recovery after photobleaching （FRAP） methods. The degree of colonic tissue injury in each group was evaluated based on the weight changes of rats， the length of the colon， the colon sections， and hematoxylin-eosin （HE）-stained histopathologic sections. The serum levels of myeloperoxidase （MPO）， lipid peroxide （LPO）， malondialdehyde （MDA）， total superoxide dismutase （T-SOD）， catalase （CAT）， and reduced glutathione （GSH） were measured by colorimetry. The mRNA and protein expression of nuclear factor-erythroid 2 related factor （Nrf2）， quinone oxidoreductase 1 （NQO1）， and heme oxygenase-1 （HO-1） in colon tissues was detected by real-time fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） and Western blot， respectively.

Result

Compared with the normal group， the model group showed colonic mucosal necrosis， inflammatory infiltration， increased serum levels of MPO， LPO， and MDA （

0.01）， blunted activities of T-SOD， CAT， and GSH （

0.01）， decreasing trend of mRNA expression of Nrf2， NQO1， and HO-1， reduced expression of Nrf2 protein （

0.01）， and decreasing trend of expression of NQO1 and HO-1 proteins. Compared with the model group， the GGQL and its combination groups showed improved pathological injury and morphological structure of colon tissues in UC rats， reduced serum levels of MPO， LPO， and MDA （

0.05）， potentiated T-SOD activity （the PLR-absent GGQL group）， CAT activity （the GR-absent GGQL group and the SR-CR group）， and GSH activity （

0.01）， and increased mRNA and protein expression of Nrf2， NQO1， and HO-1 in colon tissues. The difference in the GGQL group was significant （

0.05）.

Conclusion

GGQL has a restorative effect on the pathological injury of UC rats， and its mechanism may be related to the activation of the Nrf2 signaling pathway and inhibition of oxidative stress response. The absence of PLR or only presence of SR and CR has a great impact on the treatment of UC. The results can provide references for the clinical rational medication of Chinese medicine and the research on the mechanism of compound combinations.

关键词

Keywords

references

沈洪，唐志鹏，唐旭东，等 . 消化系统常见病溃疡性结肠炎中医诊疗指南（基层医生版）［J］. 中华中医药杂志， 2019 ， 34 （ 9 ）： 4155 - 4160 .

刘峰，刘林，王垂杰 . 溃疡性结肠炎病因病机及治疗进展［J］. 山东中医药大学学报， 2021 ， 45 （ 1 ）： 143 - 147 .

龙喻，卢必超，吕文亮 . 吕文亮治疗溃疡性结肠炎经验探析［J］. 湖北中医杂志， 2020 ， 42 （ 9 ）： 22 - 24 .

宋红新，马旭冉，王敦方，等 . 基于网络药理学的黄芩汤治疗溃疡性结肠炎的潜在机制研究［J］. 药学学报， 2020 ， 55 （ 2 ）： 247 - 255 .

吴娜，毛祥坤，万治平，等 . 溃疡性结肠炎活动期关键基因与治疗中药的生信分析及系统评价［J］. 中国中药杂志， 2020 ， 45 （ 11 ）： 2677 - 2686 .

王敦方，王彦礼，王怡薇，等 . 基于UHPLC-MS研究黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠血清代谢谱的影响［J］. 药学学报， 2017 ， 52 （ 8 ）： 1306 - 1312 .

王敦方，王彦礼，王怡薇，等 . 黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88通路调控作用研究［J］. 药学学报， 2016 ， 51 （ 10 ）： 1558 - 1563 .

吴娜，万治平，曾娟，等 . 黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠氧化应激及铁死亡相关指标GSH-Px4，P53，SLC7A11的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 8 ）： 17 - 24 .

熊艳玲，钟薏文，陈雅茜，等 . 基于抗炎和氧化应激角度研究参苓白术颗粒对脾虚湿困溃疡性结肠炎大鼠的作用机制［J］. 中药新药与临床药理， 2021 ， 32 （ 2 ）： 149 - 157 .

全帅，吕开原，李新宇，等 . 低聚葡萄籽原花青素对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响及作用机制［J］. 中草药， 2020 ， 51 （ 1 ）： 149 - 156 .

WEERACHAYAPHORN J ， MENNONE A ， SOROKA C J ， et al . Nuclear factor-E 2 -related factor 2 is a major determinant of bile acid homeostasis in the liver and intestine ［J］. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol ， 2012 ， 302 （ 9 ）： G925 - G936 .

KLAASSEN C D ， REISMAN S A . Nrf2 the rescue： Effects of the antioxidative/electrophilic response on the liver ［J］. Toxicol Appl Pharmacol ， 2010 ， 244 （ 1 ）： 57 - 65 .

庄帅星 . 黄芩汤调控Nrf2通路对溃疡性结肠炎的抗氧化应激作用机制研究［D］. 北京：中国中医科学院， 2016 .

马旭冉，王彦礼，邹迪新，等 . 黄芩汤调控Nrf2通路对溃疡性结肠炎大鼠氧化应激作用的影响［J］. 药学学报， 2019 ， 54 （ 4 ）： 653 - 659 .

方静，陈江，彭君伟，等 . 基于Nrf2通路探讨薏苡附子败酱散治疗溃疡性结肠炎的作用机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2018 ， 24 （ 13 ）： 85 - 92 .

GAO H ， LI Y ， SUN J ， et al . Saccharomyces boulardii ameliorates dextran sulfate sodium-induced ulcerative colitis in mice by regulating NF- κ B and Nrf2 signaling pathways ［J］. Oxid Med Cell Longev ， 2021 ， 2021 ： 1622375 .

CHEN Y ， ZHANG P ， CHEN W ， et al . Ferroptosis mediated DSS-induced ulcerative colitis associated with Nrf2/HO-1 signaling pathway ［J］. Immunol Lett ， 2020 ， 225 ： 9 - 15 .

ZHAO Y ， LUAN H ， GAO H ， et al . Gegen Qinliantang maintains colonic mucosal homeostasis in acute/chronic ulcerative colitis via bidirectionally modulating dysregulated Notch signaling ［J］. Phytomedicine ， 2020 ， 68 ： 153182 .

LI R ， CHEN Y ， SHI M ， et al . Gegen Qinliantang alleviates experimental colitis via suppressing TLR4/NF- κ B signaling and enhancing antioxidant effect ［J］. Phytomedicine ， 2016 ， 23 （ 10 ）： 1012 - 1020 .

陈阳 . 基于肠道菌群的葛根芩连汤干预急性肠炎模型大鼠的作用机制研究［D］. 上海：上海中医药大学， 2019 .

陈阳，陆杰，朱思敏，等 . 基于高通量测序技术研究葛根芩连汤及其配伍对急性肠炎大鼠肠道菌群多样性的影响［J］. 中国中药杂志， 2020 ， 45 （ 6 ）： 1406 - 1417 .

RAO F ， YU-TING Z ， YI-RAN G ， et al . Antioxidant and anti-inflammatory activities of the phenolic extracts of Sapium sebiferum （L.） Roxb.leaves ［J］. Journal of Ethnopharmacology ， 2013 ， 147 （ 2 ）： 517 - 524 .

LU Q ， GU W ， LUO C ， et al . Phytochemical characterization and hepatoprotective effect of active fragment from Adhatoda vasica Nees. against tert-butyl hydroperoxide induced oxidative impairment via activating AMPK/p62/Nrf2 pathway ［J］. J Ethnopharmacol ， 2021 ， 266 ： 113454 .

林川，杨小彤，叶晓川 . 青钱柳叶蛋白含量测定及其降血糖和抗氧化作用研究［J］. 中药新药与临床药理， 2019 ， 30 （ 12 ）： 1485 - 1489 .

马旭冉，王彦礼，邹迪新，等 . 3首止泻名方治疗溃疡性结肠炎大鼠的相关机制对比分析［J］. 中国实验方剂学杂志， 2020 ， 26 （ 20 ）： 1 - 8 .

苗金雪，马旭冉，冯雪，等 . 黄芩汤对UC模型大鼠PINK1/Parkin通路的作用研究［J］. 中医药学报， 2021 ， 49 （ 4 ）： 8 - 13 .

HU T ， WEI G ， XI M ， et al . Synergistic cardioprotective effects of Danshensu and hydroxysafflor yellow A against myocardial ischemia-reperfusion injury are mediated through the Akt/Nrf2/HO-1 pathway ［J］. Int J Mol Med ， 2016 ， 38 （ 1 ）： 83 - 94 .

LI J ， ICHIKAWA T ， JANICKI J S ， et al . Targeting the Nrf2 pathway against cardiovascular disease ［J］. Expert Opin Ther Targets ， 2009 ， 13 （ 7 ）： 785 - 794 .

HE M ， PAN H ， CHANG R C ， et al . Activation of the Nrf2/HO-1 antioxidant pathway contributes to the protective effects of Lycium barbarum polysaccharides in the rodent retina after ischemia-reperfusion-induced damage ［J］. PLoS One ， 2014 ， 9 （ 1 ）： e84800 .

李雪亮，陈兰英，官紫祎，等 . 降香新黄酮latifolin对大鼠急性心肌缺血影响及介导Nrf2信号通路机制研究［J］. 中国中药杂志， 2017 ， 42 （ 20 ）： 3974 - 3982 .

柴冲冲 . 基于颜色-滋味-成分-代谢的黄芩酒炙前后药性变化的科学内涵研究［D］. 北京：北京中医药大学， 2020 .

杨伟鹏，王怡薇，王彦礼，等 . 吴茱萸汁炮制对黄连抗炎药效和苦寒药性的影响［J］. 中国中医药信息杂志， 2013 ， 20 （ 8 ）： 42 - 44，47 .

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