附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响

覃万莉; 徐玉洁; 潘真真; 李小翚; 王振华; 宋健平; 徐勤; 黄新安; 李常青

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220779

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附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响

经典名方 | 更新时间：2022-09-01

- 附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响
- Effect of Fuzitang on Proliferation of Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblast Cell Line MH7A and Expression of miR-155
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第14期页码：29-35
- 作者机构：
  
  广州中医药大学，广州 510405
- 作者简介：
  
  覃万莉，在读硕士，从事肿瘤及类风湿性关节炎的药物治疗及作用机制研究，E-mail：5967416417@qq.com
  李常青，博士，研究员，从事肝癌及类风湿性关节炎药物治疗研究，E-mail：1106923438@qq.com
- 基金信息：
  
  广州市科技计划重点项目(202002020057)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220779
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2021-11-09，
  
  网络出版日期：2022-01-30，
  
  纸质出版日期：2022-07-20
- 稿件说明：
移动端阅览
覃万莉,徐玉洁,潘真真等.附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(14):29-35.

QIN Wanli,XU Yujie,PAN Zhenzhen,et al.Effect of Fuzitang on Proliferation of Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblast Cell Line MH7A and Expression of miR-155[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(14):29-35.
覃万莉,徐玉洁,潘真真等.附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(14):29-35. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220779.

QIN Wanli,XU Yujie,PAN Zhenzhen,et al.Effect of Fuzitang on Proliferation of Human Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblast Cell Line MH7A and Expression of miR-155[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(14):29-35. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220779.

摘要

目的

观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响，研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。

方法

体外培养MH7A细胞，设空白组、附子汤高剂量组（25 g·L

-1

）、低剂量组（12.5 g·L

-1

）和硫酸羟氯喹阳性药组（0.006 25 g·L

-1

），采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）试剂盒法检测细胞增殖，流式细胞术检测MH7A细胞周期的改变；应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测药物处理后miR-155及其下游基因含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶-1（SHIP-1）、蛋白激酶B3（Akt3）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR） mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、Akt3和mTOR的蛋白表达。

结果

附子汤体外在质量浓度6.25 g·L

-1

以上时，能明显抑制MH7A增殖，且呈明显的量-效关系和时-效关系。与空白组比较，附子汤高、低剂量组G

/M期细胞比例均明显增加（

0.05），高剂量组G

期细胞比例明显降低（

0.05），其细胞周期的阻滞作用呈明显的量效关系。与空白组比较，附子汤高、低剂量组miR-155的表达均明显下调（

0.05）；附子汤高剂量组SHIP1 mRNA表达明显上调、Akt3 mRNA表达明显下调（

0.05），附子汤高、低剂量组mTOR mRNA表达均明显下调（

0.05）。与空白组比较，附子汤高、低剂量组的PI3K、Akt3和mTOR的蛋白表达均明显下调（

0.05）。

结论

附子汤对MH7A细胞增殖具有显著的抑制作用，作用机制与下调miR-155的表达，从而促进SHIP-1的表达，抑制其下游PI3K/Akt3/mTOR信号通路的基因表达有关。

Abstract

Objective

To observe the effects of Fuzitang （FZT） on the proliferation of MH7A cells， the human rheumatoid arthritis synovial fibroblasts， and the expression of miR-155 and explore its anti-rheumatoid arthritis mechanism.

Method

MH7A cells were cultured

in vitro

and divided into a blank group， high- （25 g·L

-1

） and low-dose （12.5 g·L

-1

） FZT groups， and a positive drug group （hydroxychloroquine， 0.006 25 g·L

-1

）. The cell proliferation was detected by cell counting kit-8（CCK-8） method， and the change in the MH7A cell cycle was detected by flow cytometry. The mRNA expression of miR-155 and its downstream genes， including SH2 domain-containing inositol 5-phosphatase-1（SHIP-1）， protein kinase B 3（Akt3）， and mammalian target of rapamycin（mTOR）， was detected by Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR）， and the protein expression of phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）， Akt3， and mTOR was detected by Western blot.

Result

FZT

in vitro

in a concentration of 6.25 g·L

-1

above could inhibit the proliferation of MH7A cells in the significant dose- and time-effect manner. Compared with the blank group， the FZT groups showed increased proportions of cells in the G

/M phase （

0.05）， and the high-dose FZT group showed a decreased proportion of cells in the G

phase （

0.05）. The arresting effect of FZT on the cell cycle was in a significant dose-effect manner. Compared with the blank group， the FZT groups showed down-regulated miR-155 and mTOR mRNA expression （

0.05）， and the high-dose FZT group showed up-regulated SHIP1 mRNA expression and down-regulated Akt3 mRNA expression （

0.05）. Compared with the blank group， the FZT groups showed reduced protein expression of PI3K， Akt3， and mTOR （

0.05）.

Conclusion

FZT can significantly inhibit the proliferation of MH7A cells， and the mechanism is related to the promotion of the expression of SHIP-1 and down-regulation of the gene expression of the PI3K/Akt3/mTOR signaling pathway by down-regulating the expression of miR-155.

关键词

Keywords

references

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