黄芪桂枝五物汤通过调节内质网应激对MKR小鼠糖尿病周围神经病变的作用

肖凡; 周聪; 曹淼; 谭艳; 杨金伟; 向琴; 刘秀; 喻嵘

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220807

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黄芪桂枝五物汤通过调节内质网应激对MKR小鼠糖尿病周围神经病变的作用

经典名方 | 更新时间：2022-07-14

- 黄芪桂枝五物汤通过调节内质网应激对MKR小鼠糖尿病周围神经病变的作用
- Effect of Huangqi Guizhi Wuwutang on Diabetic Peripheral Neuropathy in MKR Mice via Regulating Endoplasmic Reticulum Stress
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第16期页码：1-8
- 作者机构：
  
  1.湖南中医药大学，长沙 410208
  2.中医方证研究转化医学湖南省重点实验室，长沙 410208
- 作者简介：
  
  肖凡，讲师，在读博士，从事仲景杂病及经方应用基础研究，E-mail：121186075@qq.com
  喻嵘，教授，博士生导师，从事仲景杂病及经方应用基础研究，Tel：0731-88458072，E-mail：yuron@21.cn.com
- 基金信息：
  
  国家重点研发计划项目(2018YFC1704300);国家自然科学基金项目(82074400);湖南中医药大学校级科研基金项目(2020XJJJ021);湖南中医药大学中医学一流学科开放基金项目(2021ZYX17);湖南中医药大学中医方证研究转化医学湖南省重点实验室开放基金项目(2019FZ09);2020年湖南省研究生教育创新工程和专业能力提升工程项目(CX20200788)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220807
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2021-11-27，
  
  网络出版日期：2022-02-18，
  
  纸质出版日期：2022-08-20
- 稿件说明：
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肖凡,周聪,曹淼等.黄芪桂枝五物汤通过调节内质网应激对MKR小鼠糖尿病周围神经病变的作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(16):1-8.

XIAO Fan,ZHOU Cong,CAO Miao,et al.Effect of Huangqi Guizhi Wuwutang on Diabetic Peripheral Neuropathy in MKR Mice via Regulating Endoplasmic Reticulum Stress[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(16):1-8.
肖凡,周聪,曹淼等.黄芪桂枝五物汤通过调节内质网应激对MKR小鼠糖尿病周围神经病变的作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(16):1-8. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220807.

XIAO Fan,ZHOU Cong,CAO Miao,et al.Effect of Huangqi Guizhi Wuwutang on Diabetic Peripheral Neuropathy in MKR Mice via Regulating Endoplasmic Reticulum Stress[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(16):1-8. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220807.

摘要

目的

探讨黄芪桂枝五物汤通过调控内质网应激c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路相关蛋白治疗糖尿病周围神经病变的作用机制。

方法

8周龄骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体功能缺失小鼠（MKR小鼠）32只，雌雄各半，予高脂饲料喂养4周后，1%链脲佐菌素（STZ）连续腹腔注射5 d；血糖稳定后，每天将小鼠放入铺满冰袋的喂养笼，使其在冰上活动1 h，持续4周。将空腹血糖值≥11.1 mmol·L

-1

的小鼠随机分为模型组、黄芪桂枝五物汤原方剂量组（30 g·kg

-1

·d

-1

）、黄芪桂枝五物汤方剂学剂量组（6.25 g·kg

-1

·d

-1

）、阳性药物（甲钴胺）组（0.17 mg·kg

-1

·d

-1

）。另设同龄MKR鼠8只作为空白组；FVB鼠8只作为正常组。各组灌胃药物4周后，测定小鼠空腹血糖（FBG）的变化，苏木素-伊红（HE）染色和透射电镜对坐骨神经组织形态进行观察，免疫组化法、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测坐骨神经组织内质网应激相关蛋白JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）与肌醇需求激酶1

蛋白（IRE1

）的表达变化。

结果

小鼠行为学与功能学检测显示，与正常组和空白组比较，模型组小鼠缩足舔足、甩尾时间显著缩短（

0.01），坐骨神经传导速度显著降低（

0.01）；与模型组比较，黄芪桂枝五物汤处理后，能够明显改善小鼠行为学与功能学检测指标（

0.05，

0.01）。免疫组化结果显示，与正常组和空白组比较，模型组小鼠JNK的表达明显升高（

0.05）；与模型组比较，黄芪桂枝五物汤处理后，JNK的表达明显降低（

0.05），但给药组之间差异无统计学意义。Western blot结果显示，与正常组和空白组比较，模型组小鼠坐骨神经IRE1

、p-JNK蛋白表达有不同程度的明显升高（

0.05，

0.01）；与模型组比较，黄芪桂枝五物汤可以相应下调模型小鼠坐骨神经IRE1

、p-JNK蛋白表达含量（

0.05，

0.01）；原方剂量组与教材剂量组比较，差异无统计学意义。

结论

黄芪桂枝五物汤可改善坐骨神经功能、减轻坐骨神经组织损伤，其机制可能与黄芪桂枝五物汤抑制坐骨神经的内质网应激反应水平有关。

Abstract

Objective

To investigate the mechanism of Huangqi Guizhi Wuwutang （HQGZWWT） in the treatment of diabetic peripheral neuropathy （DPN） in MKR mice via regulating endoplasmic reticulum （ER） stress.

Method

Thirty-two 8-week-old MKR mice （half were male and half were female） were fed with a high-fat diet for four weeks， and then 1% streptozotocin （STZ） was injected intraperitoneally for five days. After the blood glucose was stabilized， the mice were housed in the cage covered with ice bags for another one hour stimulation per day for four weeks. Mice with fasting blood glucose （FBG） value ≥11.1 mmol·L

-1

were randomly divided into model group ， Huangqi Guizhi Wuwutang in original dosage group （30 g·kg

-1

·d

-1

）， Huangqi Guizhi Wuwutang in formula dosage group （6.25 g·kg

-1

·d

-1

）， and positive drug group （mecobalamin tablets， 0.17 mg·kg

-1

·d

-1

）. Another eight MKR mice of the same age were set as blank group and eight FVB mice were normal group. After four weeks of intragastric administration in each group， the change in FBG was tested， and hematoxylin and eosin （HE） staining and transmission electron microscope were used for observing the morphology of sciatic nerve tissue. In addition， the expression of c-Jun

-terminal kinase （JNK）， phosphorylated c-Jun

-terminal kinase （p-JNK） and inositol requiring enzyme 1

（IRE1

） proteins was determined by immunohistochemical test and Western blot （WB）.

Result

Compared with the conditions in the normal group and blank group， the time of paw withdrawal， paw licking and tail flick in the model group was shortened （

0.01）， and the conduction velocity of sciatic nerve was decreased （

0.01）. Compared with the conditions in the model group， the behavioral and functional indicators were improved by HQGZWWT （

0.05，

0.01）. The immunohistochemical test revealed the JNK expression was elevated in the model group compared with the conditions in the normal group and blank group （

0.05）， while that was lowered by HQGZWWT compared with the condition in the model group （

0.05）. However， there was no difference among the treatment groups. According to the WB， the expression of IRE1

and p-JNK in the model group was enhanced compared with the conditions in the normal group and blank group （

0.05，

0.01）， while that was decreased by HQGZWWT compared with the condition in the model group （

0.05，

0.01）. No difference was observed between the HQGZWWTO and HQGZWWTF groups.

Conclusion

HQGZWWT can improve the neurophysiological function and pathological damage of sciatic nerve， which may be related to its delaying the ER stress response of sciatic nerve.

关键词

Keywords

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