消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制

沈政洁; 黎思苑; 徐丽贤; 潘攀; 陈亚楠; 孙东东; 左云

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220822

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消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制

药理 | 更新时间：2022-06-09

- 消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制
- Xiaoai Jiedu Prescription-containing Serum Enhances Lethal Effect of NK Cells on Colon Cancer Cells
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第13期页码：85-91
- 作者机构：
  
  1.苏州大学附属张家港医院，江苏张家港 215600
  2.江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心，南京 210023
  3.南京中医药大学中医学院·中西医结合学院，南京 210023
- 作者简介：
  
  沈政洁，博士，主治中医师，从事中医抗肿瘤的临床及机制研究，E-mail： szjtcm@126.com
  左云，博士，主任医师，从事肿瘤防治的临床及机制研究，E-mail： zuoyun1@163.com
- 基金信息：
  
  江苏省自然科学基金项目(BK 20190236);张家港市卫健委青年科技项目(ZJGQNKJ 201902);苏州市“科教兴卫”青年科技项目(KJXW 2021061)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220822
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2021-12-19，
  
  网络出版日期：2022-02-08，
  
  纸质出版日期：2022-07-05
- 稿件说明：
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沈政洁,黎思苑,徐丽贤等.消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):85-91.

SHEN Zhengjie,LI Siyuan,XU Lixian,et al.Xiaoai Jiedu Prescription-containing Serum Enhances Lethal Effect of NK Cells on Colon Cancer Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):85-91.
沈政洁,黎思苑,徐丽贤等.消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):85-91. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220822.

SHEN Zhengjie,LI Siyuan,XU Lixian,et al.Xiaoai Jiedu Prescription-containing Serum Enhances Lethal Effect of NK Cells on Colon Cancer Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):85-91. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220822.

摘要

目的

探讨消癌解毒方含药血清对自然杀伤（NK）细胞杀伤结肠癌细胞的增强作用及分子机制。

方法

消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%、5%、10%）处理HCT-116细胞、NK-92MI细胞24 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞增殖的影响。选取低体积分数（0.1%、0.5%、1%）含药血清处理共培养的HCT-116细胞、NK-92MI细胞24 h，钙黄绿素-乙酰甲酯/碘化丙啶（Calcein-AM/PI）双染检测NK细胞对结肠癌细胞杀伤作用；流式细胞仪检测结肠癌细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡、信号传导及转录激活蛋白4（STAT4）通路相关蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测干扰素（IFN）-

分泌。

结果

MTT比色法显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清（5%、10%）能有效抑制HCT-116、NK-92MI细胞增殖（

0.01），但消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）对细胞增殖无明显影响。与空白组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）呈浓度依赖性的增强NK细胞对结肠癌细胞的杀伤活性，并诱导结肠癌细胞凋亡（

0.01）。Western blot显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清能下调B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达，上调Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达（

0.05，

0.01）；与共培养组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）能激活p-STAT4磷酸化，促进IFN-

表达（

0.05）。ELISA显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）能提高IFN-

分泌量（

0.01）。

结论

消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌细胞活性的机制可能与激活STAT4通路，增加NK细胞IFN-

分泌量，下调Bcl-xl、Bcl-2表达，上调Bax表达，进而促进结肠癌细胞凋亡相关。

Abstract

Objective

To explore the influence of Xiaoai Jiedu prescription （XJP）-containing serum on natural killer （NK） cells′ lethal effect on colon cancer cells and the molecular mechanism.

Method

XJP-containing serum （0.1%， 0.5%， 1%， 5%， 10%） was used to treat HCT-116 cells and NK-92MI cells respectively for 24 h， and methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay was employed to detect cell proliferation. Then， low-concentration （0.1%， 0.5%， 1%） XJP-containing serum was selected to treat co-cultured HCT-116 cells and NK-92MI cells for 24 h and calcein acetoxymethyl ester/propidium iodide （Calcein-AM/PI） was applied to detect the killing effect of NK cells on colon cancer cells. Flow cytometry was used to detect apoptosis of colon cancer cells， Western blot the expression of apoptosis-related proteins and signal transducer and activator of transcription 4 （STAT4） pathway-related proteins， and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） the secretion of interferon （IFN）-

Result

High-concentration （5%， 10%） XJP-containing serum inhibited the proliferation of HCT-116 and NK-92MI cells （

0.01）， while low-concentration （0.1%， 0.5%， 1%） XJP-containing serum had no obvious influence on cell proliferation compared with the blank group. As compared with the blank group， low-concentration XJP-containing serum enhanced the killing activity of NK cells against colon cancer cells in a concentration-dependent manner （

0.01）， and induced apoptosis of colon cancer cells （

0.01）. Moreover， XJP-containing serum （0.1%， 0.5%， 1%） down-regulated the expression of B-cell lymphoma 2 （Bcl-2） and B-cell lymphoma-extra large （Bcl-xl）， and up-regulated the expression of Bcl-2-associated X （Bax） compared with the blank group （

0.05，

0.01）. Compared with the co-culture group， XJP-containing serum （0.1%， 0.5%， 1%） increased the expression of p-STAT4 and IFN-

（

0.05）. ELISA result showed that XJP-containing serum （0.1%， 0.5%， 1%） raised IFN-

secretion （

0.01）.

Conclusion

XJP-containing serum can enhance the activity of NK cells to kill colon cancer cells. The mechanism is the likelihood that it activates STAT4 pathway， increases IFN-

secretion by NK cells， down-regulates the expression of Bcl-xl and Bcl-2， and up-regulates the expression of Bax， thereby promoting the apoptosis of colon cancer cells.

关键词

Keywords

references

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