四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用

陈良燕; 朱月伊; 王鑫鑫; 石晓兰

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220926

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四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用

经典名方 | 更新时间：2022-06-28

- 四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用
- Si Junzitang Regulates NKG2A Expression to Improve Anti-colon Cancer Function of NK Cells
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第15期页码：28-34
- 作者机构：
  
  上海中医药大学附属普陀医院，上海 200062
- 作者简介：
  
  陈良燕，硕士，从事中医药肿瘤免疫研究，E-mail：2458035943@qq.com
  石晓兰，硕士，主任医师，从事中医药肿瘤免疫研究，E-mail：lan701206@163.com
- 基金信息：
  
  上海市普陀区卫生系统自主创新科研资助项目（重点项目）(ptkwws201804);全国（上海市）名中医普陀传承工作室建设项目(ptzygzs2101)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220926
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2021-12-14，
  
  网络出版日期：2022-03-13，
  
  纸质出版日期：2022-08-05
- 稿件说明：
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陈良燕,朱月伊,王鑫鑫等.四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(15):28-34.

CHEN Liangyan,ZHU Yueyi,WANG Xinxin,et al.Si Junzitang Regulates NKG2A Expression to Improve Anti-colon Cancer Function of NK Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(15):28-34.
陈良燕,朱月伊,王鑫鑫等.四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(15):28-34. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220926.

CHEN Liangyan,ZHU Yueyi,WANG Xinxin,et al.Si Junzitang Regulates NKG2A Expression to Improve Anti-colon Cancer Function of NK Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(15):28-34. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220926.

摘要

目的

探讨中药复方四君子汤通过调节NKG2A的表达影响自然杀伤（NK）细胞抗结肠癌的作用。

方法

分离、纯化来自健康人外周血NK细胞进行培养，分别构建人NK细胞单培、HCT116细胞单培和NK细胞与HCT116细胞共培模型，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NK细胞中自然杀伤细胞2族成员A（NKG2A）、白细胞介素（IL）-15及结肠癌细胞中组织相容性白细胞抗原E（HLA-E） mRNA的表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NK细胞中IL-15分泌；噻唑蓝（MTT）比色法筛选IL-15的浓度，检测四君子汤和IL-15对NK细胞活性和共培模型中HCT116细胞活性的影响，Real-time PCR检测四君子汤和IL-15对NK细胞中NKG2A和HCT116中HLA-E mRNA表达的影响；使用Anti-NKG2A抗体（M）阻断NKG2A/HLA-E通路，MTT比色法检测共培模型中HCT116细胞增殖情况。

结果

与单培组比较，NK细胞和HCT116细胞相互作用引起NK细胞的NKG2A和HCT116中的HLA-E mRNA表达均上调（

0.05）；IL-15 mRNA表达和分泌也增加（

0.05）；IL-15可增强NK细胞活性和抗结肠癌作用（

0.01），也可上调NKG2A表达（

0.05）；与空白组比较，四君子汤组、四君子汤+IL-15组的NK细胞活性和抗结肠癌作用进一步增加（

0.01），Real-time PCR结果显示，与空白组比较，四君子汤组和四君子汤+IL-15组中NK细胞NKG2A表达下调（

0.05），共培模型中四君子汤组HCT116中HLA-E表达下调（

0.01）；与相应未加M组比较，M组与IL-15+M组HCT116细胞增殖被抑制（

0.01）。

结论

NK细胞与结肠癌细胞相互作用可引起NKG2A-HLA-E通路活化导致NK功能受损，四君子汤可抑制该信号激活从而恢复NK细胞抗结肠癌作用。

Abstract

Objective

To explore the mechanism of Si Junzitang in regulating the expression of NKG2A to affect the anti-colon cancer function of natural killer （NK） cells.

Method

NK cells isolated from healthy honors were cultured and used to construct the three incubation models of NK cells， human colon cancer HCT116 cells， and NK cells + HCT116 cells （co-incubation）. real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） was conducted to determine the mRNA levels of natural killer group 2 member A （NKG2A） and interleukin （IL）-15 in NK cells， as well as the mRNA level of histocompatibility leucocyte antigen E （HLA-E） in HCT116 cells. The secretion of IL-15 was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay was employed to determine the applicable concentration of IL-15 and test the effects of Si Junzitang and IL-15 on the activities of NK cells and the HCT116 cells in the co-incubation model. The effects of Si Junzitang and IL-15 on the mRNA levels of NKG2A in NK cells and HLA-E in HCT116 cells were detected by Real-time PCR. Monalizumab （M， anti-NKG2A mab） was used to block the NKG2A-HLA-E pathway in co-incubation model， and then the proliferation of HCT116 cells was detected by MTT assay.

Result

The interaction of NK cells and HCT116 cells up-regulated the mRNA levels of NKG2A in NK cells and HLA-E in HCT116 cells （

0.05）， as well as the expression level and secretion of IL-15 （

0.05）. Compared with the blank group， Si Junzitang and Si Junzitang + IL-15 promoted the proliferation and improved the anti-colon cancer function of NK cells （

0.01）. Furthermore， they down-regulated the mRNA levels of NKG2A in NK cells and HLA-E in the HCT116 cells co-incubated with NK cells （

0.01）. M and IL-15 + M inhibited the proliferation of HCT116 cells compared with the groups without M （

0.01）.

Conclusion

The interaction of NK cells and HCT116 cells can induce activation of NKG2A-HLA-E pathway to impair NK cell function. Si Junzitang can inhibit the activation of NKG2A-HLA-E pathway to restore the anti-colon cancer function of NK cells.

关键词

Keywords

references

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