丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

车若梅; 涂舒欣; 贺晓丽

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221109

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丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

配伍 | 更新时间：2022-08-30

- 丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用
- Protective Effect of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma and Puerariae Lobatae Radix Extract on SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第19期页码：24-33
- 作者机构：
  
  中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193
- 作者简介：
  
  车若梅，在读硕士，从事中药药理学研究，E-mail：2670393801@qq.com
  贺晓丽，博士，副研究员，硕士生导师，从事神经药理学研究，E-mail：xlhe@implad.ac.cn
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81473586)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221109
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2022-02-08，
  
  网络出版日期：2022-04-12，
  
  纸质出版日期：2022-10-05
- 稿件说明：
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车若梅,涂舒欣,贺晓丽.丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(19):24-33.

CHE Ruomei,TU Shuxin,HE Xiaoli.Protective Effect of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma and Puerariae Lobatae Radix Extract on SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(19):24-33.
车若梅,涂舒欣,贺晓丽.丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(19):24-33. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221109.

CHE Ruomei,TU Shuxin,HE Xiaoli.Protective Effect of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma and Puerariae Lobatae Radix Extract on SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(19):24-33. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221109.

摘要

目的

基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。

方法

采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物，体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型，采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根（SP）提取物低、中、高剂量组（10、30、100 mg·L

-1

），除空白组外，其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率，显微条件下观察细胞形态，分光光度计法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量，2，7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法（DCFH-DA）检测细胞活性氧（ROS）水平，JC-1法检测线粒体膜电位，Hoechst 33342染色法观察细胞核形态，流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染检测细胞凋亡。

结果

丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的存活率最佳，与空白组比较，OGD/R组细胞形态破损，细胞上清液LDH释放率、细胞ROS水平和MDA含量显著升高（

0.01），SOD活性和GSH水平显著降低（

0.01），线粒体膜电位下降，细胞凋亡率升高（

0.01）；与OGD/R组比较，SP提取物各给药组可呈浓度依赖性地提高细胞存活率，改善细胞形态，降低细胞上清液LDH释放率（

0.01）；SP提取物30、100 mg·L

-1

组可明显降低细胞内ROS水平，明显提高细胞中SOD活性和GSH水平（

0.05，

0.01），100 mg·L

-1

可明显降低细胞内MDA含量（

0.05）；此外，丹参-葛根提取物给药后可提高线粒体膜电位，30、100 mg·L

-1

可显著降低细胞凋亡率（

0.01）。

结论

丹参-葛根提取物2∶1配伍对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞有较好的保护作用，这可能与其降低细胞氧化损伤，抑制细胞凋亡相关。

Abstract

Objective

To explore the protective effect of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma and Puerariae Lobatae Radix （SP） extract on oxygen-glucose deprivation/reoxygenation （OGD/R）-injured SH-SY5Y cells based on oxidative stress and apoptosis.

Method

The extracts of the two medicinal materials mixed in different ratios were prepared. Human neuroblastoma SH-SY5Y cells were cultured

in vitro

and the injury was induced by OGD/R. Cell counting kit-8 （CCK-8） assay was used to screen the optimal ratio of the two medicinals and then the extract was used for further experiment. SH-SY5Y cells were classified into normal control group， OGD/R group， and low-， medium-， and high-dose SP （2∶1） extract groups （10， 30， 100 mg·L

-1

， respectively）. Cells in the groups， except the normal control group， were rapidly reoxygenated for 12 h after 4 h OGD for modeling. Then cell viability was detected by CCK-8 and cell morphology was observed under the microscope. The release rate of lactate dehydrogenase （LDH）， superoxide dismutase （SOD） activity， and content of glutathione （GSH） and malondialdehyde （MDA） were determined by spectrophotometry. The level of reactive oxygen species （ROS） was detected with 2，7-dichlorodihydrofluorescein diacetate （DCFH-DA） and mitochondrial membrane potential with JC-1 assay. The nuclear morphology was observed based on Hoechst 33342 staining， and apoptosis was examined by flow cytometry combined with Annexin V-FITC/PI staining.

Result

The viability of the cells was highest in the presence of the extract of the two medicinals mixed at the ratio of 2∶1. Compared with normal control group， OGD/R group showed damaged cell morphology， high release rate of LDH and levels of ROS and MDA （

0.01）， low SOD activity and GSH level （

0.01）， low mitochondrial membrane potential， and high apoptosis rate （

0.01）. Compared with OGD/R group， SP extract improved cell viability and cell morphology and reduce cell LDH release rate in a concentration-dependent manner （

0.01）. In addition， SP extract at 30， 100 mg·L

-1

reduced the level of intracellular ROS and increased SOD activity and GSH level （

0.05，

0.01）， and SP extract at 100 mg·L

-1

decreased the content of MDA （

0.05）. Moreover， SP extract increased mitochondrial membrane potential， and SP extract at 30， 100 mg·L

-1

lowered the apoptosis rate （

0.01）.

Conclusion

The extract of Salvia miltiorrhiza Bunge and Radix Puerariae mixed at 2∶1 shows better protective effect on OGD/R-injured SH-SY5Y cells. The mechanism is the likelihood that it alleviates oxidative damage of cells and inhibits cell apoptosis.

关键词

Keywords

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