基于管球反馈机制研究补脾益肾方对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用

臧春雪; 高天舒

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221241

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基于管球反馈机制研究补脾益肾方对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用

药理 | 更新时间：2022-06-09

- 基于管球反馈机制研究补脾益肾方对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用
- Renal Protective Effect of Bupi Yishen Decoction on Diabetic Kidney Disease Rats Based on Tubuloglomerular Feedback
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第13期页码：102-111
- 作者机构：
  
  1.辽宁中医药大学研究生学院，沈阳 110847
  2.辽宁中医药大学附属医院，沈阳 110033
- 作者简介：
  
  臧春雪，在读博士，从事中医药防治糖尿病肾病研究，E-mail：1874803980@qq.com
  高天舒，博士，教授，主任医师，博士生导师，从事中医药防治内分泌代谢病研究，E-mail：gaotianshu67@163.com
- 基金信息：
  
  北京医卫健康公益基金会项目(YWJKJJHKYJJ-KH2019004);沈阳市临床医学研究中心项目(沈科发［2018］75号-5)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221241
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R587.1
- 收稿日期：2022-02-12，
  
  网络出版日期：2022-04-19，
  
  纸质出版日期：2022-07-05
- 稿件说明：
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臧春雪,高天舒.基于管球反馈机制研究补脾益肾方对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):102-111.

ZANG Chunxue,GAO Tianshu.Renal Protective Effect of Bupi Yishen Decoction on Diabetic Kidney Disease Rats Based on Tubuloglomerular Feedback[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):102-111.
臧春雪,高天舒.基于管球反馈机制研究补脾益肾方对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(13):102-111. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221241.

ZANG Chunxue,GAO Tianshu.Renal Protective Effect of Bupi Yishen Decoction on Diabetic Kidney Disease Rats Based on Tubuloglomerular Feedback[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(13):102-111. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221241.

摘要

目的

观察补脾益肾方对糖尿病肾病大鼠疗效及管球反馈机制的影响。

方法

100只雄性SD大鼠随机取25只作为正常组，余75只应用高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立糖尿病大鼠模型，将成模大鼠随机均分为模型组、补脾益肾组、氯沙坦组、补脾益肾组予补脾益肾方23.4 g·kg

-1

灌胃，氯沙坦组予氯沙坦片9 mg·kg

-1

灌胃，正常组和模型组予以等体积蒸馏水灌胃，持续治疗11周，每2周测1次随机血糖，第11周结束后取材进行指标检测，各组大鼠放入代谢笼，记录24 h尿量。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测24 h尿微量白蛋白定量（24 h UAER）、肾小管损伤相关蛋白和尿肌酐，取血检测血肌酐、尿素氮；行苏木素-伊红（HE）染色、糖原（PAS）染色、马松（Masson）染色观察大鼠肾脏病理变化；免疫组化法观察大鼠肾钠-葡萄糖共转运蛋白1（SGLT1），钠-葡萄糖共转运蛋白2（SGLT2）、钠-钾-氯协同转运蛋白2（NKCC2）、缝隙连接蛋白40（CX40）表达，免疫荧光观察腺苷Ⅰ型受体（A1AR）在肾脏定位；蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肾脏组织SGLT1、SGLT2、NKCC2、CX40、A1AR的表达。

结果

与正常组比较，模型组大鼠肾病理显示肾小球体积增大，基底膜增厚，肾小管上皮细胞脱落；与模型组比较，补脾益肾组大鼠的肾脏病理改善。与正常组比较，模型组大鼠不同时间点随机血糖、24 h UAER、肾小管损伤相关蛋白均升高（

0.01），肾组织SGLT1、SGLT2表达均增强（

0.01），NKCC2、CX40、A1AR表达下降（

0.01）；与模型组比较，补脾益肾组随机血糖、24 h UAER、肾小管损伤相关蛋白均下降（

0.01），SGLT1、SGLT2表达下调，NKCC2、CX40、A1AR表达升高（

0.05）。

结论

补脾益肾方能够改善糖尿病肾病大鼠肾小球和肾小管损伤，减轻早期高滤过，其对糖尿病肾病的干预作用与调节管球反馈有关。

Abstract

Objective

To observe the influence of Bupi Yishen decoction on the curative effect of diabetic kidney disease rats and the tubuloglomerular feedback.

Method

Among the 100 SD male rats， 25 were randomly selected as the normal group， and the remaining 75 were treated with high-fat and high-sugar diet combined with intraperitoneal injection of low-dose streptozotocin （STZ） to establish diabetic rat model. The model rats were randomly divided into model group， Bupi Yishen group and losartan group. Bupi Yishen group and Losartan group were given Bupi Yishen decoction （23.4 g·kg

-1

） and losartan tablet （9 mg·kg

-1

）， respectively by gavage， and normal group and model group received equal volume of distilled water via intragastric administration. The treatment lasted for 11 consecutive weeks. Random blood glucose was measured once every two weeks. Rats in each group were put into metabolic cage and 24-hour urine volume was recorded. At the end of week 11， the rats were sacrificed for index detection. Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） was used to determine the quantification of 24-hour urinary microalbumin excretion rate （24 h UAER）， renal tubular injury-related proteins and urine creatinine. Blood was collected for creatinine and urea nitrogen detection. Hematoxylin-eosin （HE） staining， periodic acid-schiff （PAS） staining and Masson staining were performed to observe the pathological changes of the kidney of rats. The expression of sodium-glucose cotransporter 1 （SGLT1）， sodium-glucose cotransporter 2 （SGLT2）， sodium-potassium-chloride cotransporter 2 （NKCC2） and connexin 40 （CX40） was detected by immunohistochemistry. The location of adenosine type Ⅰ receptor （A1AR） in kidney was observed by immunofluorescence. In addition， the expression of SGLT1， SGLT2， NKCC2， CX40 and A1AR in renal tissues was determined by Western blot and real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR）.

Result

Compared with normal group， renal pathology in model group showed increased glomerular volume， thickened basement membrane， and shed renal tubule epithelial cells. Compared with the model group， the renal pathology of bupiyishen group was improved. Compared with normal group， random blood glucose at different time points， 24 h UAER and renal tubule-injury-related proteins were increased in model group （

0.01）， and the expressions of SGLT1 and SGLT2 in renal tissue were increased （

0.01）， and the expression of NKCC2， CX40 and A1AR decreased （

0.01）. Compared with the model group， the random blood glucose， 24 h UAER and renal tubular injury-related proteins in Bupi Yishen group decreased （

0.01）， the expressions of SGLT1 and SGLT2 were down-regulated， and the expressions of NKCC2， CX40 and A1AR were increased （

0.05）.

Conclusion

Bupi Yishen decoction can improve glomerular and renal tubular injury and alleviate early hyperfiltration in diabetic kidney disease rats. The intervention effect of Bupi Yishen decoction on diabetic kidney disease is related to the regulation of tubuloglomerular feedback.

关键词

Keywords

references

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