基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响

朱冬菊; 朴炳奎; 秦腾腾; 杨晨; 白建琦; 朱宏伟; 张平

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221329

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基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响

药理 | 更新时间：2022-10-18

- 基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响
- Effect of Guben Jiedu Prescription-medicated Serum on Epithelial-mesenchymal Transition of Lung Cancer A549 Cells： Based on PI3K/Akt Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第22期页码：93-99
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院望京医院，北京 100102
  2.中国中医科学院广安门医院，北京 100053
- 作者简介：
  
  朱冬菊，在读博士，从事中西医结合治疗肿瘤的基础与临床研究，E-mail：1969631601@qq.com
  张平，博士，主任医师，从事中西医结合治疗肿瘤的基础与临床研究，E-mail：pinglele@sina.com
- 基金信息：
  
  中国中医科学院科技创新工程项目(CI2021A01818);中国中医科学院望京医院院级科研课题项目(WJYY2020-19)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221329
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2022-01-26，
  
  网络出版日期：2022-04-29，
  
  纸质出版日期：2022-11-20
- 稿件说明：
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朱冬菊,朴炳奎,秦腾腾等.基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):93-99.

ZHU Dongju,PIAO Bingkui,QIN Tengteng,et al.Effect of Guben Jiedu Prescription-medicated Serum on Epithelial-mesenchymal Transition of Lung Cancer A549 Cells： Based on PI3K/Akt Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):93-99.
朱冬菊,朴炳奎,秦腾腾等.基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):93-99. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221329.

ZHU Dongju,PIAO Bingkui,QIN Tengteng,et al.Effect of Guben Jiedu Prescription-medicated Serum on Epithelial-mesenchymal Transition of Lung Cancer A549 Cells： Based on PI3K/Akt Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):93-99. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221329.

摘要

目的

观察固本解毒方对肺癌A549细胞上皮间质转化（EMT）的影响，从磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路探讨其作用机制。

方法

制备固本解毒方含药血清，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率并筛选固本解毒方浓度用于后续实验。分为空白组、固本解毒方组（2.5%、5%、10%含药血清）、PI3K/Akt通路激活剂（SC79）组、固本解毒方+SC79组。划痕实验检测细胞迁移力，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化（p）-Akt、糖原合成酶激酶-3

（GSK-3

）、p-GSK-3

蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测N-cadherin、Vimentin mRNA表达。

结果

与空白组比较，固本解毒方组含药血清（2.5%、5%、10%、20%、40%）A549细胞活力降低（

0.05），选择固本解毒方含药血清10%、5%、2.5%作为高、中、低浓度进行后续实验。与空白组比较，固本解毒方组A549细胞迁移力降低。Real-time PCR结果显示，与空白组比较，固本解毒方组A549细胞N-cadherin、Vimentin mRNA表达显著降低（

0.01）。Western blot结果显示，与空白组比较，固本解毒方组（含药血清5%、10%）A549细胞E-cadherin蛋白表达显著升高（

0.01），固本解毒方组N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3

蛋白表达显著降低（

0.01），p-Akt/Akt、p-GSK-3

/GSK-3

表达明显降低（

0.05，

0.01）。与SC79组比较，固本解毒方组（含药血清10%）E-cadherin蛋白表达显著升高（

0.01），N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3

β、

p-Akt/Akt、p-GSK-3

/GSK-3

表达显著降低（

0.01）。与固本解毒方组（含药血清10%）比较，固本解毒方+SC79组（含药血清10%）E-cadherin蛋白表达显著降低（

0.01），N-cadherin、Vimentin、p-Akt、p-GSK-3

β、

p-Akt/Akt、p-GSK-3

/GSK-3

蛋白表达显著升高（

0.01）。

结论

固本解毒方可抑制肺癌A549细胞迁移和EMT，其机制与调控PI3K/Akt信号通路有关。

Abstract

Objective

To observe the effect of Guben Jiedu prescription （GBJ） on the epithelial-mesenchymal transition （EMT） of lung cancer A549 cells and to explore the mechanism based on phosphoinositide 3-kinase （PI3K）/protein kinase B （Akt） signaling pathway.

Method

The GBJ-medicated serum was prepared. Cell viability was detected by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay to screen the optimal doses of GBJ-medicated serum for further experiment. A549 cells were classified into normal serum group， low-， medium-， and high-dose GBJ-medicated serum groups （2.5%， 5%， and 10% GBJ-medicated serum）， PI3K/Akt pathway activator SC79 group， and high-dose GBJ-medicated serum + SC79 group. Cell migration ability was measured by wound-healing assay. The protein expression of E-cadherin， N-cadherin， vimentin， Akt， phosphorylated Akt （p-Akt）， glycogen synthase kinase-3

（GSK-3

）， and phosphorylated GSK-3

（p-GSK-3

） was detected by Western blotting， and the mRNA expression of N-cadherin and vimentin by Real-time PCR.

Result

Compared with the normal serum， GBJ-medicated serum （2.5%， 5%， 10%， 20%， 40%） decreased the viability of A549 cells （

0.05）， and 10%， 5%， 2.5% GBJ-medicated serum was respectively selected for the follow-up experiment. The migration ability of cells in the high-， medium-， and low-dose GBJ-medicated serum groups was lower than that in the normal serum group. The expression of N-cadherin mRNA and Vimentin mRNA in A549 cells in the three GBJ-medicated serum groups was significantly lower than that in the normal serum group （

0.01）. The protein expression of E-cadherin was higher in the high- and medium-dose GBJ-medicated serum groups than in the normal serum group （

0.01）. The three GBJ-medicated serum groups showed lower protein expression of N-cadherin， vimentin， p-Akt， and p-GSK-3

（

0.01） and lower expression of p-Akt/Akt， p-GSK-3

/GSK-3

（

0.05，

0.01） than normal serum group. Compared with the SC79 group， the high-dose GBJ-medicated serum group demonstrated high protein expression of E-cadherin （

0.01） and low expression of N-cadherin， vimentin， p-Akt， p-GSK-3

， and p-Akt/Akt， p-GSK-3

/GSK-3

（

0.01）. Compared with the high-dose GBJ-medicated serum group， high-dose GBJ-medicated serum + SC79 group showed low protein expression of E-cadherin （

0.01） and high protein expression of N-cadherin， vimentin， p-Akt， p-GSK-3

， p-Akt/Akt， and p-GSK-3

/GSK-3

（

0.01）.

Conclusion

GBJ can inhibit the migration and EMT of lung cancer A549 cells by regulating the PI3K/Akt signaling pathway.

关键词

Keywords

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