温阳、解郁及温阳解郁方对母婴分离结合慢性神经疼痛应激小鼠疼痛敏感性及抑郁样行为的调节作用

左阳; 赵永烈; 巩子汉; 孟丹华; 佘楷杰; 张艺嘉; 梁文青; 楚天云; 岳广欣

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221339

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温阳、解郁及温阳解郁方对母婴分离结合慢性神经疼痛应激小鼠疼痛敏感性及抑郁样行为的调节作用

药理 | 更新时间：2022-09-01

- 温阳、解郁及温阳解郁方对母婴分离结合慢性神经疼痛应激小鼠疼痛敏感性及抑郁样行为的调节作用
- Regulatory Effect of Wenyang Prescription， Jieyu Prescription， and Wenyang Jieyu Prescription on Pain Sensitivity and Depression-like Behaviors in Mice Induced by Maternal Separation and Chronic Neuropathic Pain
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第14期页码：44-53
- 作者机构：
  
  1.北京中医药大学，北京 100029
  2.北京中医药大学第三附属医院，北京 100029
  3.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700
  4.河南中医药大学中医学院，郑州 453000
  5.河南省骨科医院，郑州 453000
- 作者简介：
  
  左阳，在读硕士，从事中医情志病及中医药方证相关基础研究，E-mail：371684129@qq.com
  楚天云，硕士，医师，从事中医药防治慢性疼痛和情志病的临床与基础研究，E-mail：838486410@qq.com； *
  岳广欣，博士，研究员，博士生导师，从事中医方证及精神行为病症的中医病理生理基础及防治研究，E-mail：yuegx73@hotmail.com；
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(82174251;81573846);中国中医科学院科技创新工程重大攻关项目(CI2021A00607);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助自主选题项目(YZ1883;YZ202047;YZ-202107;YZ-202148)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221339
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R395.3
- 收稿日期：2022-03-02，
  
  网络出版日期：2022-05-10，
  
  纸质出版日期：2022-07-20
- 稿件说明：
移动端阅览
左阳,赵永烈,巩子汉等.温阳、解郁及温阳解郁方对母婴分离结合慢性神经疼痛应激小鼠疼痛敏感性及抑郁样行为的调节作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(14):44-53.

ZUO Yang,ZHAO Yonglie,GONG Zihan,et al.Regulatory Effect of Wenyang Prescription， Jieyu Prescription， and Wenyang Jieyu Prescription on Pain Sensitivity and Depression-like Behaviors in Mice Induced by Maternal Separation and Chronic Neuropathic Pain[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(14):44-53.
左阳,赵永烈,巩子汉等.温阳、解郁及温阳解郁方对母婴分离结合慢性神经疼痛应激小鼠疼痛敏感性及抑郁样行为的调节作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(14):44-53. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221339.

ZUO Yang,ZHAO Yonglie,GONG Zihan,et al.Regulatory Effect of Wenyang Prescription， Jieyu Prescription， and Wenyang Jieyu Prescription on Pain Sensitivity and Depression-like Behaviors in Mice Induced by Maternal Separation and Chronic Neuropathic Pain[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(14):44-53. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221339.

摘要

目的

观察母婴分离小鼠给予慢性神经疼痛应激后的行为、痛阈改变，以及血清和中枢抑郁、疼痛相关指标的变化，以温阳方、解郁方、及温阳解郁方进行干预探讨温阳解郁法抗抑郁、改善疼痛敏感的可能机制。

方法

以小鼠出生日为PD0，小鼠在出生后随机分为对空白组和母婴分离组，母婴分离组在PD5~14进行8 h·d

-1

的母婴分离，离乳后将其分为母婴分离组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组，每组15只，同时以15只未经母婴分离的同期雄性仔鼠作为空白组。空白组、母婴分离组小鼠于PD21~90以普通发育饲料喂养，余组分别以温阳方二仙汤、解郁方逍遥散、温阳解郁方及氟西汀药混饲料喂养（用药剂量分别为5.84、12.00、16.68 g·kg

-1

及2.60 mg·kg

-1

）。于PD91行坐骨神经结扎手术，建立母婴分离+慢性神经病理性疼痛模型。采用旷场实验观察各组小鼠抑郁样行为，测量机械痛阈和温度痛阈检测各组小鼠疼痛敏感性，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清皮质酮（CORT）、P物质及

β-

内啡肽（

-EP）含量，免疫组化检测杏仁核糖皮质激素受体（GR）和下丘脑

-EP蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测杏仁核糖皮质激素受体基因（Nr3c1）、FK506结合蛋白5基因（FKBP5）、代谢型谷氨酸受体5基因（GRM5）及脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达量。

结果

与空白组比较，母婴分离组小鼠5 min旷场中心停留时间和运动总距离均显著减少（

0.01），机械痛阈显著降低（

0.01）。血清CORT和

-EP均显著上升（

0.01），FKBP5 mRNA表达显著下降（

0.01）。下丘脑

-EP表达上升，差异具有明显统计学意义（

0.05）。与母婴分离组比较，各给药组5 min旷场中心停留时间均明显增加（

0.05，

0.01），温阳组、温阳解郁组和氟西汀组小鼠在5 min旷场运动总距离明显增加（

0.05，

0.01），各给药组痛阈均不同程度上调。解郁组小鼠血清CORT显著下降（

0.01），

-EP明显下降，但差异无统计学意义；BDNF mRNA显著上升（

0.01）。温阳组小鼠Nr3c1及GRM5 mRNA均明显下降（

0.05，

0.01）。温阳解郁组小鼠血清CORT明显下降（

0.05），Nr3c1、GRM5及BDNF mRNA均下降（

0.05，

0.01），差异具有明显统计学意义，各给药组下丘脑

-EP表达水平均有不同程度提升，但差异无统计学意义。温阳组、解郁组和温阳解郁组小鼠杏仁核GR表达水平均明显上升，差异具有明显统计学意义（

0.05）。

结论

温阳解郁方可通过增强杏仁核GR表达、抑制杏仁核区神经可塑性及兴奋性达到抑制中枢疼痛敏化和调节下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能，缓解抑郁行为和改善躯体疼痛过敏的作用。

Abstract

Objective

To observe the behavioral and pain threshold alterations， as well as the changes in indexes related to depression and pain in the serum and central system in mice stressed by maternal separation and chronic neuropathic pain， and explore the underlying mechanism of Wenyang prescription （WY）， Jieyu prescription （JY）， and Wenyang Jieyu prescription （WYJY） in improving depression and pain sensitivity.

Method

The birth date of mice was recorded as PD0. After birth， the mice were divided into a blank group and an experimental group. The neonatal mice in the experimental group underwent maternal separation in PD5-14 at 8 h·d

-1

. After ablactation， the mice were divided into a maternal separation group， a WY group （Erxian decoction， 5.84 g·kg

-1

）， a JY group （Xiaoyaosan， 12.00 g·kg

-1

）， a WYJY group （16.68 g·kg

-1

）， and a fluoxetine group （2.60 mg·kg

-1

）， with 15 mice in each group. Meanwhile， 15 male mice of the same age without maternal separation were assigned to the normal control group. Mice in the blank group and the maternal separation group were fed on a regular chow diet in PD21-PD90， while the remaining groups were fed on the corresponding drugs. In PD91， sciatic nerve ligation was performed to induce a model of maternal separation and chronic neuropathic pain. The open field test was used to observe the depression-like behaviors of mice in each group， and the mechanical and temperature pain thresholds were measured to detect the pain sensitivity of mice in each group. The serum levels of corticosterone （CORT）， substance P， and

-endorphin （

-EP） were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， and the expression of the glucocorticoid receptor （GR） in the amygdala and

-EP protein in the hypothalamus was detected by immunohistochemistry. The mRNA expression levels of amygdala GR gene （Nr3c1）， FK506 binding protein 5 gene （FKBP5）， metabolic glutamate receptor 5 gene （GRM5）， and brain-derived neurotrophic factor （BDNF） were detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR）.

Result

Compared with the blank group， the maternal separation group showed reduced stay time and total distance traveled in the 5-min open field test （

0.01）， reduced mechanical pain threshold （

0.01）， increased serum CORT and

-EP （

0.01）， declining FKBP5 mRNA expression （

0.01）， and increased hypothalamic

-EP expression （

0.05）. Compared with the maternal separation group， the groups with drug intervention showed prolonged stay time （

0.05，

0.01） and up-regulated pain thresholds to different degrees. The total distance traveled in the 5-min open field test increased in the WY group， the WYJY group， and the fluoxetine group （

0.05，

0.01）. The JY group showed decreased serum CORT （

0.01）， reduced

-EP ， and increased BDNF mRNA （

0.01）. Nr3c1 and GRM5 mRNA decreased in the WY group （

0.05，

0.01）. The WYJY group showed decreased serum CORT （

0.05）and decreased Nr3c1， GRM5， and BDNF

mRNA （

0.05，

0.01）. The levels of

-EP expression were elevated to different degrees in the groups with drug intervention， but the differences were not significant. The levels of GR expression in the WY group， the JY group， and the WYJY group increased （

0.05）.

Conclusion

WYJY can inhibit central pain sensitization and regulate hypothalamic-pituitary-adrenal gland （HPA） axis function by enhancing the expression of GR in the amygdala and inhibiting neuroplasticity and excitability in the amygdala to relieve depression-like behaviors and improve somatic hyperalgesia.

关键词

Keywords

references

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