基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响

张圆圆; 靳培培; 靳贺超; 顾悦; 郭登洲

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221493

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基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响

药理 | 更新时间：2022-09-01

- 基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响
- Effect of Modified Shengjiangsan on Gd-IgA1 in IgA Nephropathy Rats： Based on C1GALT1/C1GALT1C1 Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第14期页码：70-80
- 作者机构：
  
  1.河北中医学院研究生学院，石家庄 050200
  2.河北中医学院第一附属医院，河北省中医院，石家庄 050011
- 作者简介：
  
  张圆圆，在读博士，从事中医药治疗肾脏病研究，E-mail：514183801@qq.com
  郭登洲，主任医师，教授，博士生导师，从事中医药治疗肾脏病研究，E-mail：guodeangzhou@sohu.com
- 基金信息：
  
  河北省科技支撑计划项目(16277765D);河北中医学院科技能力提升项目(KTZ2019025)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221493
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R256.5;R692
- 收稿日期：2021-11-17，
  
  网络出版日期：2022-03-14，
  
  纸质出版日期：2022-07-20
- 稿件说明：
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张圆圆,靳培培,靳贺超等.基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(14):70-80.

ZHANG Yuanyuan,JIN Peipei,JIN Hechao,et al.Effect of Modified Shengjiangsan on Gd-IgA1 in IgA Nephropathy Rats： Based on C1GALT1/C1GALT1C1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(14):70-80.
张圆圆,靳培培,靳贺超等.基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(14):70-80. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221493.

ZHANG Yuanyuan,JIN Peipei,JIN Hechao,et al.Effect of Modified Shengjiangsan on Gd-IgA1 in IgA Nephropathy Rats： Based on C1GALT1/C1GALT1C1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(14):70-80. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221493.

摘要

目的

通过观察加味升降散对免疫球蛋白（Ig）A肾病大鼠血清及肾组织中微小RNA-148b（miRNA-148b）、白细胞介素-6（IL-6）、核心1

1，3-半乳糖基转移酶（C1GALT1）、分子伴侣Cosmc（core1

3-Gal-T特异性分子伴侣，C1GALT1C1）、半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）表达的影响探讨其可能作用机制，为临床运用加味升降散治疗IgA肾病提供科学依据。

方法

将42只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组8只、造模组34只，将大鼠适应性饲养1周后采用联合牛血清白蛋白（BSA）灌胃+尾静脉注射脂多糖（LPS）+皮下注射四氯化碳（CCl

）、蓖麻油的免疫复合的方法建立实验性IgA肾病大鼠模型。造模完成后随机选取2只大鼠取材，检测造模是否成功。造模成功后，将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量（加味升降散，6.27 g·kg

-1

）组、中药高剂量（加味升降散，12.54 g·kg

-1

）组、贝那普利（10 mg·kg

-1

）组各8只，进行药物灌胃，1次/d，治疗4周。于实验第1周末、第9周末、第13周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP），第14周各组大鼠麻醉后取材，股动脉取血后离心取上清检测白蛋白（ALB）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检IL-6、Gd-IgA1表达水平变化；苏木素-伊红（HE）/马松（Masson）/碘酸六胺银（PASM）法观察肾组织病理改变；透射电镜观察肾小球超微结构变化；免疫组化法观察IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1表达情况；免疫荧光观察肾小球系膜区；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）观察miRNA-148b、IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1 mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1蛋白水平变化。

结果

与正常组比较，模型组大鼠24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平明显升高（

0.05），ALB含量水平明显降低（

0.05）；肾小球系膜细胞增生、系膜区增厚、足细胞足突融合，大量颗粒状IgA免疫复合物沉积于肾小球系膜区；IL-6在系膜区、足细胞表达增强，C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达减弱；IL-6 mRNA、miRNA-148b表达增强（

0.01），C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达减弱（

0.01）；IL-6蛋白表达显著增强（

0.01），C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达显著减弱，差异具有统计学意义（

0.01）。与模型组比较，加味升降散干预后，24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平显著降低，差异具有统计学意义（

0.05，

0.01），ALB含量水平升高，差异具有统计学意义（

0.05）；病理损害减轻；基底膜IgA免疫复合物沉积明显减少；IL-6在大鼠肾小球系膜区、足细胞的表达减弱，C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达增强；IL-6 mRNA、miRNA-148b表达减少（

0.01），C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达增加（

0.01）；IL-6蛋白表达明显减弱（

0.05，

0.01），C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达增强，差异具有统计学意义（

0.05，

0.01）；中药组表现出明显的量效趋势。

结论

加味升降散可能通过降低IgA肾病大鼠血清及肾组织中miRNA-148b、IL-6表达，使C1GALT1、C1GALT1C1表达恢复，减少Gd-IgA1的生成，从而减轻肾脏病理损害，减少蛋白尿，发挥保护肾脏的作用，达到延缓疾病进展的目的，并且随剂量增加效果增强。

Abstract

Objective

The effect of modified Shengjiangsan on immunoglobulin A （IgA） nephropathy was observed. The microRNA-148b （miRNA-148b）， interleukin 6 （IL-6）， core 1 beta 1，3-galactosyltransferase （C1GALT1）， molecular chaperone Cosmc （core1

3-Gal-T-specific molecular chaperone C1GALT1C1）， and galactose-deficient IgA1 （Gd-IGA1） in serum and kidney tissues of IgA nephropathy rats were detected to explore the underlying mechanism. The result is expected to lay a scientific basis for clinical application of modified Shengjiangsan in the treatment of IgA nephropathy.

Method

A total of 42 SPF male SD rats were randomized into the normal group （8rats） and modeling group （34 rats） with the random number table method. After one week of adaptive feeding， rats for modeling were given bovine serum albumin （BSA， gavage）， lipopolysaccharide （LPS， injection into tail vein）， carbon tetrachloride （CCl

， subcutaneous injection）， and castor oil to induce IgA nephropathy. After modeling， two rats were randomly selected to test the modeling outcome. Then the model rats were classified into the model group， low-dose Chinese medicine group （modified Shengjiangsan，6.27 g·kg

-1

）， high-dose Chinese medicine group （modified Shengjiangsan，12.54 g·kg

-1

）， and benazepril group （10 mg·kg

-1

） with the random number table method， 8 in each group. The administration （gavage， once a day） lasted 4 weeks. The 24-h urinary total protein （24 h-UTP） was detected at the end of the 1

， 9

， and 13

week of the experiment. At the 14th week， after anesthesia， femoral artery blood was collected and centrifugated. The supernatant was collected to detect albumin （ALB）， aspartate aminotransferase （AST）， alanine aminotransferase （ALT）， serum creatinine （SCr）， and blood urea nitrogen （BUN）. The expression levels of IL-6 and Gd-IGA1 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Based on hematoxylin-eosin （HE）/Masson/periodic Schiff-methenamine silver （PASM） staining， the pathological changes of renal tissues were observed. Ultrastructural changes of glomeruli were observed by transmission electron microscopy. The expression of miRNA-148b， IL-6， C1GALT1， and C1GALT1C1 was detected by immunohistochemistry. The mesangial area of the glomeruli was observed by immunofluorescence. Real-time polymerase chain reaction （Real-time PCR） was employed to determine the mRNA levels of mirNA-148b， IL-6， C1GALT1， and C1GALT1C1， and Western blot was used to detect the protein levels of IL-6， C1GALT1， and C1GALT1C1.

Result

Compared with normal group， the model group showed increase in the content of 24 h-UTP， SCr， ALT， IL-6， and GD-IGA1 （

0.05）， decrease in ALB content （

0.05）. Moreover， rats in the model group demonstrated hyperplasia of glomerular mesangial cells， thickening of mesangial area， podocyte foot process effacement， and a large number of granular IgA immune complex in the mesangial area. In addition， the model group showed increase in the expression of IL-6 in mesangial area and podocytes， decrease in the expression of C1GALT1 and C1GALT1C1 in mesangial area and podocytes， enhanced expression of IL-6 mRNA and miRNA-148b （

0.01）， weakened expression of C1GALT1 mRNA and C1GALT1C1 mRNA （

0.01）， rise of IL-6 protein expression （

0.01）， and reduction in the protein expression of C1GALT1 and C1GALT1C1 （

0.01）. Compared with the model group， modified Shengjiangsan decreased the content of 24 h-UTP， SCr， ALT， IL-6， and Gd-IGA1 （

0.05） and increased the content of ALB （

0.05，

0.01）. Moreover， with the treatment of this Chinese medicine， the pathological damage was significantly alleviated and the deposition of IgA immune complex in basement membrane was reduced. The expression of IL-6 in the mesangial area and podocytes of rats was decreased， and the expression of C1GALT1 and C1GALT1C1 in the mesangial area and podocytes of rats was increased. Moreover， the expression of IL-6 mRNA and miRNA-148b was decreased （

0.01）， and the expression of C1GALT1 mRNA and C1GALT1C1 mRNA was increased （

0.01）. The protein expression of IL-6 was decreased （

0.05，

0.01）， and the protein expression of C1GALT1 and C1GALT1C1 was enhanced （

0.05，

0.01）. The Chinese medicine group showed obvious dose-effect trend.

Conclusion

Modified Shengjiangsan may reduce the expression of miRNA-148b and IL-6 in serum and kidney tissue of IgA nephropathy rats， restore the expression of C1GALT1 and C1GALT1C1， and decrease the generation of Gd-IGA1， so as to reduce renal pathological damage and proteinuria， protect the kidney protection， and finally delay the disease progression. Moreover， the effect is enhanced with the rise of dose.

关键词

Keywords

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