枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化

刘亚楠; 杨皓凯; 闫亚娟; 杨小娟; 段相国; 苏春霞

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20222104

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枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化

药理 | 更新时间：2023-04-28

- 枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化
- Lycium barbarum Polysaccharide Regulates Activation of RAW264.7 Macrophages Through MGL/TLR Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第11期页码：106-112
- 作者机构：
  
  1.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004
  2.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004
- 作者简介：
  
  刘亚楠，硕士，从事宁夏地方优势中草药活性成分的研究，E-mail：liuyanan746@163.com
  段相国，教授，博士生导师，从事肿瘤免疫相关研究，E-mail：2455281549@qq.com；
  苏春霞，教授，博士生导师，从事宁夏地方优势中草药活性成分的研究，E-mail：chunxiasu@qq.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(31860695);宁夏自然科学基金项目(2021AAC02011);高校大学生创新创业训练项目(S202010752047)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222104
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 收稿日期：2022-08-31，
  
  网络出版日期：2022-11-21，
  
  纸质出版日期：2023-06-05
- 稿件说明：
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刘亚楠,杨皓凯,闫亚娟等.枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(11):106-112.

LIU Yanan,YANG Haokai,YAN Yajuan,et al.Lycium barbarum Polysaccharide Regulates Activation of RAW264.7 Macrophages Through MGL/TLR Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(11):106-112.
刘亚楠,杨皓凯,闫亚娟等.枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(11):106-112. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222104.

LIU Yanan,YANG Haokai,YAN Yajuan,et al.Lycium barbarum Polysaccharide Regulates Activation of RAW264.7 Macrophages Through MGL/TLR Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(11):106-112. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222104.

摘要

目的

探讨枸杞多糖（LBP）促进巨噬细胞RAW264.7活化的机制。

方法

采用不同浓度（50、100、200 mg·L

-1

）的LBP刺激巨噬细胞RAW264.7，以100 μg·L

-1

的脂多糖（LPS）和100 mg·L

-1

半乳糖（Gal）作为阳性药。LBP刺激24 h后，采用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）检测不同给药浓度的LBP（0、50、100、200、400、800 mg·L

-1

）对巨噬细胞RAW264.7的毒性影响；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞培养上清中白细胞介素（IL）-6、IL-12的水平；分别通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4（TLR4）/Toll样受体2（TLR2）/巨噬细胞半乳糖型凝集素（MGL）通路中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和核转录因子-

B（NF-

B） mRNA及蛋白表达水平；

结果

CCK-8结果显示，与空白组比较，400、800 mg·L

-1

LBP组干预巨噬细胞RAW264.7时，细胞存活率下降（

0.05）。ELISA结果显示，与空白组比较，50 mg·L

-1

LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-12水平（

0.01）；与空白组比较，100、200 mg·L

-1

LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-6水平（

0.05，

0.01）。Western blot结果显示，与空白组比较，不同质量浓度的LBP组（50、100、200 mg·L

-1

）作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2和MGL通路中MAPK关键分子（p-p38 MAPK、p-ERK、p-NF-

B、p-JNK）的蛋白表达水平（

0.05，

0.01）；与模型组比较，200 mg·L

-1

LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7 p-NF-

B蛋白表达水平（

0.01）。Real-time PCR结果显示，与空白组比较，不同质量浓度的LBP组（50、100、200 mg·L

-1

）作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2信号通路中MAPK关键分子p38 MAPK、ERK、NF-

B、JNK的mRNA表达水平（

0.05，

0.01）；与模型组比较，50、200 mg·L

-1

LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7 JNK、ERK2 mRNA的表达水平（

0.05，

0.01）。

结论

LBP能够通过TLR2/TLR4//MGL通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化，参与免疫应答。

Abstract

Objective

To investigate the mechanism of

Lycium barbarum

polysaccharides （LBP） in promoting the activation of RAW264.7 macrophages.

Method

RAW264.7 macrophages were stimulated with LBP at different concentrations （50， 100， 200 mg·L

-1

）， and those stimulated with lipopolysaccharide （LPS） at 100 μg·L

-1

and galactose （Gal） at 100 mg·L

-1

as positive controls. After 24 h of LBP stimulation， the cell counting kit-8 （CCK-8） was used to detect the survival rate of RAW264.7 macrophages treated with LBP （0， 50， 100， 200， 400， 800 mg·L

-1

）. The levels of interleukin-6 （IL-6） and interleukin-12 （IL-12） in cell culture supernatant were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The protein and mRNA expression of p38 mitogen-activated protein kinase （MAPK）， extracellular signal-regulated kinase （ERK）， c-Jun

-terminal kinase （JNK）， and nuclear factor

B （NF-

B） in Toll-like receptor 4 （TLR4）/Toll-like receptor 2 （TLR2）/macrophage galactose-type lectin （MGL） pathway of RAW264.7 macrophages was detected by Real-time fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） and Western blot.

Result

CCK-8 results showed that compared with the results in the blank group， the survival rate of RAW264.7 macrophages decreased in the 400， 800 mg·L

-1

LBP groups （

0.05）. ELISA results showed that compared with the blank group， 50 mg·L

-1

LBP could promote the secretion of IL-12 in RAW264.7 macrophages （

0.01）. Compared with the blank group， 100 mg·L

-1

LBP and 200 mg·L

-1

LBP could promote the secretion of IL-6 in RAW264.7 macrophages （

0.05，

0.01）. Western blot results showed that compared with the blank group， the LBP groups （50， 100， 200 mg·L

-1

） enhanced protein expression levels of MAPK key molecules （p-p38 MAPK， p-ERK， p-NF-

B， and p-JNK） in TLR4， TLR2， and MGL pathways （

0.05，

0.01）. Compared with the model group， the 200 mg·L

-1

LBP group could promote the expression level of p-NF-

B protein in RAW264.7 macrophages （

0.01）. Real-time PCR results showed that compared with the blank group， the LBP groups （50， 100， and 200 mg·L

-1

） enhanced the mRNA expression levels of MAPK key molecules （p38 MAPK， ERK， NF-

B， and JNK） in TLR4 and TLR2 pathways （

0.05，

0.01）. Compared with the model group， the 50 and 200 mg·L

-1

LBP groups could promote the mRNA expression levels of JNK and ERK2 in RAW264.7 macrophages （

0.05，

0.01）.

Conclusion

LBP can regulate the activation of RAW264.7 macrophages and participate in the immune response through the TLR2/TLR4/MGL pathway.

关键词

Keywords

references

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