黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-<italic style="font-style: italic">κ</italic>B信号通路的潜在靶点

张红杰; 苏丹; 朱根华; 宋永贵; 周步高; 李珊珊; 章常华; 艾志福

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20222138

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黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点

配伍 | 更新时间：2022-10-18

- 黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点
- Compatibility Advantage of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma for Anti-neuroinflammation and Its Potential Targets for Regulating TLR4/MyD88/NF-κB Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第22期页码：58-67
- 作者机构：
  
  江西中医药大学中医脑科学研究所，江西省中医药防治认知障碍脑疾病重点实验室，江西省中医药管理局抑郁症中医证候动物模型重点研究室，江西省中医药管理局中药药效（防治精神障碍脑疾病）评价重点研究室，南昌 330006
- 作者简介：
  
  张红杰，在读硕士，从事中医药防治认知障碍脑疾病研究，E-mail：1312543243@qq.com
  艾志福，博士，副教授，博士生导师，从事中医药防治认知障碍脑疾病研究，E-mail：359391187@qq.com
- 基金信息：
  
  江西省自然科学基金面上项目(2020BABL206142);国家自然科学基金项目(82060808);江西省卫生健康委员会科技计划项目(202131057);江西中医药大学首批校级科技创新团队发展计划—方证对应免疫代谢创新团队项目(CXTD22008);江西中医药大学省级大学生创新创业训练计划项目(S202110412012)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222138
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R745.1
- 收稿日期：2022-05-08，
  
  网络出版日期：2022-08-30，
  
  纸质出版日期：2022-11-20
- 稿件说明：
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张红杰,苏丹,朱根华等.黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):58-67.

ZHANG Hongjie,SU Dan,ZHU Genhua,et al.Compatibility Advantage of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma for Anti-neuroinflammation and Its Potential Targets for Regulating TLR4/MyD88/NF-κB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):58-67.
张红杰,苏丹,朱根华等.黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):58-67. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222138.

ZHANG Hongjie,SU Dan,ZHU Genhua,et al.Compatibility Advantage of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma for Anti-neuroinflammation and Its Potential Targets for Regulating TLR4/MyD88/NF-κB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):58-67. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222138.

摘要

目的

探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势，并基于Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-

B（NF-

B）通路，阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。

方法

选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞（BV2），将BV2分为8组，分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组；利用细菌脂多糖（LPS）建立BV2细胞炎症模型，通过细胞增殖活性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性；明场下观察细胞形态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TLR4、MyD88、NF-

B mRNA表达；细胞免疫荧光检测NF-

B p65核转位情况；通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-

B阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。

结果

与正常组比较，LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态，培养液及细胞内的IL-6、TNF-

、IL-1

含量显著升高（

0.01），TLR4、MyD88、NF-

B p50及NF-

B p65的mRNA表达显著升高（

0.01），NF-

B p65的入核现象明显；与模型组比较，黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后，BV2细胞形态大部分恢复，IL-6、TNF-

、IL-1

水平均显著降低（

0.01），TLR4、MyD88、NF-

B p50及NF-

B p65 mRNA表达明显降低（

0.05，

0.01），NF-

B p65大多存在于细胞质中；黄芩组、黄连组与模型组比较，细胞形态略有恢复，促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-

B p50、NF-

B p65 mRNA表达量有所降低；与黄芩-黄连组比较，黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组；与模型组比较，应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组，能够明显降低TLR4、MyD88、NF-

B p50及NF-

B p65的mRNA表达（

0.05，

0.01），并明显抑制NF-

B p65转入细胞核内。

结论

黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连；该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-

B信号通路激活密切相关；通过验证说明TLR4、MyD88、NF-

B为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。

Abstract

Objective

To explore the compatibility advantage of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma in the prevention and treatment of neuroinflammation， and to elucidate the action characteristics and mechanism of the compatibility advantage based on Toll like receptor （TLR4）/myeloid differentiation factor 88 （MyD88）/nuclear factor kappaB （NF-

B） pathway.

Method

Representative mouse microglia cells （BV2）

in vitro

were selected and divided into 8 groups： control group， model group， Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma group， Piracetam group， Scutellariae Radix group and Coptidis Rhizoma group. The BV2 cell inflammatory model was established by lipopolysaccharide （LPS）， and the cell activity was detected by cell counting kit-8 （CCK-8）. Cell morphology was observed under bright field. The production and release of pro-inflammatory factors in BV2 cells were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and immunofluorescence assay， and the mRNA expressions of TLR4， MyD88 and NF-

B were detected by Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. The nuclear translocation of NF-

B p65 was detected by immunofluorescence， and TLR4 signal transduction inhibitor （CLI-095） and NF-

B inhibitor （PDTC） were used to confirm the anti-neuroinflammation targets of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma.

Result

Compared with the conditions in the control group， most cells in LPS-induced model group were activated， and the contents of IL-6， TNF-

and IL-1

in culture medium and cells and the mRNA expressions of TLR4， MyD88， NF-

B p50 and NF-

B p65 were increased （

0.01）， with obvious nuclear entry of NF-

B p65. Compared with the conditions in the model group， BV2 cell morphology was mostly recovered after pretreatment in Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma and Piracetam groups， and the levels of IL-6， TNF-

and IL-1

and the mRNA expressions of TLR4， MyD88， NF-

B p50 and NF-

B p65 were decreased （

0.05，

0.01）， with NF-

B p65 mostly observed in cytoplasm. Compared with the conditions in the model group， cell morphology was slightly recovered in Scutellariae Radix group and Coptidis Rhizoma group， and the levels of pro-inflammatory factors and mRNA expressions of TLR4， MyD88， NF-

B p50 and NF-

B p65 were reduced. In terms of inhibitory effect on pro-inflammatory factors， Scutellariae Radix group and Coptidis Rhizoma group were lower than Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma group （

0.05）. Compared with the model group， the "Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma+CLI-095" group and "Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma+PDTC" group had lowered mRNA expressions of TLR4， MyD88， NF-

B p50 and NF-

B p65 （

0.05，

0.01）， and the transfer of NF-

B p65 into nucleus was obviously inhibited.

Conclusion

The anti-neuroinflammation effect of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma was significantly better than Scutellariae Radix or Coptidis Rhizom alone， and the anti-neuroinflammation advantage was closely related to the inhibition of activation of TLR4/MyD88/NF-

B signaling pathway in microglial cells. It was confirmed that TLR4， MyD88 and NF-

B were potential targets for Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma to exert the compatibility advantage.

关键词

Keywords

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