泽漆水提物对香烟烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺病及肺组织癌前病变相关蛋白的影响

周子也; 马惠苗; 陈兰英; 段文彬; 林丽华; 刘鹏

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230241

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

泽漆水提物对香烟烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺病及肺组织癌前病变相关蛋白的影响

药理 | 更新时间：2023-05-17

- 泽漆水提物对香烟烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺病及肺组织癌前病变相关蛋白的影响
- Effect of Euphorbia helioscopia Aqueous Extract on Chronic Obstructive Pulmonary Disease and Precancerous Lesion-associated Proteins of Lung Tissues in Mice Induced by Cigarette Smoke
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第7期页码：84-94
- 作者机构：
  
  1.江西中医药大学，南昌 330004
  2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，南昌 330006
  3.江西中医药大学中药药效（扶正祛邪抗肿瘤）评价重点研究室，南昌 330006
- 作者简介：
  
  周子也，在读硕士，从事中药药效评价与新药研究，E-mail：317347204@qq.com
  陈兰英，博士，教授，从事中药药效评价与新药研究，E-mail：clyxy2513@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(82060732)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230241
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R22;R563
- 收稿日期：2022-12-11，
  
  网络出版日期：2023-02-03，
  
  纸质出版日期：2023-04-05
- 稿件说明：
移动端阅览
周子也,马惠苗,陈兰英等.泽漆水提物对香烟烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺病及肺组织癌前病变相关蛋白的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(07):84-94.

ZHOU Ziye,MA Huimiao,CHEN Lanying,et al.Effect of Euphorbia helioscopia Aqueous Extract on Chronic Obstructive Pulmonary Disease and Precancerous Lesion-associated Proteins of Lung Tissues in Mice Induced by Cigarette Smoke[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(07):84-94.
周子也,马惠苗,陈兰英等.泽漆水提物对香烟烟雾诱导小鼠慢性阻塞性肺病及肺组织癌前病变相关蛋白的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(07):84-94. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230241.

ZHOU Ziye,MA Huimiao,CHEN Lanying,et al.Effect of Euphorbia helioscopia Aqueous Extract on Chronic Obstructive Pulmonary Disease and Precancerous Lesion-associated Proteins of Lung Tissues in Mice Induced by Cigarette Smoke[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(07):84-94. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230241.

摘要

目的

探究泽漆水提物对香烟烟雾（CS）所致的慢性阻塞性肺病（COPD）的保护作用及肺组织癌前病变相关蛋白的影响。

方法

通过建立CS所致的COPD小鼠模型（60只），随机分为正常组、模型组、阳性药组（地塞米松2 mg·kg

-1

）及泽漆水提物低、中、高剂量组（1.875、3.75、7.5 g·kg

-1

）。采用高效液相色谱法（HPLC）测定泽漆水提物中相关成分；动物肺功能仪检测小鼠呼气末期暂停（EEP）、气道阻力（Penh）、50%肺活量呼吸时的呼气流量（EF50）等肺功能指标变化；高通量液相蛋白芯片技术检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素（IL）-2、IL-5、IL-18、IL-17A、IL-27等炎性因子水平变化；苏木素-伊红（HE）染色检测小鼠肺组织的病理变化；比色法测定小鼠肺组织中的丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤坏死因子-

（TNF-

）、转化生长因子-

（TGF-

）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及MMP-12细胞因子mRNA相对表达量变化；免疫组化（IHC）测定小鼠肺组织中肿瘤蛋白（P53）及增殖细胞相关抗原（Ki67）表达水平变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肺组织中多重肿瘤抑制蛋白（P16）、DNA甲基转移酶（DNMT1）及脆性组氨酸三联体（FHIT）相对表达量变化。

结果

泽漆水提物中化合物主要含有酚类成分没食子酸和原儿茶酸及黄酮类成分金丝桃苷、芦丁、杨梅素、柚皮素、槲皮素、木犀草素、山柰酚和甘草查尔酮A，其中没食子酸和芦丁含量最高；与正常组比较，模型组小鼠EEP、EF50、Penh水平明显升高（

0.05），MDA及MPO水平显著升高（

0.01），GSH-Px显著降低（

0.01），IL-2、IL-5、IL-18、IL-17A、IL-27、TNF-

、TGF-

、MMP-2、MMP-9及MMP-12水平明显升高（

0.05），小鼠肺组织P53、Ki67、FHIT表达显著上升（

0.01），DNMT1、P16表达显著下降（

0.01）。与模型组比较，各泽漆水提物组EEP、EF50水平明显降低（

0.05）；在HE染色下观察可见模型组小鼠肺组织病理损伤明显，泽漆水提物治疗后，肺组织基底细胞增生的病理损伤逐渐改善；泽漆水提物各组MDA及MPO水平显著降低（

0.01），GSH-Px显著升高（

0.01）；泽漆水提物各组IL-2、IL-5、IL-18、IL-17A、IL-27、TNF-

、TGF-

、MMP-2、MMP-9及MMP-12水平明显下降（

0.05）；泽漆水提物治疗后小鼠肺组织Ki67、FHIT明显下降（

0.05），P53、DNMT1表达明显上升（

0.05）。

结论

泽漆水提物对COPD小鼠保护及抑制癌前病变的作用，这可能与抑制炎症及氧化应激反应、调节蛋白酶与抗蛋白酶失衡及调控上皮细胞生长相关。

Abstract

Objective

To investigate the protective effect and mechanism of

Euphorbia helioscopia

aqueous extract （EHE） on mice with chronic obstructive pulmonary disease （COPD） and its influence on precancerous lesion-associated proteins in lung tissues induced by cigarette smoke （CS）.

Method

The COPD model was induced by CS in 60 mice and the model mice were randomly divided into control group， model group， positive drug group （dexamethasone， 2 mg·kg

-1

）， and low-， medium-， and high-dose EHE groups （1.875， 3.75， 7.5 g·kg

-1

）. The high-performance liquid chromatography （HPLC） method was used to determine the related components in EHE. The changes in end-expiratory pause （EEP）， airway resistance （Penh）， expiratory flow at 50% vital capacity （EF50）， and other pulmonary function indexes were detected by the spirometer. The levels of inflammatory factors， such as interleukin （IL）-2， IL-5， IL-18， IL-17A， and IL-27 in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） of mice were detected by high-throughput liquid protein chip technology. Hematoxylin-eosin （HE） staining was used to detect the pathological changes in lung tissues in mice. The content of malondialdehyde （MDA）， myeloperoxidase （MPO）， and glutathione peroxidase （GSH-Px） in lung tissues was determined by the colorimetric method. The mRNA relative expression of tumor necrosis factor-

（TNF-

）， transforming growth factor-

（TGF-

）， matrix metalloproteinase-2 （MMP-2）， matrix metalloproteinase-9 （MMP-9）， and matrix metalloproteinase-12 （MMP-12） was detected by Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. Immunohistochemistry （IHC） was used to detect the expression of tumor protein （P53） and cell proliferation-associated antigen （Ki67） in lung tissues， and Western blot was used to detect the relative expression of tumor suppressor protein （P16）， DNA （cytosine-5）-methyltransferase 1 （DNMT1）， and fragile histidine triad （FHIT） in lung tissues.

Result

The results showed that the main compounds in EHE included phenols （gallic acid and protocatechuic acid） and flavonoids （such as hyperoside， rutin， myricetin， naringenin， quercetin， luteolin， kaempferol， and licorice chalcone A）， among which gallic acid and rutin were the highest in content. Compared with normal group， model group showed increased levels of EEP， EF50， and Penh （

0.05）， and showed increased MDA and MPO levels （

0.01） and decreased GSH-Px （

0.01）， and the model group displayed increased levels of IL-2， IL-5， IL-18， IL-17A， IL-27， TNF-

， TGF-

， MMP-2， MMP-9， and MMP-12 （

0.05）. And the model group exhibited up-regulated expression of P53， Ki67， and FHIT in lung tissues （

0.01） and down-regulated expression of DNMT1 and P16 （

0.01）. Compared with model group， the EHE groups showed decreased EEP and EF50 levels （

0.05）. The pathological injury of lung tissues in mice of the model group was observed under HE staining， and the pathological injury of basal cell hyperplasia of lung tissues was gradually improved after treatment with EHE. The EHE groups showed reduced levels of MDA and MPO （

0.01） and increased GSH-Px （

0.01）. The EHE groups displayed decreased levels of IL-2， IL-5， IL-18， IL-17A， IL-27， TNF-

， TGF-

， MMP-2， MMP-9， and MMP-12 （

0.05）. And the EHE groups showed down-regulated Ki67 and FHIT in lung tissues （

0.05） and up-regulated expression of P53 and DNMT1 （

0.05）.

Conclusion

EHE can protect mice from COPD and inhibit precancerous lesions， and the mechanism may be related to the inhibition of inflammation and oxidative stress response， regulation of protease and antiprotease imbalance， and regulation of epithelial cell growth.

关键词

Keywords

references

PU X ， LIU L ， FENG B ， et al . Association between ICS use and risk of hyperglycemia in COPD patients：Systematic review and meta-analysis ［J］. Respir Res ， 2021 ， 22 （ 1 ）： 201 .

高恒兴，温中梅，袁海波，等 . 慢性阻塞性肺病发病机制研究的最新进展［J］. 中国老年学杂志， 2015 ， 35 （ 19 ）： 5668 - 5670 .

BEETCH M ， HARANDI-ZADEH S ， SHEN K ， et al . Dietary antioxidants remodel DNA methylation patterns in chronic disease ［J］. Br J Pharmacol ， 2020 ， 177 （ 6 ）： 1382 - 1408 .

高冬青，王家林 . 肺癌危险因素研究现状［J］. 中华肿瘤防治杂志， 2019 ， 26 （ 21 ）： 1657 - 1662 .

李窕，何雪，陈燕 . 肺癌与慢性阻塞性肺病共病的发病机制［J］. 中南大学学报：医学版， 2017 ， 42 （ 10 ）： 1212 - 1216 .

CELLI B R . Chronic obstructive pulmonary disease and lung cancer：Common pathogenesis，shared clinical challenges ［J］. Proc Am Thorac Soc ， 2012 ， 9 （ 2 ）： 74 - 79 .

吴漫，徐兴祥 . 慢性阻塞性肺疾病合并肺癌的研究进展［J］. 中华肺部疾病杂志：电子版， 2019 ， 12 （ 5 ）： 646 - 649 .

查显进，石强，邵峰，等 . 泽漆化学成分研究［J］. 中草药， 2021 ， 52 （ 2 ）： 341 - 348 .

YANG Y ， CHEN X ， LUAN F ， et al . Euphorbia helioscopia L.：A phytochemical and pharmacological overview ［J］. Phytochemistry ， 2021 ， 184 ： 112649 .

刘雅慧，陈兰英，周朦静，等 . 泽漆水提物对LPS诱导的急性肺损伤的影响［J］. 中成药， 2022 ， 44 （ 3 ）： 732 - 739 .

王玲玲，陈兰英，马惠苗，等 . 泽漆水提物对香烟联合LPS所致的COPD大鼠的改善作用［J］. 中成药， 2021 ， 43 （ 10 ）： 2644 - 2653 .

韩密，邵沛璐，刘学芳，等 . 中药有效成分治疗慢性阻塞性肺疾病的机制研究进展［J］. 中国实验方剂学杂志， 2022 ， 28 （ 9 ）： 221 - 232 .

黄吉赓，王忆勤，朱雷，等 . 泽漆化痰、峻泻成分的疗效观察［J］. 新中医， 1991 ， 6 ： 51 - 53 .

孙玄厹 . 黄吉赓 . 泽漆研究与用药经验总结［J］. 环球中医药， 2020 ， 13 （ 10 ）： 1772 - 1774 .

SU X ， CHEN J ， LIN X ， et al . FERMT3 mediates cigarette smoke-induced epithelial-mesenchymal transition through Wnt/ β -catenin signaling ［J］. Respir Res ， 2021 ， 22 （ 1 ）： 286 .

GUAN R ， WANG J ， CAI Z ， et al . Hydrogen sulfide attenuates cigarette smoke-induced airway remodeling by upregulating SIRT1 signaling pathway ［J］. Redox Biol ， 2020 ， 28 ： 101356 .

陈美凤，加慧，夏书月 . 不同COPD动物模型特点及应用的研究进展［J］. 中国实验动物学报， 2020 ， 28 （ 4 ）： 563 - 569 .

李树民，张敏，王朋，等 . 小鼠无创性肺功能的测定及其意义［J］. 中国实验动物学报， 2018 ， 26 （ 5 ）： 548 - 553 .

范伟森，刘姣，张英杰，等 . 中医药治疗子宫内膜异位症的相关通路研究进展［J］. 中国实验方剂学杂志， 2023 ， 29 （ 3 ）： 233 - 243 .

刘滨，刘雅清，宋红新，等 . 黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2022 ， 28 （ 22 ）： 7 - 15 .

王洋，邹新梅，李雷，等 . 血清PCT、INF- γ 、CRP及NT-proBNP水平与慢阻肺患者肺部感染严重程度关系研究［J］. 浙江中西医结合杂志， 2022 ， 32 （ 1 ）： 30 - 33 .

BRABER S ， HENRICKS P ， NIJKAMP F ， et al . Inflammatory changes in the airways of mice caused by cigarette smoke exposure are only partially reversed after smoking cessation ［J］. Respir Res ， 2010 ， 11 （ 1 ）： 99 .

OGAWA Y ， DURU E ， AMEREDES B . Role of IL-10 in the resolution of airway inflammation ［J］. Curr Mol Med . 2008 ， 8 （ 5 ）： 437 - 445 .

沈俊希，刘怀全，于海洋，等 . 中医药干预慢性阻塞性肺疾病Th17/Treg平衡的研究进展［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 23 ）： 237 - 244 .

ZHUO S ， LI N ， ZHENG Y ， et al . Expression of the lymphocyte chemokine XCL1 in lung tissue of COPD mice，and its relationship to CD4（+）/CD8（+） ratio and IL-2 ［J］. Cell Biochem Biophys ， 2015 ， 73 （ 2 ）： 505 - 511 .

ZHU X ， GADGIL A S ， GIVELBER R ， et al . Peripheral T cell functions correlate with the severity of chronic obstructive pulmonary disease ［J］. J Immunol ， 2009 ， 182 （ 5 ）： 3270 - 3277 .

陆包伟，刘露梅，王能，等 . 龟鹿二仙胶对糖尿病大鼠生殖损伤的保护作用及机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2022 ， 28 （ 19 ）： 1 - 8 .

彭红星，杨荣时，曾玉兰，等 . 吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠模型巨噬细胞炎性蛋白-2及髓过氧化物酶研究［J］. 中国现代医学杂志， 2012 ， 22 （ 12 ）： 10 .

WANG T ， DAI F ， LI G H ， et al . Trans-4，4'-dihydroxystilbene ameliorates cigarette smoke-induced progression of chronic obstructive pulmonary disease via inhibiting oxidative stress and inflammatory response ［J］. Free Radic Biol Med ， 2020 ， 152 ： 525 - 539 .

YAMAHANA H ， TERASHIMA M ， TAKATSUKA R ， et al . TGF-beta1 facilitates MT1-MMP-mediated proMMP-9 activation and invasion in oral squamous cell carcinoma cells ［J］. Biochem Biophys Rep ， 2021 ， 27 ： 101072 .

AGRAVAL H ， YADAV U C . MMP-2 and MMP-9 mediate cigarette smoke extract-induced epithelial-mesenchymal transition in airway epithelial cells via EGFR/Akt/GSK3beta/beta-catenin pathway：Amelioration by fisetin ［J］. Chem Biol Interact ， 2019 ， 314 ： 108846 .

LANTUEJOUL S ， SALAMEIRE D ， SALON C ， et al . Pulmonary preneoplasia-sequential molecular carcinogenetic events ［J］. Histopathology ， 2009 ， 54 （ 1 ）： 43 - 54 .

顾其华，胡成平，陈琼，等 . 绿茶对苯并芘诱发大鼠肺癌的预防及其机制初探［J］. 中国肺癌杂志， 2008 ， 11 （ 4 ）： 519 - 523 .

赖永才，罗志刚，毛炜，等 . TIP30与p53、ki67在肺癌中表达的相关性及意义［J］. 标记免疫分析与临床， 2021 ， 28 （ 6 ）： 1021 - 1026 .

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

中药有效成分调控骨质疏松症体内外模型相关机制研究进展

基于生物信息学探讨五味子乙素抑制铁死亡改善蛋氨酸胆碱缺乏诱导脂肪肝模型小鼠的作用机制

党参总皂苷对衰老小鼠认知功能障碍保护作用及机制

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响及作用机制