鳖甲煎丸调控lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3
β 信号轴干预原发性肝癌的作用机制Intervention Mechanism of Biejiajian Wan on Primary Liver Cancer by Regulating lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3
β Signal Axis- 中国实验方剂学杂志 2024年30卷第4期 页码：107-113
- 作者机构：
1.河南中医药大学，郑州 450046
2.河南中医药大学 第一附属医院，郑州 450000
- 作者简介：
邵范雷，在读硕士，从事中医药防治消化系统疾病的研究，E-mail： 1170053106@qq.com
刘卫红，硕士，主任药师，从事中药学研究，E-mail： lwh_c@163.com
- 基金信息：河南省中医药科研专项(20-21ZY1012);河南省中医药科研专项(2019JDZX2048);河南省自然科学基金项目(222300420222)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230730
中图分类号： R2-0;R22;R242;R2-031;R285.5收稿：2022-12-13，
网络出版：2023-02-01，
纸质出版：2024-02-20
- 稿件说明：
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邵范雷,陈秋平,毕倩等.鳖甲煎丸调控lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3β信号轴干预原发性肝癌的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):107-113.
SHAO Fanlei,CHEN Qiuping,BI Qian,et al.Intervention Mechanism of Biejiajian Wan on Primary Liver Cancer by Regulating lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3β Signal Axis[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):107-113.
邵范雷,陈秋平,毕倩等.鳖甲煎丸调控lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3β信号轴干预原发性肝癌的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):107-113. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230730.
SHAO Fanlei,CHEN Qiuping,BI Qian,et al.Intervention Mechanism of Biejiajian Wan on Primary Liver Cancer by Regulating lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3β Signal Axis[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):107-113. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230730.
摘要
目的
2
基于长链非编码RNA SNHG5 （lncRNA SNHG5） /微小RNA-26a-5p （miRNA-26a-5p） /糖原合成酶激酶-3
β
（GSK-3
β
） 信号轴探究鳖甲煎丸干预原发性肝癌的作用机制。
方法
2
双荧光素酶报告实验验证HepG2细胞内lncRNA SNHG5与miRNA-26a-5p，miRNA-26a-5p与GSK-3
β
的靶向互作关系。建立人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型，随机分为模型组，鳖甲煎丸低、中、高剂量组（0.5、1.0、2.0 g·kg
-1
），索拉非尼组（100 mg·kg
-1
），每组10只。分别予以生理盐水或药物灌胃28 d，并于不同时间测量裸鼠瘤体积。苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织形态学改变；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中lncRNA SNHG5、miRNA-26a-5p、GSK-3
β
及
β
-连环蛋白（
β
-catenin）
mRNA的核酸水平差异；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中GSK-3
β
、
β
-catenin的蛋白表达水平。
结果
2
与SNHG5-野生型（WT）+miRNA内参（NC）组比较，SNHG5-WT+miRNA-26a-5p mimic（模拟物）组的相对荧光素酶活性明显降低（
P
<
0.05）。与GSK-3
β
-WT+miRNA NC组比较，GSK-3
β
-WT+miRNA-26a-5p mimic组的相对荧光素酶活性明显降低（
P
<
0.05）。与模型组比较，鳖甲煎丸低、中、高剂量组裸鼠肿瘤体积明显减小（
P
<
0.05，
P
<
0.01）。与模型组比较，鳖甲煎丸各剂量组裸鼠瘤体组织内细胞排列明显稀疏，部分细胞坏死，且呈浓度依赖性变化。与模型组比较，鳖甲煎丸各剂量组lncRNA SNHG5、GSK-3
β
及
β
-catenin的表达均明显下降（
P
<
0.05，
P
<
0.01），miRNA-26a-5p的表达均明显升高（
P
<
0.05，
P
<
0.01）。与模型组比较，鳖甲煎丸各剂量组的关键蛋白GSK-3
β
及
β
-catenin表达均明显降低（
P
<
0.05，
P
<
0.01）。
结论
2
鳖甲煎丸可能通过lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3
β
信号轴，影响肝癌细胞坏死从而发挥抗肿瘤作用，该研究为鳖甲煎丸临床应用提供更多的理论依据。
Abstract
Objective
2
To investigate the mechanism of Biejiajian Wan in the intervention of primary liver cancer based on long non-coding RNA SNHG5 （lncRNA SNHG5）/micro RNA-26a-5p （miRNA-26a-5p）/glycogen synthase kinase-3
β
（GSK-3
β
） signal axis.
Method
2
Double luciferase reporting assay was used to verify the targeted interaction between lncRNA SNHG5 and miRNA-26a-5p， miRNA-26a-5p， and GSK-3
β
in HepG2 cells. Nude-mouse transplanted tumor model of human HepG2 were established and randomly divided into model group， Biejiajian Wan low-dose group （0.5 g·kg
-1
）， medium-dose group （1.0 g·kg
-1
）， and high-dose group （2.0 g·kg
-1
）， and sorafenib group （100 mg·kg
-1
）， with 10 mice in each group. The mice were given intragastric administration of normal saline or drug for 28 days， and the tumor volume was measured at different time. Hematoxylin-eosin （HE） staining was used to observe the histological changes of tumors. The nucleic acid levels of lncRNA SNHG5， miRNA-26a-5p， GSK-3
β
， and
β-
catenin mPNA in tumor tissue were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. The protein expression levels of GSK-3
β
and
β
-catenin in tumor tissue were detected by western blot.
Result
2
Compared with the SNHG5-WT （wild type） + miRNA NC （negative control） group， the relative luciferase activities of the SNHG5-WT + miRNA-26a-5p mimic group were decreased （
P
<
0.05）. Compared with the GSK-3
β
-WT + miRNA NC group， the relative luciferase activity of the GSK-3
β
-WT + miRNA-26a-5p mimic group was decreased （
P
<
0.05）. Compared with the model group， the tumor volume of Biejiajian Wan low-dose， medium-dose， and high-dose groups was significantly decreased （
P
<
0.05，
P
<
0.01）. Compared with the model group， the cells in the tumor tissue of nude mice in each dose group of Biejiajian Wan were sparsely arranged with necrocytosis， which showed concentration-dependent changes. Compared with the model group， the expression levels of lncRNA SNHG5， GSK-3
β
， and
β
-catenin were decreased （
P
<
0.05，
P
<
0.01）， while the expression of miRNA-26a-5p was increased in each dose group of Biejiajian Wan （
P
<
0.05，
P
<
0.01）. Compared with the model group， the protein expression levels of GSK-3
β
and
β
-catenin were decreased in each dose group of Biejiajian Wan （
P
<
0.05，
P
<
0.01）.
Conclusion
2
Biejiajian Wan may affect the necrosis of liver cancer cells through lncRNA SNHG5/miRNA-26a-5p/GSK-3
β
signal axis and thus play an anti-tumor role. This research will provide more theoretical basis for the clinical application of Biejiajian Wan.
关键词
Keywords
references
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