地骨皮的多重位点特异性PCR鉴别

石旸; 胡力; 赵玉洋; 蒋超; 金艳; 穆婧; 袁媛

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230816

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地骨皮的多重位点特异性PCR鉴别

中药核酸检测技术体系的应用专题 | 更新时间：2024-01-15

- 地骨皮的多重位点特异性PCR鉴别
- Identification of Original Plants of Lycii Cortex by Multiplex Allele-specific PCR
- 中国实验方剂学杂志 2024年30卷第4期页码：35-41
- 作者机构：
  
  中国中医科学院中药资源中心，北京 100700
- 作者简介：
  
  石旸，实习研究员，从事中药分子鉴定研究，E-mail：anna9605@126.com
  穆婧，副研究员，从事中药学研究，E-mail：nrc_cmm@126.com； *
  袁媛，研究员，博士生导师，从事中药鉴定与分子生药学研究，Tel：010-64087649，E-mail：y_yuan0732@163.com
- 基金信息：
  
  国家科技性基础资源调查专项(2018FY100800);中国中医科学院科技创新工程项目(C12021A041;C12021B014);国家中医药管理局青年岐黄学者项目
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230816
  中图分类号： R284.2;R289;R287;R22;R2-031;R33;R24
- 收稿：2023-04-27，
  
  网络出版：2023-07-11，
  
  纸质出版：2024-02-20
- 稿件说明：
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石旸,胡力,赵玉洋等.地骨皮的多重位点特异性PCR鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):35-41.

SHI Yang,HU Li,ZHAO Yuyang,et al.Identification of Original Plants of Lycii Cortex by Multiplex Allele-specific PCR[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):35-41.
石旸,胡力,赵玉洋等.地骨皮的多重位点特异性PCR鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):35-41. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230816.

SHI Yang,HU Li,ZHAO Yuyang,et al.Identification of Original Plants of Lycii Cortex by Multiplex Allele-specific PCR[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):35-41. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230816.

摘要

目的

使用多重位点特异性聚合酶链式反应（PCR）的方法，简单高效地鉴定地骨皮（Lycii Cortex）的2种基原植物枸杞（

Lycium chinense

）和宁夏枸杞（

L. barbarum

）。

方法

在使用植物叶绿体基因组数据库（CGIR）获取枸杞和宁夏枸杞叶绿体基因组序列的基础上，利用IdenDSS软件筛选出两基原间特定的单核苷酸多态性（SNP）位点，并利用Primer 5.0软件设计获得特异性鉴别引物，包括鉴别枸杞的引物GQ-F/R、鉴别宁夏枸杞的引物NX-F/R。对引物浓度比、退火温度、循环次数、

Taq

酶进行优化，形成最适的PCR鉴别体系和条件，并对采集自不同地区的地骨皮进行适用性考察。

结果

对影响PCR结果的各个条件进行考察优化后，最终确定枸杞和宁夏枸杞的引物浓度比为2∶1、退火温度为59 ℃、循环次数为30次时，来自不同产区地骨皮的2个基原枸杞和宁夏枸杞分别在183、295 bp的位置出现特异性鉴别条带。

结论

通过一次PCR即可方便、快捷、高效地鉴定地骨皮的基原，为枸杞和宁夏枸杞的专属性鉴别提供新方法，同时对含有地骨皮成分的经典名方的研发提供一定的技术支撑。

Abstract

Objective

To identify

Lycium chinense

and

L. barbarum

as the original plants of Lycii Cortex simply and efficiently by multiple allele-specific polymerase chain reaction （PCR）.

Method

The chloroplast genome sequences of

L. chinense

and

L. barbarum

were downloaded from the Chloroplast Genome Information Resource （CGIR）， and then IdenDSS was employed to screen out the specific single nucleotide polymorphism （SNP） sites between the two plants. Primer 5.0 was used to design the specific primers， including primers GQ-F/R for identifying

L. chinense

and primers NX-F/R for identifying

L. barbarum.

Furthermore， the primer concentration ratio， annealing temperature， cycles， and

Taq

enzyme were optimized to establish the optimal PCR system and conditions for plant identification. Finally， the applicability of the established method was examined with the plant samples collected from different regions.

Result

The PCR with GQ-F/R∶NX-F/R concentration ratio of 2∶1 at the annealing temperature at 59 ℃ and for 30 cycles showed specific bands at 183 bp and 295 bp， respectively， for

L. chinense

and

L. barbarum

samples from different regions.

Conclusion

The established PCR approach can simply， rapidly， and efficiently identify the original plants of Lycii Cortex， serving as a new method for the discrimination between

L. chinense

and

L. barbarum

. Moreover， the method provides technical support for the research and development of classic famous prescriptions containing Lycii Cortex.

关键词

Keywords

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