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基于
β -arrestin1沉默探讨益肾达络饮对EAE小鼠Rho/ROCK信号通路的影响Effect of Yishen Daluo Prescription on Rho/ROCK Signaling Pathway in EAE Mice Based on Silencing of
β -arrestin1- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第10期 页码：110-116
- 作者机构：
长春中医药大学，长春 130117
- 作者简介：
丁文婧，在读硕士，从事《内经》病因病机理论的研究，E-mail：dingwenjing1988@sina.com
尚晓玲，博士，教授，博士生导师，从事中医药治疗神经免疫疾病的研究，Tel：0431-86172310，E-mail：xiaolingshang@sina.com
- 基金信息：国家自然科学基金项目(81873216)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231090
中图分类号： R242;R2-0;R2-031;R593;R24;R285收稿日期：2022-01-12，
网络出版日期：2022-05-16，
纸质出版日期：2023-05-20
- 稿件说明：
移动端阅览
丁文婧,王忠敏,任嘉彦等.基于β-arrestin1沉默探讨益肾达络饮对EAE小鼠Rho/ROCK信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(10):110-116.
DING Wenjing,WANG Zhongmin,REN Jiayan,et al.Effect of Yishen Daluo Prescription on Rho/ROCK Signaling Pathway in EAE Mice Based on Silencing of β-arrestin1[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(10):110-116.
丁文婧,王忠敏,任嘉彦等.基于β-arrestin1沉默探讨益肾达络饮对EAE小鼠Rho/ROCK信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(10):110-116. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231090.
DING Wenjing,WANG Zhongmin,REN Jiayan,et al.Effect of Yishen Daluo Prescription on Rho/ROCK Signaling Pathway in EAE Mice Based on Silencing of β-arrestin1[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(10):110-116. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231090.
摘要
目的
2
基于
β
-抑制蛋白（
β
-arrestin1）基因沉默，研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠Ras同源基因家族蛋白（Rho）/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）信号通路的影响。
方法
2
60只C57BL/6雌性小鼠随机平均分为空白组、模型组、病毒组、益肾达络饮组（中药组）、病毒加益肾达络饮组（病毒加中药组）、醋酸泼尼松组（激素组）6组。除空白组外，每只小鼠均制备EAE模型，于免疫第4天病毒组、病毒加中药组每只小鼠尾静脉注射腺相关病毒（AAV）病毒溶液150 μL（1×10
11
vg·mL
-1
）。造模的第8天给药，空白组、模型组、病毒组给予生理盐水10 mL∙kg
-1
，激素组给予醋酸泼尼松混悬液（3.9 g∙kg
-1
），其他组给予益肾达络饮（20 g∙kg
-1
），连续给药14 d并每日进行称重评分。免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分；苏木素-伊红（HE）染色测定小鼠脑组织、脊髓组织的炎症反应和病变位置；蛋白免疫印迹法（Western blot）测定EAE小鼠脊髓组织及脑组织中
β
-arrestin1、RhoA、ROCKⅠ的蛋白表达。
结果
2
与模型组比较，病毒组、病毒加中药组的神经功能评分显著降低（
P
<
0.01），中药组明显降低（
P
<
0.05）。HE结果显示，模型组中枢神经系统（CNS）存在明显炎症反应，其他各组与模型组比较均有不同程度的减轻。Western blot结果显示，与空白组比较，模型组小鼠脊髓组织中
β
-arrestin1、RhoA及ROCKⅠ蛋白表达水平显著升高（
P
<
0.01）。与模型组比较，病毒组、中药组、病毒加中药组、激素组小鼠脊髓组织中
β
-arrestin1、RhoA及ROCKⅠ蛋白表达水平显著降低（
P
<
0.01）。与空白组比较，模型组小鼠脑组织中
β
-arrestin1、RhoA、ROCKⅠ蛋白表达水平均显著升高（
P
<
0.01）。与模型组比较，病毒组、中药组、病毒加中药组、激素组小鼠脑组织中
β
-arrestin1蛋白表达水平均显著降低（
P
<
0.01）；病毒组、中药组小鼠脑组织中RhoA、ROCKⅠ蛋白表达水平均明显降低（
P
<
0.05）；病毒加中药组和激素组小鼠脑组织中RhoA、ROCKⅠ蛋白表达水平均显著降低（
P
<
0.01）。
结论
2
益肾达络饮可以改善EAE小鼠的临床症状，改善CNS的炎症反应，其机制可能为益肾达络饮抑制CNS中
β
-arrestin1的表达，从而降低Rho/ROCK信号通路中RhoA、ROCKⅠ蛋白的表达，并且益肾达络饮与抑制
β
-arrestin1的基因表达可能存在协同效果。
Abstract
Objective
2
To investigate the effects of Yishen Daluo prescription （YSDL） on Ras homolog（Rho）/Rho-associated coiled-coil containing protein kinase（ROCK）signaling pathway in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis （EAE） based on the silencing of
β
-arrestin1 gene.
Method
2
Sixty C57BL/6 female mice were randomly divided into a blank group， a model group， a virus group， a YSDL group， a virus + YSDL group， and a prednisone acetate group （hormone group）. The EAE model was induced in mice except for those in the normal group. Adeno-associated virus（AAV）solution （150 μL， 1×10
11
vg·mL
-1
） was injected into the tail vein of each mouse in the virus group and the virus + YSDL group on the 4
th
day of immunization. Drugs were administered on the 8
th
day of modeling. Specifically， normal saline was given to the mice in the normal group，the model group，and the virus group at 10 mL∙kg
-1
， prednisone acetate suspension to those in the hormone group at 3.9 g∙kg
-1
，and YSDL to those in other groups at 20 g∙kg
-1
for 14 consecutive days. The mice were weighed and scored every day. The neurological function scores of mice in each group were recorded every day after immunization. Hematoxylin-eosin （HE） staining was used to determine the inflammatory response and lesion location in the brain tissues and spinal cord tissues of mice. The protein expression of
β
-arrestin1，Ras homolog gene family member A（RhoA）， and Rho-associated coiled-coil forming protein kinase Ⅰ（ROCK Ⅰ） in spinal cord and brain tissues of EAE mice was determined by Western blot.
Result
2
Compared with the model group， the virus group and the virus + YSDL group showed decreased neurological function scores （
P
<
0.01），and the YSDL group also showed decreased neurological function scores（
P
<
0.05）. HE results showed that there was obvious inflammatory reaction in the central nervous system （CNS） of the model group， which was alleviated to varying degrees in other groups compared with the model group. Western blot results showed that compared with the blank group， the model group showed increased protein expression levels of
β
-arrestin1， RhoA， and ROCK Ⅰ in the spinal cord tissues （
P
<
0.01）. Compared with the model group， the virus group， the YSDL group， the virus + YSDL group， and the hormone group showed decreased protein expression levels of
β-
arrestin1， RhoA， and ROCKⅠ in the spinal cord tissues （
P
<
0.01）. Compared with the blank group， the model group showed increased protein expression levels of
β
-arrestin1， RhoA， and ROCK Ⅰ in the brain tissues （
P
<
0.01）. Compared with the model group， the virus group， the YSDL group， the virus + YSDL group， and the hormone group showed decreased protein expression level of
β-
arrestin1 in the brain tissues （
P
<
0.01）， and the virus group and the YSDL group showed decreased protein expression levels of RhoA， and ROCKⅠ in the brain tissues （
P
<
0.05）. Additionally， the virus + YSDL group and the hormone group showed decreased protein expression levels of RhoA and ROCKⅠ in the brain tissues （
P
<
0.01）.
Conclusion
2
YSDL can improve the clinical symptoms of EAE mice and improve the inflammatory response of CNS. The mechanism is presumably attributed to the fact that YSDL inhibits the expression of
β
-arrestin1 in CNS，thereby reducing the expression of Rho/ROCK signaling pathway. Furthermore， YSDL may have a synergistic effect with the inhibition of
β
-arrestin1 gene expression.
关键词
Keywords
references
徐文 ， 王国平 . 多发性硬化的诊断与治疗 ［J］. 中华全科医学 ， 2019 ， 17 （ 9 ）： 1437 - 1438 .
尚晓玲 . 益肾达络饮治疗多发性硬化的神经免疫机制研究 ［D］. 北京 ： 北京中医药大学 ， 2006 .
BROWNLEE W J ， HARDY T A ， FAZEKAS F ， et al . Diagnosis of multiple sclerosis：Progress and challenges ［J］. Lancet ， 2017 ， 389 （ 10076 ）： 1336 - 1346 .
SUTTON R B ， VISHNIVETSKIY S A ， ROBERT J ， et al . Crystal structure of cone arrestin at 2.3A：Evolution of receptor specificity ［J］. J Mol Biol ， 2005 ， 354 （ 5 ）： 1069 - 1080 .
施裕丰 . β -Arrestin1的核内功能：通过影响表观遗传修饰调节基因转录及其在自身免疫中的作用 ［D］. 上海 ： 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） ， 2007 .
KE P ， SHAO B Z ， XU Z Q ， et al . Activating α 7 nicotinic acetylcholine receptor inhibits NLRP3 inflammasome through regulation of β -arrestin-1 ［J］. CNS Neurosci Ther ， 2017 ， 23 （ 11 ）： 875 - 884 .
REITER E ， AHN S ， SHUKLA A K ， et al . Molecular mechanism of β -arrestin-biased agonism at seven-transmembrane receptors ［J］. Annu Rev Pharmacol Toxicol ， 2012 ， 52 ： 179 - 197 .
ANTHONY D F ， SIN Y Y ， VADREVU S ， et al . β -arrestin1 inhibits the GTPase-activating protein function of ARHGAP21，promoting activation of RhoA following angiotensin Ⅱ type 1A receptor stimulation ［J］. Mol Cell Biol ， 2011 ， 31 （ 5 ）： 1066 - 1075 .
CLEGHORN W M ， BULUS N ， KOOK S ， et al . Non-visual arrestins regulate the focal adhesion formation via small GTPases RhoA and Rac1 independently of GPCRs ［J］. Cell Signal ， 2018 ， 42 ： 259 - 269 .
MITTAL N ， ROBERTS K ， PAL K ， et al . Select G-protein-coupled receptors modulate agonist-induced signaling via a ROCK，LIMK，and β -arrestin1 pathway ［J］. Cell Rep ， 2013 ， 5 （ 4 ）： 1010 - 1021 .
韩佳寅 ， 易艳 ， 梁爱华 ， 等 . Rho/ROCK信号通路研究进展 ［J］. 药学学报 ， 2016 ， 51 （ 6 ）： 853 - 859 .
刘颖 . Rho-ROCK信号通路研究进展 ［J］. 中国儿童保健杂志 ， 2012 ， 20 （ 9 ）： 822 - 825 .
孙哲 ， 郭力 ， 孔鹏 . 多发性硬化及EAE动物模型相关信号通路研究进展 ［J］. 中国神经免疫学和神经病学杂志 ， 2016 ， 23 （ 1 ）： 58 - 62 .
段惠洁 ， 刘金泉 ， 郭敏芳 ， 等 . 盐酸法舒地尔对EAE小鼠脑中ROCK-Ⅱ表达的影响 ［J］. 医学信息：中旬刊 ， 2010 ， 5 （ 5 ）： 1043 - 1044 .
朱文浩 ， 高颖 ， 刘璐 . 益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠细胞外信号调剂激酶1/2通路的影响 ［J］. 中华中医药杂志 ， 2016 ， 31 （ 2 ）： 704 - 707 .
王响 . 益肾解毒通络法对EAE小鼠神经保护作用及影响组蛋白H3表达的机制研究 ［D］. 长春 ： 长春中医药大学 ， 2020 .
关东升 ， 赵晨怡 ， 孟毅 ， 等 . 益肾达络饮对EAE小鼠JAK/STAT信号传导通路的影响 ［J］. 时珍国医国药 ， 2018 ， 29 （ 7 ）： 1600 - 1603 .
潘雨 . 基于 β -arrestin1探究益肾解毒通络法对EAE小鼠CAMP-PKA-CREB信号通路的影响 ［D］. 长春 ： 长春中医药大学 ， 2021 .
朱文浩 ， 刘璐 ， 董兴鲁 ， 等 . 益肾达络饮对EAE小鼠小胶质细胞活化的影响 ［J］. 世界科学技术—中医药现代化 ， 2015 ， 17 （ 1 ）： 77 - 82 .
ZHU W H ， GAO Y ， LOU LI X ， et al . Effect of Yishen Daluo decoction on the expression of PLP，Olig1，and Olig2 in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis ［J］. World J Integr Tradit West Med ， 2014 ，34（ 5 ） 562 - 565 .
GUAN D S ， LI Y X ， PENG X ， et al . Yishendaluo decoction attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis by modulating CXCR4 signaling ［J］. Int J Clin Exp Med ， 2017 ， 10 （ 9 ）： 13534 - 13541 .
WEAVER A ， GONCALVES DA SILVA A ， NUTTALL R K ， et al . An elevated matrix metalloproteinase （MMP） in an animal model of multiple sclerosis is protective by affecting Th1/Th2 polarization ［J］. FASEB J ， 2005 ， 19 （ 12 ）： 1668 - 1670 .
朱文浩 ， 刘璐 ， 高颖 . 益肾达络饮对EAE小鼠p-JNK1/ 2 ， JNK1 /2，COX-2的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2015， 21 （ 17 ）： 101 - 105 .
尚晓玲 ， 张家颖 ， 公培刚 ， 等 . 益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠CREB、P-CREB表达的影响 ［J］. 中国老年学杂志 ， 2015 ， 35 （ 23 ）： 6677 - 6679 .
尚晓玲 ， 高颖 . 关于多发性硬化病因病机的理论探讨 ［J］. 中国中医基础医学杂志 ， 2006 ， 12 （ 6 ）： 414 - 415 .
孙哲 ， 郭力 ， 孔鹏 . 多发性硬化及EAE动物模型相关信号通路研究进展 ［J］. 中国神经免疫学和神经病学杂志 ， 2016 ， 23 （ 1 ）： 58 - 62 .
丘玥 ， 魏敏 ， 王之遥 ， 等 . RhoA／Rho激酶信号通路在慢性疼痛中的作用 ［J］. 协和医学杂志 ， 2016 ， 7 （ 6 ）： 454 - 457 .
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