蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别

罗丽; 胡力; 蒋超; 陈梓媛; 李晓琳; 袁媛

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20231211

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蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别

中药核酸检测技术体系的应用专题 | 更新时间：2024-01-15

- 蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别
- Specific PCR for Identification of Astragalus membranaceus var. mongholicus Seeds， A. membranaceus Seeds， and Adulterants
- 中国实验方剂学杂志 2024年30卷第4期页码：21-28
- 作者机构：
  
  1.广东药科大学中药学院，广州 510006
  2.安徽中医药大学药学院，合肥 230012
  3.中国中医科学院中药资源中心道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室，北京 100700
- 作者简介：
  
  罗丽，在读硕士，从事中药资源与鉴定研究，E-mail：luoli990322@126.com
  袁媛，研究员，博士生导师，从事中药鉴定与分子生药学研究，Tel：010-64087649，E-mail：y_yuan0732@163.com
- 基金信息：
  
  国家重点研发计划项目(2020YFE0205100);中国中医科学院科技创新工程重大攻关项目(C12021A041);国家科技性基础资源调查专项(2018FY100800);青年岐黄学者项目
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231211
  中图分类号： R284.2;R285;R289;R287;R22;R2-031;R33;R24
- 收稿：2023-06-30，
  
  网络出版：2023-09-20，
  
  纸质出版：2024-02-20
- 稿件说明：
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罗丽,胡力,蒋超等.蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):21-28.

LUO Li,HU Li,JIANG Chao,et al.Specific PCR for Identification of Astragalus membranaceus var. mongholicus Seeds，A. membranaceus Seeds， andAdulterants[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):21-28.
罗丽,胡力,蒋超等.蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):21-28. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231211.

LUO Li,HU Li,JIANG Chao,et al.Specific PCR for Identification of Astragalus membranaceus var. mongholicus Seeds，A. membranaceus Seeds， andAdulterants[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):21-28. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231211.

摘要

目的

基于特异性聚合酶链式反应（PCR）建立一种可以准确、快速鉴别蒙古黄芪、膜荚黄芪种子的方法。

方法

利用叶绿体基因组综合数据库（CGIR）及IdenDSS软件分别获取蒙古黄芪、膜荚黄芪的DNA特征片段，在此基础上筛选获得蒙古黄芪与膜荚黄芪的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据该位点设计蒙古黄芪特异性鉴别引物对MG-F/MG-R和膜荚黄芪特异性鉴别引物对MJ-F/MJ-R。分别建立蒙古黄芪和膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，优化PCR反应体系，并对该方法的专属性和适用性进行考察。

结果

蒙古黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MG-F/MG-R、退火温度62 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后蒙古黄芪在约220 bp处得到特异性条带，而膜荚黄芪和其他混伪品种子无条带；膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MJ-F/MJ-R、退火温度58 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后膜荚黄芪扩增得到约150 bp的条带，而蒙古黄芪及混伪品无扩增产物。

结论

该研究建立的特异性PCR鉴别方法，可以准确、快速对蒙古黄芪、膜荚黄芪进行种源鉴别，为黄芪种子的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据。

Abstract

Objective

To establish a method based on specific polymerase chain reaction （PCR） that can accurately and rapidly identify

Astragalus membranaceus

var.

mongholicus

（AMM） seeds and

A. membranaceus

（AM） seeds.

Method

The Chloroplast Genome Information Resource （CGIR） and IdenDSS were used to obtain the characteristic DNA fragments of AMM

and AM， and the specific single nucleotide polymorphism （SNP） sites of AMM and AM were screened out， on the basis of which the specific primers MG-F/MG-R of AMM and MJ-F/MJ-R of AM

were designed. The specific PCR method for identifying AMM and AM was established and optimized， and the specificity and applicability of the method were investigated.

Result

The specific PCR conditions for the identification of AMM were primers MG-F/MG-R， annealing at 62 ℃， and 28 cycles. After PCR amplification and gel electrophoresis， the specific band appeared at about 220 bp， with no band for the seeds of AM or adulterants. The specific PCR conditions for identifying the AM were primers MJ-F/MJ-R， annealing at 58 ℃， and 28 cycles. After PCR amplification and gel electrophoresis， the band appeared at about 150 bp， with no band of AMM or adulterants.

Conclusion

The specific PCR method established in this study can accurately and quickly identify the seeds of AMM and AM， which provides a basis for the classification and accurate identification of

Astragalus

seeds and adulterants.

关键词

Keywords

references

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