没药倍半萜化合物M36抑制人肝癌细胞生长的作用

刘东晓; 刘亚鑫; 黄惠铭; 欧阳里山; 王超超; 谢锦欣; 王龙燕; 魏雪娇; 谭鹏; 屠鹏飞; 李军; 胡仲冬

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20231423

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没药倍半萜化合物M36抑制人肝癌细胞生长的作用

药理 | 更新时间：2024-02-28

- 没药倍半萜化合物M36抑制人肝癌细胞生长的作用
- Inhibitory Effect of Sesquiterpenoid M36 from Myrrha on Growth of Human Hepatoma Cells
- 中国实验方剂学杂志 2024年30卷第5期页码：80-87
- 作者机构：
  
  北京中医药大学北京中医药研究院中药现代研究中心，北京 100029
- 作者简介：
  
  刘东晓，硕士，从事中药活性成分抗肿瘤作用研究，E-mail： liudongxiao1998@163.com
  李军，研究员，从事中药药效物质、作用机制和质量评价研究，E-mail： drlj666@163.com
  胡仲冬，研究员，从事中药活性成分抗肿瘤作用研究，E-mail： huzhongdong@126.com；
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(82074072;81873044);北京市科技新星计划项目(Z191100001119083);国家中医药管理局青年岐黄学者支持项目;泉州市科技计划项目(2021N003S)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231423
  中图分类号： R2-0;R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿：2023-03-28，
  
  网络出版：2023-06-13，
  
  纸质出版：2024-03-05
- 稿件说明：
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刘东晓,刘亚鑫,黄惠铭等.没药倍半萜化合物M36抑制人肝癌细胞生长的作用[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(05):80-87.

LIU Dongxiao,LIU Yaxin,HUANG Huiming,et al.Inhibitory Effect of Sesquiterpenoid M36 from Myrrhaon Growth of Human Hepatoma Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(05):80-87.
刘东晓,刘亚鑫,黄惠铭等.没药倍半萜化合物M36抑制人肝癌细胞生长的作用[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(05):80-87. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231423.

LIU Dongxiao,LIU Yaxin,HUANG Huiming,et al.Inhibitory Effect of Sesquiterpenoid M36 from Myrrhaon Growth of Human Hepatoma Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(05):80-87. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231423.

摘要

目的

针对从没药Myrrha中分离得到的倍半萜化合物M36对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤活性开展观察和研究。

方法

分别加入不同浓度M36（0、2、4、6、8、10 μmol·L

-1

）干预HepG2细胞。首先采用噻唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验、EdU增殖实验来检测M36对人肝癌HepG2细胞的增殖影响。再利用Hoechst染色、流式细胞术和蛋白免疫印迹法研究M36对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响。通过采用吖啶橙染色和蛋白免疫印迹法检测M36是否激活人肝癌HepG2细胞发生自噬。最后借助蛋白免疫印迹法来检测相关通路的蛋白表达水平。

结果

与空白组比较，M36能显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖（

0.01），给药处理48 h的半数抑制浓度（IC

）为5.03 μmol·L

-1

，且具有浓度和时间依赖性。M36还能够诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和自噬。8 μmol·L

-1

M36作用于HepG2细胞48 h，其细胞凋亡率为（42.03±9.65）%（

0.01）。与空白组比较，M36组（4、8 μmol·L

-1

）HepG2细胞孵育48 h，剪切的聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（cleaved-PARP）蛋白水平显著上调（

0.01）。吖啶橙染色结果显示，与空白组比较，M36组（4、8 μmol·L

-1

）HepG2细胞孵育48 h自噬被显著激活（

0.01），并从微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ（LC3 Ⅱ）蛋白水平上调中得到进一步验证（

0.01）。蛋白免疫印迹实验结果显示，与空白组比较，M36组磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）及其下游核转录因子c-Jun、p-c-Jun蛋白水平均发生明显上调（

0.05，

0.01），说明其作用机制可能与上调MAPK信号通路有关。

结论

没药倍半萜化合物M36能够抑制人肝癌细胞增殖，促进其凋亡和自噬，其机制可能与激活MAPK信号通路有关。

Abstract

Objective

The antitumor activity of sesquiterpenoid M36 isolated from Myrrha against human hepatoma HepG2 cells was investigated in this study.

Method

HepG2 cells were treated with M36 at different concentrations （0， 2， 4， 6， 8， 10 μmol·L

-1

）. Firstly， the effects of M36 on the proliferation of human hepatoma HepG2 cells were detected by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT）， colony formation assay， and EdU proliferation assay. Hoechst staining， flow cytometry analysis， and Western blot were used to explore the effect of M36 on the apoptosis of human hepatoma HepG2 cells. Acridine orange staining and western blotting were used to examine the effect of M36 on autophagy in HepG2 cells. Finally， Western blot was used to detect protein expression of cancer-related signaling pathways.

Result

Compared with the blank group， M36 treatment significantly inhibited the proliferation of human hepatoma HepG2 cells （

0.01）， and the half inhibitory concentration （IC

） value of M36 for 48 h was 5.03 μmol·L

-1

， in a dose- and time-dependent manner. M36 was also able to induce apoptosis and autophagy in human hepatoma HepG2 cells. After treatment with 8 μmol·L

-1

M36 for 48 hours， the apoptosis rate of HepG2 cells was （42.03±9.65）% （

0.01）. Compared with the blank group， HepG2 cells treated with 4 and 8 μmol·L

-1

M36 for 48 h had a significant increase in cleaved poly ADP-ribose polymerase （cleaved-PARP） protein levels （

0.01）. Acridine orange staining showed that autophagy was significantly activated in HepG2 cells treated with 4 and 8 μmol·L

-1

M36 for 48 h compared with the blank group （

0.01）， which was further verified by the up-regulation of microtubule-associated protein 1 light chain 3 Ⅱ （LC3 Ⅱ）. Western blot results showed that compared with the blank group， the levels of phosphorylated extracellular regulated protein kinase （p-ERK）， phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase （p-p38 MAPK）， phosphorylated c-Jun N-terminal kinase （p-JNK）， and its downstream nuclear transcription factors c-Jun and p-c-Jun protein were significantly increased in M36 group （

0.05，

0.01）. The mechanism may be related to the up-regulation of MAPK signaling pathway.

Conclusion

The sesquiterpenoid M36 isolated from Myrrha inhibits the proliferation of human hepatoma HepG2 cells and promotes apoptosis and autophagy， which may be related to the activation of the MAPK signaling pathway.

关键词

Keywords

references

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