香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别

刁晓微; 刘亚男; 金艳; 蒋超; 赵玉洋; 袁媛

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20231716

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香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别

中药核酸检测技术体系的应用专题 | 更新时间：2024-01-15

- 香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别
  增强出版
- PCR-RFLP for Distinguishing Periplocae Cortex from Acanthopanacis Cortex and Lycii Cortex
- 中国实验方剂学杂志 2024年30卷第4期页码：42-47
- 作者机构：
  
  1.安徽中医药大学药学院，合肥 230012
  2.中国中医科学院中药资源中心，北京 100700
- 作者简介：
  
  刁晓微，在读硕士，从事中药资源与鉴定学研究，E-mail：17852625983@163.com
  金艳，副研究员，从事中药鉴定工作，E-mail：jy20047@163.com
  袁媛，研究员，博士生导师，从事中药鉴定与分子生药学研究，Tel：010-64087649，E-mail：y_yuan0732@163.com； *
- 基金信息：
  
  国家科技性基础资源调查专项(2018FY100800);中国中医科学院科技创新工程重大攻关项目(C12021A041;CI2021B014);青年岐黄学者项目;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ZZXT202217)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231716
  中图分类号： R284.2;R289;R287;R22;R2-031;R33;R24
- 收稿：2023-07-16，
  
  网络出版：2023-12-13，
  
  纸质出版：2024-02-20
- 稿件说明：
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刁晓微,刘亚男,金艳等.香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):42-47.

DIAO Xiaowei,LIU Yanan,JIN Yan,et al.PCR-RFLP for Distinguishing Periplocae Cortex from Acanthopanacis Cortexand Lycii Cortex[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):42-47.
刁晓微,刘亚男,金艳等.香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):42-47. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231716.

DIAO Xiaowei,LIU Yanan,JIN Yan,et al.PCR-RFLP for Distinguishing Periplocae Cortex from Acanthopanacis Cortexand Lycii Cortex[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):42-47. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231716.

摘要

目的

建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法快速鉴别香加皮与其混淆品五加皮、地骨皮，避免因基原混乱影响用药安全。

方法

从CGIR数据库获取的香加皮DSS标记序列，对香加皮DSS序列进行酶切位点分析，筛选香加皮与五加皮、地骨皮间差异位点，选择香加皮的特异性酶切位点

Cla

I，设计PCR-RFLP反应引物，对影响PCR-RFLP反应的退火温度、循环数、

Taq

酶、不同型号PCR仪、酶切时间等条件进行考察。利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对不同产地香加皮与五加皮、地骨皮进行适用性考察。

结果

在退火温度59 ℃、循环数为40个时，香加皮与五加皮、地骨皮样品经过特异性引物进行PCR扩增后，可出现清晰明亮的片段，酶切时间30 min，香加皮药材及其基原物种均可产生约140 bp和290 bp的目的片段，而2种混淆品五加皮和地骨皮药材及其基原物种只在250~500 bp有一条约430 bp的目的片段。该方法能对香加皮及其混淆品五加皮、地骨皮进行准确鉴别。

结论

建立了香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别方法，稳定性好、灵敏度高、适用性好，为香加皮与五加皮、地骨皮的质量控制提供参考。

Abstract

Objective

To establish a polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） method for rapid distinguishing Periplocae Cortex

from Acanthopanacis Cortex

and Lycii Cortex， so as to avoid the influence of genetic confusion on drug safety.

Method

The DSS-tagged sequences of Periplocae Cortex were obtained from the Chloroplast Genome Information Resource （CGIR） and analyzed to find the enzymatic cleavage sites that were different from those of Acanthopanacis Cortex and Lycii Cortex. The specific enzymatic cleavage site，

Cla

I， of Periplocae Cortex was selected， on the basis of which the primers for PCR-RFLP were designed. Furthermore， the factors such as annealing temperature， number of cycles，

Taq

enzyme， PCR instruments， and enzymatic treatment time that may influence PCR-RFLP were studied. The established PCR-RFLP method was applied to the identification of Periplocae Cortex， Acanthopanacis Cortex， and Lycii Cortex samples produced in different regions.

Result

The PCR-RFLP at the annealing temperature of 59 ℃ and with 40 cycles showed clear bands of the samples. When the enzyme digestion time was 30 min. The reaction produced the target bands at about 140 bp and 290 bp for both Periplocae Cortex and its original plant and only a band at about 430 bp for Acanthopanacis Cortex， Lycii Cortex， and their original plants. The method can accurately distinguish Periplocae Cortex from its confounders Acanthopanacis Cortex and Lycii Cortex.

Conclusion

The PCR-RFLP method for distinguishing Periplocae Cortex from Acanthopanacis Cortex and Lycii Cortex was established. It has high stability， sensitivity， and applicability， providing a reference for the quality control of Periplocae Cortex， Acanthopanacis Cortex， and Lycii Cortex.

关键词

Keywords

references

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