基于p38 MAPK/NF-<italic style="font-style: italic">κ</italic>B信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

韦春昕; 胡亦明; 黄仕琦; 谭国伟; 安耀荣

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20232037

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

经典名方 | 更新时间：2024-01-15

- 基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制
- Chaihu Longgu Mulitang Relieves Generalized Anxiety Disorder in Rats via p38 MAPK/NF-κB Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2024年30卷第4期页码：114-123
- 作者机构：
  
  甘肃中医药大学甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室，兰州 730000
- 作者简介：
  
  韦春昕，在读硕士，从事方剂配伍规律及复方配伍的优化研究，E-mail：529193002@qq.com
  安耀荣，硕士，教授，从事方剂配伍规律及复方配伍的优化研究，E-mail：anyr@gszy.edu.cn
- 基金信息：
  
  甘肃省自然科学基金项目(22JR11RA121);甘肃中医药大学岐黄英才导师专项基金项目(3016190124)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20232037
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R749.7+2;Q983+.5
- 纸质出版日期：2024-02-20，
  
  网络出版日期：2023-12-14，
  
  收稿日期：2023-05-29，
- 稿件说明：
移动端阅览
韦春昕,胡亦明,黄仕琦等.基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):114-123.

WEI Chunxin,HU Yiming,HUANG Shiqi,et al.Chaihu Longgu Mulitang Relieves Generalized Anxiety Disorder in Rats via p38 MAPK/NF-κB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):114-123.
韦春昕,胡亦明,黄仕琦等.基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(04):114-123. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20232037.

WEI Chunxin,HU Yiming,HUANG Shiqi,et al.Chaihu Longgu Mulitang Relieves Generalized Anxiety Disorder in Rats via p38 MAPK/NF-κB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(04):114-123. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20232037.

摘要

目的

研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-

B（p38 MAPK/NF-

B）信号通路抑制广泛性焦虑（GAD）大鼠下丘脑区炎症反应，改善GAD大鼠的焦虑样行为，缓解GAD大鼠的焦虑症状。

方法

74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组，剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠，造模14 d后进行旷场实验（OFT）和高架十字迷宫实验（PMT）检测各组大鼠焦虑样行为，筛选造模成功的大鼠60只，随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组（6、12、24 g·kg

-1

）和地西泮组（1 mg·kg

-1

），每组12只，连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮，给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-

（TNF-

α）

、白细胞介素IL-6（IL-6）、白细胞介素-1

（IL-1

β）

水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测p38 MAPK、NF-

B p65、NF-

B抑制因子

（I

）、钙结合蛋白（Iba-1）mRNA的水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化（p）-p38 MAPK、NF-

B p65、p-NF-

B p65、I

蛋白的表达水平；免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。

结果

与空白组比较，模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏，OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加（

0.01），PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少（

0.01），下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高（

0.01），血清和下丘脑中IL-1

、IL-6、TNF-

显著增多（

0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-

B p65、p-p38 MAPK、p-NF-

B p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高（

0.05，

0.01），I

蛋白及mRNA表达显著减低（

0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常，OFT边缘运动距离和时间明显减少（

0.05，

0.01），PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加（

0.05，

0.01），下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低（

0.05，

0.01），血清和下丘脑组织中IL-1

、IL-6、TNF-

明显降低（

0.05，

0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-

B p65、p-p38 MAPK、p-NF-

B p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低（

0.05，

0.01），I

蛋白及mRNA表达明显升高（

0.05，

0.01）。

结论

柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-

B信号通路，降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平，发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。

Abstract

Objective

To study whether Chaihu Longgu Mulitang can inhibit hypothalamic inflammation， mitigate anxiety-like behavior， and alleviate anxiety symptoms by regulating the p38 mitogen-activated protein kinase/nuclear factor-

B （p38 MAPK/NF-

B） signaling pathway in the rat model of generalized anxiety disorder （GAD）.

Method

Twelve out of 74 Wistar rats were randomly selected as the blank group， and the remaining rats were subjected to chronic restraint stress for the modeling of GAD. The open field test （OFT） and elevated Porteus maze test （PMT） were conducted 14 days after modeling to detect the anxiety-like behaviors. Sixty successfully modeled rats were selected and randomized into model， low-， medium-， and high-dose （6， 12， and 24 g·kg

-1

， respectively） Chaihu Longgu Mulitang， and diazepam （1 mg·kg

-1

） groups （

=12） and administrated with corresponding drugs for 14 consecutive days. OFT and PMT were then carried out to examine the anxiety-like behaviors of the rats. The levels of tumor necrosis factor-

（TNF-

）， interleukin-6 （IL-6）， and interleukin-1

（IL-1

） in the hypothalamus and serum of rats were determined by the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）was conducted to determine the mRNA levels of p38 MAPK， NF-

B p65， nuclear factor

B inhibitor

（I

）， and ionized calcium binding adaptor molecule 1 （Iba-1）. The protein levels of p38 MAPK， phosphorylated （p）-p38 MAPK， NF-

B p65， p-NF-

B p65， and I

in the hypothalamus of rats were determined by Western blot. The expression of Iba-1 in the hypothalamic microglia was detected by immunofluorescence assay.

Result

Compared with the blank group， the model group had decreased body weight， scattered dark yellow fur， increased irritability， and preference to hibernation in the corner. In addition， the modeled rats showed increased edge movement distance and time in OFT （

0.01） and decreased movement distance and time and the number of entries in the open arm in PMT （

0.01）. The modeling increased the fluorescence intensity of Iba-1 in paraventricular nucleus of hypothalamus （

0.01）， elevated the levels of IL-1

， IL-6， and TNF-

in the serum and hypothalamus （

0.01）， up-regulated the protein and mRNA levels of p38 MAPK， NF-

B p65， p-p38 MAPK， p-NF-

B p65， and Iba-1 （

0.05，

0.01）， and down-regulated the protein and mRNA levels of I

（

0.01） in the hypothalamus. Compared with the model group， medium- and high-dose Chaihu Longgu Mulitang and diazepam increased the body weight， improved the fur and behaviors， decreased the edge movement distance and time in OFT （

0.05，

0.01）， and increased the movement distance and time in the open arm in PMT （

0.05，

0.01）. Furthermore， they decreased the fluorescence intensity of Iba-1 in hypothalamic microglia （

0.05，

0.01）， lowered the levels of IL-1

， IL-6， and TNF-

in the serum and hypothalamic tissue （

0.05，

0.01）， down-regulated the mRNA and protein levels of p38 MAPK， NF-

B p65， p-p38 MAPK， p-NF-

B p65， and Iba-1 （

0.05，

0.01）， and up-regulated the mRNA and protein levels of I

（

0.05，

0.01） in the hypothalamus.

Conclusion

Chaihu Longgu Mulitang can mitigate anxiety-like behaviors and relieve anxiety in GAD rats by inhibiting the p38 MAPK/NF-

B signaling pathway and reducing the activation of microglia and the levels of pro-inflammatory cytokines in the hypothalamus.

关键词

广泛性焦虑症柴胡加龙骨牡蛎汤炎症反应p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB（p38 MAPK/NF-κB）信号通路小胶质细胞

Keywords

generalized anxiety disorderChaihu Longgu Mulitanginflammatory responsep38 mitogen-activated protein kinase/nuclear factor-κB （p38 MAPK/NF-κB） signaling pathwaymicroglia

references

GORDON B R，MCDOWELL C P，LYONS M，et al.Associations between grip strength and generalized anxiety disorder in older adults： Results from the Irish longitudinal study on ageing［J］.J Affect Disord，2019，255：136-141.

LEONARD K， ABRAMOVITCH A. Cognitive functions in young adults with generalized anxiety disorder［J］. Eur Psychiatry， 2019， 56（20）：1-7.

GAYKEMA R P，DANIELS T E，SHAPIRO N J，et al.Immune challenge and satiety-related activation of both distinct and overlapping neuronal populations in the brainstem indicate parallel pathways for viscerosensory signaling［J］.Brain Res，2009，1294：61-79.

PASSOS I C，VASCONCELOS-MORENO M P，COSTA L G，et al.Inflammatory markers in post-traumatic stress disorder： A systematic review， meta-analysis， and meta-regression［J］.Lancet Psychiatry，2015，2（11）：1002-1012.

SALIM S，ASGHAR M，TANEJA M，et al.Potential contribution of oxidative stress and inflammation to anxiety and hypertension［J］.Brain Res，2011，1404：63-71.

张海洋. 番茄红素对慢性束缚应激大鼠海马损伤的保护作用及机制［D］.哈尔滨：东北农业大学，2021.

CORFDIR C， PELISSOLO A. Drug treatment of anxiety disorders［J］. Rev Prat， 2019， 6（9）：981-984.

李晓娟，刘群，马庆宇，等.焦虑症引起免疫系统异常机制及中医药研究探讨［J］.中华中医药杂志，2016，31（12）：5171-5174.

孙沐炎，楼敏芳，汪军华.柴胡加龙骨牡蛎汤治疗广泛性焦虑症临床观察［J］.浙江中医药大学学报，2019，43（6）：595-598.

张金朋，潘祥宾，潘立民，等.古代经典名方柴胡加龙骨牡蛎汤的历史沿革及临床应用［J］.中医药学报，2023，51（8）：84-90.

王维勋，孙付军，李芳，等.柴胡加龙骨牡蛎汤对焦虑模型大鼠单胺类递质的影响［J］.中药新药与临床药理，2008，19（5）：340-342.

魏伟.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社出版，2010：29.

孙世光.基于“行为组学”模式焦虑动物模型评价技术体系构建［D］.济南：山东中医药大学，2016.

SAHOO S，KHARKAR P S，SAHU N U，et al.Anxiolytic activity of Psidium guajava in mice subjected to chronic restraint stress and effect on neurotransmitters in brain［J］.Phytother Res，2021，35（3）：1399-1415.

DORNELLAS A，BOLDARINE V T，PEDROSO A P，et al.High-fat feeding improves anxiety-type behavior induced by ovariectomy in rats［J］.Front Neurosci，2018，12：557.

RAHMANI G，FARAJDOKHT F，MOHADDES G，et al.Garlic （Allium sativum） improves anxiety- and depressive-related behaviors and brain oxidative stress in diabetic rats［J］.Arch Physiol Biochem，2020，126（2）：95-100.

赵振武，郭蓉娟，顾丽佳，等.焦虑症肝郁化火的动物实验炎症机制研究［J］.中华中医药杂志，2020，35（4）：2010-2013.

HUANG Y，WANG Y，WANG H，et al.Prevalence of mental disorders in China：A cross-sectional epidemiological study［J］.Lancet Psychiatry，2019，6（3）：211-224.

KONNOPKA A， KONIG H. Economic burden of anxiety disorders：A systematic review and meta-analysis［J］. Pharmacoecono-mics， 2020， 38（1）：25-37.

许欣跃，孙庆，张玮.孙庆运用“疏肝行气，调神解郁”腹部推拿法治疗广泛性焦虑症的经验［J］.辽宁中医杂志，2015，42（7）：1200-1202.

董斌，马洋，张天垚.国医大师张学文治疗脑病经验情志病篇之焦虑症［J］.世界中西医结合杂志，2015，10（12）：1663-1666.

顾武军.《伤寒论》少阳病篇评述（2）［J］.南京中医药大学学报：自然科学版，2003，19（1）：1-4.

宋威江，陈光耀，周丽，等.柴胡加龙骨牡蛎汤对大鼠创伤后应激障碍的预防作用［J］.时珍国医国药，2019，30（10）：2317-2319.

王嘉昀，高祖，高琳，等.经方柴胡加龙骨牡蛎汤的研究进展及质量标志物预测分析［J］.中华中医药学刊，2023，41（4）：29-36.

REN X，HAN L，LI Y，et al.Isorhamnetin attenuates TNF-α-induced inflammation， proliferation， and migration in human bronchial epithelial cells via MAPK and NF-κB pathways［J］.Anat Rec （Hoboken），2021，304（4）：901-913.

王雨，王宁宁，李厚聪，等.竹节参总皂苷对BV-2小胶质细胞神经炎症模型p38 MAPK/NF-κB通路的影响［J］.中药新药与临床药理，2022，33（11）：1495-1501.

陈娟，满劲进，李兴义，等.BIN1基因对阿尔茨海默病细胞模型Tau磷酸化及p38 MAPK/NF-κB通路的影响［J］.神经损伤与功能重建，2022，17（12）：696-700.

TóBON-VELASCO J C，CUEVAS E，TORRES-RAMOS M A.Receptor for AGEs （RAGE） as mediator of NF-κB pathway activation in neuroinflammation and oxidative stress［J］.CNS Neurol Disord Drug Targets，2014，13（9）：1615-1626.

金钟晔.逍遥散对慢性束缚应激肝郁脾虚证焦虑模型大鼠下丘脑p38 MAPK信号通路的影响［D］.北京：北京中医药大学， 2016.

SALIM S，CHUGH G，ASGHAR M.Inflammation in anxiety［J］.Adv Protein Chem Struct Biol，2012，88：1-25.

罗煜，吴嘉思，朱正文，等.盐酸巴马汀抑制NF-κB/p38 MAPK信号通路及NLRP3炎症小体抗炎机制研究［J］.中药新药与临床药理，2020，31（7）：762-768.

CHENG Y，SUN F，WANG L，et al.Virus-induced p38 MAPK activation facilitates viral infection［J］.Theranostics，2020，10（26）：12223-12240.

SANJEEWA K，JAYAWARDENA T U，KIM S Y，et al.Sargassum horneri （Turner） inhibit urban particulate matter-induced inflammation in MH-S lung macrophages via blocking TLRs mediated NF-κB and MAPK activation［J］.J Ethnopharmacol，2020，249：112363.

CARNEIRO DE OLIVEIRA P E，ZANIBONI C R，CARMONA I M，et al.Preliminary behavioral assessment of cagemates living with conspecifics submitted to chronic restraint stress in mice［J］.Neurosci Lett，2017，657：204-210.

XIALIN S， TINGWEN Z， YAN Z， et al. Panaxynol attenuates CUMS-induced anxiety and depressive-like behaviors via regulating neuro-transmitters， synapses and the HPA Axis in mice［J］. Food Funct， 2020， 11（2）：1235-1244.

SHAPERO B G，CURLEY E E，BLACK C L，et al.The interactive association of proximal life stress and cumulative HPA axis functioning with depressive symptoms［J］.Depress Anxiety，2019，36（11）：1089-1101.

KIM M H， LEEM Y H. Chronic exercise improves repeated restraint stress-induced anxiety and depression through 5-HT1A receptor and cAMP signaling in hippocampus［J］.J Exerc Nutrition Biochem， 2014， 18（1）：97-104.

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

基于单细胞测序技术分析安宫牛黄丸减轻创伤性颅脑损伤的分子机制

如意珍宝丸干预出血性脑卒中小鼠继发性脑损伤及中枢痛的作用及免疫炎症机制

如意珍宝丸干预卒中后中枢痛小鼠痛觉过敏及脊髓中枢敏化的药效特点及神经炎症机制

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

Chaihu Longgu Mulitang Relieves Generalized Anxiety Disorder in Rats via p38 MAPK/NF-κB Signaling Pathway

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20232037

摘要

Abstract

关键词

Keywords

references