母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用

佘楷杰; 高静静; 巩子汉; 张欢润; 左阳; 杨婧雯; 岳广欣; 梁媛

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20211837

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母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用

药理 | 更新时间：2021-08-18

- 母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用
- Changes of Microglia in Hippocampus of Mice Induced by Maternal Separation with Restraint Stress and Regulatory Effect of Wenyang Jieyu Prescription
- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第18期页码：49-57
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700
  2.开封市中医院，河南开封 475000
  3.北京中医药大学第三附属医院，北京 100029
- 作者简介：
  
  佘楷杰，在读硕士，从事情志病的中医药基础及方证相关研究，E-mail：894543462@qq.com
  * 岳广欣，研究员，博士生导师，从事情志病中医药防治基础及方证相关研究，E-mail：yuegx73@hotmail.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(81573846)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211837
  中图分类号： R2-0;R749.7+2;R33
- 收稿日期：2021-05-12，
  
  网络出版日期：2021-07-27，
  
  纸质出版日期：2021-09-20
- 稿件说明：
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佘楷杰,高静静,巩子汉等.母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(18):49-57.

SHE Kai-jie,GAO Jing-jing,GONG Zi-han,et al.Changes of Microglia in Hippocampus of Mice Induced by Maternal Separation with Restraint Stress and Regulatory Effect of Wenyang Jieyu Prescription[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(18):49-57.
佘楷杰,高静静,巩子汉等.母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(18):49-57. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211837.

SHE Kai-jie,GAO Jing-jing,GONG Zi-han,et al.Changes of Microglia in Hippocampus of Mice Induced by Maternal Separation with Restraint Stress and Regulatory Effect of Wenyang Jieyu Prescription[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(18):49-57. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211837.

摘要

目的

观察母婴分离/束缚应激诱发焦虑抑郁小鼠海马小胶质细胞激活和白细胞介素-1

（IL-1

），白细胞介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子-

（TNF-

）表达情况，探讨温阳解郁方抗焦虑抑郁的机制。

方法

84只雄性C57BL仔鼠于出生后第0天（PD0）随机分为空白组、束缚应激组和造模组，造模组采取母婴分离结合束缚应激制备焦虑抑郁模型，将造模组按随机数字表法分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组。在离乳第21天（PD21）至成年第90天（PD90），空白组、束缚应激组和模型组饲喂正常饲料，其余饲喂药混饲料（温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组用药剂量分别为5.85，12.03，16.71 g·kg

-1

及2.60 mg·kg

-1

）。采用旷场实验，O迷宫和社会交互实验评估模型组小鼠焦虑抑郁状态；免疫组化法（IHC）观察海马小胶质细胞及离子钙接头蛋白-1（Iba-1）表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-1

，IL-6，TNF-

，Iba-1，糖皮质激素受体（GR）mRNA表达水平。

结果

与空白组比较，模型组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著减少（

0.01），开臂活动时间与活动总路程明显减少（

0.05，

0.01），训练探察时间和辨别探查时间显著增加（

0.01），Iba-1蛋白及mRNA表达，IL-1

β，

IL-6，TNF-

mRNA表达水平显著升高（

0.01），GR mRNA表达水平显著降低（

0.01），IHC结果显示小胶质细胞的过度激活。与模型组比较，温阳解郁方及氟西汀组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著上升（

0.01），开臂活动时间显著上升（

0.01），训练探察时间和辨别探查时间明显降低（

0.05，

0.01）；Iba-1蛋白及mRNA表达，IL-1

，IL-6，TNF-

mRNA表达水平明显降低（

0.05，

0.01），GR mRNA表达水平显著上升（

0.01），IHC结果表明小胶质细胞的形态恢复；温阳组和解郁组小鼠开臂活动时间显著上升（

0.01），辨别探查时间明显降低（

0.05），Iba-1蛋白及mRNA表达，IL-6 mRNA表达水平明显降低（

0.05，

0.01）；温阳组小鼠GR mRNA表达水平明显上升（

0.05），TNF-

mRNA表达水平明显降低（

0.05）；解郁组小鼠5 min运动总路程显著上升（

0.01），训练探察时间明显降低（

0.05），IL-1

mRNA表达水平明显降低（

0.05），IHC结果表明两组小胶质细胞有所恢复。

结论

温阳解郁方的综合疗效和药理作用优于温阳方和解郁方，其作用机制可能通过抑制母婴分离/束缚应激小鼠海马小胶质细胞的激活，降低IL-1

，IL-6，TNF-

等细胞因子的表达，增加海马GR表达，从而改善小鼠的焦虑抑郁样行为。

Abstract

Objective

To observe the activation of microglia in hippocampus of depressed and anxious mice induced by maternal separation with acute restraint stress and the expression of interleukin-1

（IL-1

），interleukin-6（IL-6），tumor necrosis factor-

（TNF-

）， investigating the mechanism of Wenyang Jieyu prescription in treating anxiety and depression.

Method

Eighty four male C57BL offspring were randomly divided into control group， acute restraint stress group and model group on postnatal day 0（PD0）. Maternal separation combined with acute restraint stress was used to prepare anxious and depressed model mice， dividing the model mice into model group， Wenyang， Jieyu， Wenyang Jieyu and fluoxetine group according to random number table method. During the period of PD21-PD90， the control， acute restraint stress and model mice were fed with normal diet， with the other groups fed with corresponding medicine mixed diet. The Wenyang， Jieyu and Wenyang Jieyu groups were given 5.85， 12.03 and 16.71 g·kg

-1

·d

-1

respectively. The fluoxetine group was given 2.60 mg·kg

-1

·d

-1

. Open field， zero maze test and social interaction tests were used to evaluate the anxiety and depression of model mice. The expression of Iba-1 in hippocampal microglia was detected by immunohistochemistry（IHC）. The mRNA expression of IL-1

， IL-6， TNF-

， Iba-1 and glucocorticoid receptor（GR）were detected by Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Result

Compared with the control group， total movement distance and time spent in central zone in 5 min of the model mice significantly decreased（

0.01）， time spent in opened arm and total movement distance decreased significantly（

0.05，

0.01）， investigation time during testing and training increased significantly（

0.01）. The expression of Iba-1 protein and mRNA，IL-1

，IL-6，TNF-

mRNA significantly increased（

0.01）， the expression levels of GR mRNA significantly decreased（

0.01）. The result of IHC staining showed that microglia were over activated. Compared with the model group， total movement distance and time spent in central zone in 5 min of mice in the Wenyang Jieyu and fluoxetine group significantly increased（

0.05，

0.01）.Time spent in opened arm significantly increased（

0.01）. Investigation time during testing and training significantly decreased（

0.05，

0.01）. The expression of Iba-1 protein and mRNA，IL-1

，IL-6，TNF-

mRNA significantly decreased（

0.05，

0.01）. The expression of GR mRNA increased significantly（

0.05，

0.01）. IHC staining showed the microglia recovered. Time spent in opened arm of mice in the Wenyang group and Jieyu group significantly increased （

0.01）， time spent investigating during testing decreased significantly （

0.05）， the expression levels of Iba-1 protein and mRNA，IL-6 mRNA significantly decreased （

0.05，

0.01）. The expression of GR mRNA of mice in the Wenyang group significantly increased （

0.05）， the expression of TNF-

mRNA significantly decreased （

0.05）. Total movement distance of mice in the Jieyu group increased significantly （

0.01）， time spent investigating during training decreased significantly （

0.05），the expression level of IL-1

mRNA significantly decreased （

0.05）. IHC staining showed that microglia recovered partly in both groups.

Conclusion

The comprehensive curative effect and pharmacological action of Wenyang Jieyu prescription were better than Wenyang prescription and Jieyu prescription. Wenyang Jieyu prescription can treat anxiety and depression in maternal separation and acute restraint stress mice， its possible mechanism may be related to the decreased activation of microglia， down-regulation of IL-1

，IL-6，TNF-

expression and up-regulation of GR expression.

关键词

Keywords

references

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