Material Basis of Anti-Inflammatory Efficacy and Mechanism of Action of Bushen Tongdu Prescription Based on UPLC-LTQ-Orbitrap-MS and Network Pharmacology

RONG Yan; JING Lulu; HOU Hongping; WANG Huijun; CHEN Lihua; CHEN Yunxin; LI Liang; LIN Li; LUO Xiaoqin; ZHAO Haiyu; WEI Xiaolu

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20252344

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Material Basis of Anti-Inflammatory Efficacy and Mechanism of Action of Bushen Tongdu Prescription Based on UPLC-LTQ-Orbitrap-MS and Network Pharmacology

更新时间：2026-04-28

- Material Basis of Anti-Inflammatory Efficacy and Mechanism of Action of Bushen Tongdu Prescription Based on UPLC-LTQ-Orbitrap-MS and Network Pharmacology
  增强出版
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 32, Issue 10, Pages: 152-161(2026)
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院中药研究所，道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室，北京 100700
  2.北京工商大学轻工科与工程学院，北京 100048
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20252344
  CLC： R277;R285;R289
- Received：08 September 2025，
  
  Revised：2025-12-03，
  
  Accepted：04 December 2025，
  
  Online First：09 December 2025，
  
  Published：20 May 2026
- 稿件说明：
移动端阅览
荣妍,井露露,侯红平等.基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS和网络药理学探讨补肾通督方抗炎药效物质基础及作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2026,32(10):152-161.

RONG Yan,JING Lulu,HOU Hongping,et al.Material Basis of Anti-Inflammatory Efficacy and Mechanism of Action of Bushen Tongdu Prescription Based on UPLC-LTQ-Orbitrap-MS and Network Pharmacology[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2026,32(10):152-161.
荣妍,井露露,侯红平等.基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS和网络药理学探讨补肾通督方抗炎药效物质基础及作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2026,32(10):152-161. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20252344.

RONG Yan,JING Lulu,HOU Hongping,et al.Material Basis of Anti-Inflammatory Efficacy and Mechanism of Action of Bushen Tongdu Prescription Based on UPLC-LTQ-Orbitrap-MS and Network Pharmacology[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2026,32(10):152-161. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20252344.

摘要

目的

探讨补肾通督方发挥抗炎作用的药效物质基础及作用机制。

方法

采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-LTQ-Orbitrap-MS）技术系统鉴定补肾通督方的化学成分及其体内入血成分。运用网络药理学筛选该方入血活性成分与潜在靶点，构建核心靶点PPI网络，交集靶点富集分析，利用分子对接验证关键成分-靶点的结合能力。使用Tg（mpx：GFP）转基因斑马鱼建立炎症模型进行体内验证，将受精后3 d（3 dpf）斑马鱼幼鱼随机分为空白组、模型组、阳性药乙酸地塞米松组（75 μmol·L

-1

），以及补肾通督方低、中、高质量浓度组（500、1 000、2 000 mg·

-1

），荧光显微镜下观察卵黄囊部位中性粒细胞分布和数量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-

B（NF-

B）信号通路关键基因及炎症因子白细胞介素（IL）-1

、IL-6、肿瘤坏死因子-

（TNF-

）的mRNA表达水平。

结果

补肾通督方中鉴定得到120个化学成分，通过血清药物化学方法确认出26个原型成分。网络药理学筛选出类风湿关节炎（RA）与入血成分共有227个交集靶点，推测其作用机制是伪马钱子碱、番木鳖次碱、芥子碱、地黄苦苷、肉桂醇苷和甲基麻黄碱作用于蛋白激酶B1（Akt1）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF）、TLR4、丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）和磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亚单位

（PIK3CA）核心靶点，调节TLR4和NF-

B等多条信号通路，发挥抗炎作用。斑马鱼体内验证表明，补肾通督方的最大耐受质量浓度为2 000 mg·L

-1

。与空白组比较，模型组斑马鱼卵黄囊区中性粒细胞浸润数量显著升高（

0.01），TLR4、MyD88、NF-

B、TNF-

、IL-6、IL-1

mRNA表达量明显增加（

0.05，

0.01）；与模型组比较，补肾通督方中、高质量浓度组及乙酸地塞米松组明显降低中性粒细胞数量（

0.05，

0.01），低剂量组差异无统计学意义，TLR4、MyD88、NF-

B和TNF-

、IL-6、IL-1

mRNA表达量明显下调（

0.05，

0.01）。

结论

初步鉴定了补肾通督方的药效物质基础，明确该方通过TLR4/MyD88/NF-

B信号通路发挥抗炎作用，为后续临床应用提供了科学实验依据。

Abstract

Objective

This paper aims to investigate the material basis of the anti-inflammatory efficacy and mechanism of action of Bushen Tongdu prescription （BSTDP）.

Methods

The chemical components of BSTDP and its blood-absorbed components

in vivo

were systematically identified by using ultra-performance liquid chromatography-linear ion trap-electrostatic field orbitrap high-resolution mass spectrometry （UPLC-LIT-Orbitrap-MS）. Network pharmacology was employed to screen blood-absorbed bioactive components and potential targets of this formula. A protein-protein interaction （PPI） network of core targets was constructed to conduct enrichment analysis. Molecular docking was further uti

lized to verify the binding affinity between key components and targets. The inflammatory model was established and verified

in vivo

by using a transgenic zebrafish Tg （mpx： GFP）. At three days post-fertilization （3 dpf）， larvae of zebrafish were randomly assigned to blank group， model group， positive drug dexamethasone acetate group （75 μmol·L

-1

）， and BSTDP groups with low， medium， and high doses （500， 1 000， and 2 000 mg·L

-1

）. The distribution and quantity of neutrophils in the yolk sac region were observed under a fluorescence microscope. The mRNA expression levels of key genes in the toll-like receptor 4 （TLR4）/myeloid differentiation factor 88 （MyD88）/nuclear factor kappa-B （NF-

B） signaling pathway and inflammatory factors including interleukin （IL）-1

，

IL-6， and tumor necrosis factor-

（TNF-

） were detected by Real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Results

A total of 120 chemical components were identified in BSTDP， among which 26 original components were confirmed by using serum pharmacochemical methods. A total of 227 common targets linking rheumatoid arthritis （RA） and the blood-absorbed components were screened by network pharmacology. It is suggested that pseudobrucine， vomicine， sinapine， rehmannioside， cinnamyl alcohol glycoside， and methylephedrine exert anti-inflammatory effects by acting on core targets including protein kinase B1 （Akt1）， signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3）， tumor necrosis factor （TNF）， TLR4， mitogen-activated protein kinase 14 （MAPK14）， and phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit

（PIK3CA）， thereby modulating multiple signaling pathways such as TLR4 and NF-

In vivo

verification in zebrafish demonstrates that the maximum tolerable concentration of Bushen Tongdu Formula is 2 000 mg·L

-1

. Com

pared to those in the blank group， zebrafish in the model group showed a significantly higher number of neutrophils in the yolk sac region （

0.01） and rising mRNA levels of TLR4， MyD88， NF-

B， TNF-

， IL-6， and IL-1

（

0.01）. Compared to that in the model group， the number of neutrophils was significantly reduced in BSTDP groups with medium and high doses， as well as the dexamethasone acetate group （

0.05，

0.01）. There was no statistically significant difference in the low dose group. The mRNA expression levels of TLR4， MyD88， NF-

B， TNF-

， IL-6， and IL-1

were significantly down-regulated （

0.05，

0.01）.

Conclusion

This paper identifies the material basis of the efficacy of BSTDP， demonstrating that the formula can exert an anti-inflammatory effect through the TLR4/MyD88/NF-

B signaling pathway. The results provide scientific experimental evidence for its further clinical application.

关键词

Keywords

references

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