基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响

李钟彤; 张亚萍; 游琛; 李青青; 王颖杰; 区思雯; 薛桃妹; 张楚琪

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20241539

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基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响

药理 | 更新时间：2025-03-06

- 基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响
- Zishen Tiaogan Prescription Treats Diminished Ovarian Reserve in Rats via Keap1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2025年31卷第7期页码：72-80
- 作者机构：
  
  1.广西中医药大学，南宁 530000
  2.广西中医药大学附属瑞康医院，南宁 530000
- 作者简介：
  
  李钟彤，在读硕士，从事中医药治疗妇科疾病临床基础研究，E-mail：384208047@qq.com
  张亚萍，博士，教授，从事中西医结合防治妇科疾病研究，E-mail：1067545641@qq.com
- 基金信息：
  
  广西自然科学基金项目(2024GXNSFAA010238);桂派杏林青年英才计划项目(2022C029);“西部之光”访问学者接收培养项目(教人司〔2022〕325号);第五批全国中医临床优秀人才研修项目(国中医药人教函〔2022〕239号);全国名老中医药专家传承工作室建设项目(国中医药人教函〔2022〕75号);桂派中医药传承创新团队项目(2022B002)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20241539
  中图分类号： R271;R289;R242
- 收稿：2024-06-19，
  
  录用：2024-09-18，
  
  网络首发：2024-09-20，
  
  纸质出版：2025-04-05
- 稿件说明：
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李钟彤,张亚萍,游琛等.基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(07):72-80.

LI Zhongtong,ZHANG Yaping,YOU Chen,et al.Zishen Tiaogan Prescription Treats Diminished Ovarian Reserve in Rats via Keap1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(07):72-80.
李钟彤,张亚萍,游琛等.基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(07):72-80. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241539.

LI Zhongtong,ZHANG Yaping,YOU Chen,et al.Zishen Tiaogan Prescription Treats Diminished Ovarian Reserve in Rats via Keap1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(07):72-80. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241539.

摘要

目的

观察滋肾调肝方改善卵巢储备功能下降（DOR）模型大鼠氧化应激损伤的作用，并探讨Kelch样ECH关联蛋白1（Keap1）/核因子E

相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路在其中的作用机制。

方法

将48只雌性SD大鼠随机分为正常组12只，造模组36只，造模组大鼠连续每日皮下注射半乳糖（350 mg·kg

-1

）联合制动应激法建立模型，造模28 d后将正常组和造模组各处死6只验证模型。模型验证成功后，将造模组分为模型组，戊酸雌二醇（0.09 mg·kg

-1

）组和滋肾调肝方低、中、高剂量（6.39、12.78、25.56 g·kg

-1

）组，以6只/组进行相应干预，持续4周。苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠动情周期及卵巢病理形态学变化，计算大鼠卵巢脏器指数；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中性激素及氧化应激相关指标的变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测卵巢组织中Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA表达情况；免疫组化（IHC）检测卵巢组织中超氧化物歧化酶2（SOD2）蛋白的阳性表达。

结果

与正常组比较，模型组大鼠卵巢中生长卵泡明显减少、卵泡颗粒层排列松散；大鼠卵巢指数和血清抗缪勒管激素（AMH）、雌二醇（E

）水平显著下降，黄体生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）水平均显著升高（

0.01）；超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平显著下降（

0.01），丙二醛（MDA）水平显著升高（

0.01），卵巢组织中Keap1蛋白及mRNA表达显著增加（

0.01），Nrf2、HO-1蛋白表达显著减少（

0.01），Nrf2 mRNA表达明显降低（

0.05），HO-1 mRNA表达显著下降（

0.01），SOD2蛋白阳性表达显著减少（

0.01）；与模型组比较，戊酸雌二醇组及滋肾调肝方低、中、高剂量组卵巢指数均明显增加（

0.05，

0.01），血清中AMH、E

水平显著升高（

0.01），FSH、LH水平显著降低（

0.01）；卵巢内生长卵泡数量增多，血清中SOD活性增强，CAT活力升高，GSH含量增加，MDA含量减少（

0.05，

0.01）；卵巢组织中Keap1蛋白及mRNA表达显著减少（

0.01），Nrf2蛋白表达显著增加（

0.01），HO-1蛋白表达水平明显升高（

0.05，

0.01），Nrf2、HO-1 mRNA表达水平显著上调（

0.01），SOD2蛋白的阳性表达显著增加（

0.01）。

结论

滋肾调肝方能够调节血清激素水平，降低Keap1的表达水平，上调卵巢组织中Nrf2、HO-1、SOD2因子的表达，增强DOR大鼠卵巢的抗氧化能力，减轻卵巢过氧化损伤，改善卵巢储备功能，其机制可能与Keap1/Nrf2/HO-1通路相关。

Abstract

Objective

To observe the effect of Zishen Tiaogan prescription on the oxidative stress injury in the rat model of diminished ovarian reserve （DOR） and explore the role of the Kelch-like ECH-associated protein 1 （Keap1）/nuclear factor E

-related factor 2 （Nrf2）/heme oxygenase-1 （HO-1） signaling pathway.

Methods

Forty-eight female SD rats were randomly assigned into a normal group （

=12） and a modeling group （

=36）. The rats in the modeling group received subcutaneous injection of galactose （350 mg·kg

-1

） combined with immobilization stress daily. After 28 days of modeling， 6 rats in the normal group and 6 rats in the modeling group were sacrificed to examine the modeling results. The successfully modeled rats were assigned into model， estradiol valerate （0.09 mg·kg

-1

）， and low-， medium-， and high-dose （6.39， 12.78， 25.56 g·kg

-1

， respectively） Zishen Tiaogan prescription groups. The intervention lasted for 4 weeks with 6 animals per group. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the estrous cycle and the pathological changes in the ovarian tissue. The ovarian index was calculated. Enzyme-linked immunosorbent assay was employed to measure the serum levels of sex hormones and oxidative stress-related indexes. Western blot and real-time PCR were employed to determine the protein and mRNA levels， respectively， of Nrf2， Keap1 and HO-1 in the ovarian tissue. The positive expression of superoxide dismutase 2 （SOD2） in the ovarian tissue was detected by immunohistochemistry （IHC）.

Results

Compared with the normal group， the model group showed reduced follicles in the ovary， loose arrangement of the follicle granule layer， declined levels of anti-Mullerian hormone （AMH） and estradiol （E

） in the serum， elevated levels of luteinizing hormone （LH） and follicle-stimu

lating hormone （FSH）（

0.01）， lowered levels of superoxide dismutase （SOD）， catalase （CAT）， and glutathione （GSH）（

0.01）， and increased accumulation of malondialdehyde （MDA）（

0.01）. In addition， the modeling led to up-regulated protein and mRNA levels of Keap1 （

0.01）， the expression of Nrf2 and HO-1 protein was significantly decreased （

0.01）， the mRNA expression of Nrf2 was significantly decreased （

0.05）， the mRNA expression of HO-1 was significantly decreased （

0.01）， in the ovarian tissue. Compared with model group， the estradiol valerate and low-， medium-， and high-dose Zishen Tiaogan prescription groups showed increases in the ovarian index （

0.01） and serum E

and AMH levels （

0.01）， declined levels of FSH and LH （

0.01）， increased follicles in the ovary， elevated levels of SOD， CAT， and GSH， and reduced accumulation of MDA （

0.05，

0.01）. Furthermore， these groups showcased down-regulated protein and mRNA levels of Keap1 （

0.01）， the expression of Nrf2 protein was significantly increased （

0.01）， the expression level of HO-1 protein was increased （

0.05，

0.01）， and increased positive expression of SOD2 （

0.01）.

Conclusion

Zishen Tiaogan prescription can regulate the serum levels of hormones， down-regulate the expression of Keap1， up-regulate the expression of Nrf2， HO-1， and SOD2， enhance the antioxidant capacity， and reduce the peroxidation damage in the ovarian tissue to improve the ovarian reserve function in the rat model of DOR. High-dose Zishen Tiaogan prescription demonstrated the best effect and the mechanism is associated with the regulation of the Keap1/Nrf2/HO-1 pathway.

关键词

Keywords

references

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