Eupatilin Inhibits Proliferation， Invasion， and Metastasis of Non-small Cell Lung Cancer via EZH2/H3K27me3 Signaling Pathway

XU Bo; YU Yihan; HU Linling; JIANG Bo; QI Yu; YUAN Shasha; FAN Yiling; ZHANG Jixian; MIAO Qing

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20251722

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Eupatilin Inhibits Proliferation， Invasion， and Metastasis of Non-small Cell Lung Cancer via EZH2/H3K27me3 Signaling Pathway

更新时间：2026-04-28

- Eupatilin Inhibits Proliferation， Invasion， and Metastasis of Non-small Cell Lung Cancer via EZH2/H3K27me3 Signaling Pathway
  增强出版
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 32, Issue 10, Pages: 58-69(2026)
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院西苑医院，北京 100091
  2.中国中医科学院博士后流动站，北京 100700
  3.湖北省中西医结合医院，武汉 430015
  4.湖北中医药大学，武汉 430065
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20251722
  CLC： R256;R563;R285
- Received：20 June 2025，
  
  Revised：2025-07-23，
  
  Accepted：23 July 2025，
  
  Online First：31 July 2025，
  
  Published：20 May 2026
- 稿件说明：
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徐波,余贻汉,胡林凌等.异泽兰黄素通过EZH2/H3k27me3信号通路抑制非小细胞肺癌增殖和侵袭转移[J].中国实验方剂学杂志,2026,32(10):58-69.

XU Bo,YU Yihan,HU Linling,et al.Eupatilin Inhibits Proliferation， Invasion， and Metastasis of Non-small Cell Lung Cancer via EZH2/H3K27me3 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2026,32(10):58-69.
徐波,余贻汉,胡林凌等.异泽兰黄素通过EZH2/H3k27me3信号通路抑制非小细胞肺癌增殖和侵袭转移[J].中国实验方剂学杂志,2026,32(10):58-69. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20251722.

XU Bo,YU Yihan,HU Linling,et al.Eupatilin Inhibits Proliferation， Invasion， and Metastasis of Non-small Cell Lung Cancer via EZH2/H3K27me3 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2026,32(10):58-69. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20251722.

摘要

目的

探讨异泽兰黄素（Eup）通过zeste基因增强子同源物2/组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（EZH2/H3k27me3）信号通路抑制非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和侵袭转移的机制。

方法

体内实验中通过构建H1299裸鼠皮下成瘤动物模型，评估Eup在体内的抗NSCLC的作用，并采用免疫组化（IHC-P）和检测增殖及侵袭转移相关蛋白：增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9及血管内皮生长因子A（VEGFA）表达的影响。体外细胞实验中，采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）检测不同浓度Eup（0~200 μmol·L

-1

）干预下H1299细胞的活性，筛选合适药物浓度。通过平板克隆、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）检测Eup对H1299细胞

增殖的影响；通过划痕实验、侵袭实验评估Eup对H1299细胞迁移、侵袭的影响；通过人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成实验评估Eup对血管生成的影响；运用转录组学筛选Eup对H1299细胞的作用靶点和探究其主要功能，并进行分子对接及分子动力学模拟预测药物分子Eup与作用靶点之间的结合能力及结合状态；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Eup对EZH2/H3K27me3信号通路蛋白及增殖、侵袭转移相关蛋白PCNA、MMP-2、MMP-9及VEGFA表达的影响。

结果

在裸鼠皮下成瘤动物模型中，与模型组比较，Eup干预组呈剂量依赖性抑制H1299细胞异种移植瘤体生长，且抑瘤率显著升高（

0.05）；IHC-P结果显示，与模型组比较，Eup高剂量组在体内显著抑制了体内PCNA、MMP-2、MMP-9和VEGFA蛋白的表达（

0.05）。在体外细胞实验中，与空白组比较，Eup干预组呈浓度依赖性地抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和转移；进一步通过转录组学分析显示与空白组比较，Eup干预组可显著下调EZH2的表达且作用功能与抑制肿瘤转移相关。分子对接和分子动力学模拟也显示出药物小分子与EZH2具有较强的结合能力及结合的稳定性较好。Western blot检测显示与模型组比较，Eup干预组在体内外呈剂量依赖性显著抑制通路蛋白EZH2、H3K27me3及增殖、侵袭转移相关蛋白PCNA、MMP-2、MMP-9及VEGFA表达（

0.05），在体外细胞实验中，与空白组比较质粒转染过表达EZH2可部分逆转Eup对H1299细胞中增殖及侵袭转移关键蛋白的抑制作用。

结论

Eup在体内外均可有效抑制H1299细胞增殖、迁移和侵袭，其机制可能与抑制EZH2/H3K27me3信号通路并抑制增殖及侵袭转移相关蛋白PCNA、MMP-2、MMP-9、VEGFA的表达有关；异泽兰黄素可能是抑制NSCLC增殖及侵袭转移的潜在活性药物。

Abstract

Objective

To investigate the mechanisms by which eupatilin （Eup） inhibits proliferation， invasion， and metastasis of non-small cell lung cancer （NSCLC） through the enhancer of zeste homolog 2/histone H3 lysine 27 trimethylation （EZH2/H3K27me3） signaling pathway.

Methods

In vivo

， a subcutaneous xenograft tumor model was established in nude mice using H1299 cells to evaluate the anti-NSCLC effects of Eup. Immunohistochemistry （IHC-P） was used to detect the expression of proliferation- and invasion/metastasis-related proteins， including proliferating cell nuclear antigen （PCNA）， matrix metalloproteinase-2 （MMP-2）， matrix metalloproteinase-9 （MMP-9）， and vascular endothelial growth factor A （VEGFA）.

In vitro

， cell counting kit-8 （CCK-8） assays were performed to determine the viability of H1299 cells treated with different concentrations of Eup （0-200 μmol·L

-1

） and to select appropriate concentrations. Colony formation a

nd 5-ethynyl-2′-deoxyuridine （EdU） assays were used to evaluate cell proliferation. Wound healing and invasion assays were conducted to assess cell migration and invasion. Human umbilical vein endothelial cell （HUVEC） angiogenesis assays were used to evaluate the effects of Eup on angiogenesis. Transcriptomic analysis was performed to identify the targets of Eup in H1299 cells and to explore its major functions. Molecular docking and molecular dynamics simulations were conducted to predict the binding affinity and interaction stability between Eup and its target proteins. Western blot was used to detect the effects of Eup on the expression levels of EZH2/H3K27me3 pathway-related proteins and proliferation- and invasion/metastasis-related proteins， including PCNA， MMP-2， MMP-9， and VEGFA.

Results

In the subcutaneous xenograft model， compared with the model group， Eup treatment dose-dependently inhibited the growth of H1299 xenograft tumors， and the tumor inhibition rate was significantly increased （

0.05）. IHC-P results showed that， compared with the model group， high-dose Eup significantly reduced the expression levels of PCNA， MMP-2， MMP-9， and VEGFA

in vivo

（

0.05）.

In vitro

， compared with the control group， Eup inhibited the proliferation， invasion， and metastasis of NSCLC cells in a concentration-dependent manner. Transcriptomic analysis further showed that， compared with the control group， Eup significantly downregulated EZH2 expression， and its functional effects were associated with inhibition of tumor metastasis. Molecular docking and molecular dynamics simulations indicated that Eup exhibited strong binding affinity with EZH2 and stable interactions. Western blot results demonstrated that， compared with the model group， Eup significantly inhibited， in a dose-dependent manner， the expression levels of EZH2， H3K27me3， and proliferation- and invasion/metastasis-related proteins （PCNA， MMP-2， MMP-9， and

VEGFA） in both

in vivo

and

in vitro

experiments （

0.05）.

In vitro

， compared with the control group， overexpression of EZH2 via plasmid transfection partially reversed the inhibitory effects of Eup on the expression of key proteins involved in proliferation and invasion/metastasis in H1299 cells.

Conclusion

Eup effectively inhibits the proliferation， migration， and invasion of H1299 cells both

in vivo

and

in vitro

. The underlying mechanism may be related to inhibition of the EZH2/H3K27me3 signaling pathway and downregulation of proliferation- and invasion/metastasis-related proteins， including PCNA， MMP-2， MMP-9， and VEGFA. Eup may serve as a potential therapeutic agent for suppressing proliferation and invasion/metastasis in NSCLC.

关键词

Keywords

references

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